Схема 1. Классификация аутоиммунных процессов

	Аутоиммунные процессы
Гомеостатические	Патологические
Санитарные	Регуляторные
			Аутоим-мунные болезни	Болезни с аутоиммун-ными нарушениями
	Иммунной системы	Иммуно-эндокринные

2. СВЕДЕНИЯ О ПАТОГЕНЕЗЕ:

Патологические аутоиммунные процессы развиваются на основе физиологических, а не являются принципиально новыми реакциями. По-видимому, неадекватной деятельностью «санитарных» аутоиммунных процессов вызваны такие органонеспецифических заболеваний, как СКВ, полимиозит, первичный билиарный цирроз и др., а также вторичные аутоиммунные поражения при ожоговой болезни, постинфарктный синдром и т.д. Вышедшие из-под контроля регуляторные аутоиммунные процессы, очевидно, приводят к развитию органоспецифических аутоиммунных заболеваний: аутоиммунные гемоцитопении, эндокринопатии и др.

Основные типы аутоиммунных процессов могут быть связаны с:

- ответом на аутоантигены, естественная толерантность к которым отсутствует (слабая экспрессия, недоступность для лимфоцитов или отсутствие их презентации Ja+ A-клетками;

- обходом имеющейся аутотолерантности путем кооперации Т-хелперов, реагирующим на "чужое", с В- клетками, реагирующими на аутоантигены;

- истинная отмена толерантности к аутоантигенам

Развитие патологических аутоиммунных реакций может обусловливаться следующими механизмами повреждения:

- Комплемент- зависимый цитолиз;

- Индукция антителозависимой клеточной цитотоксичности;

- Взаимодействие с клеточными рецепторами для естественных лигандов (активация или блокада действия эндогенных регуляторов);

- Изменение функциональной активности клеток различных органов и тканей;

- Индукция апоптоза (запрограмированной клеточной смерти);

- Иммунокомплексные реакции (нарушение клиренса и отложение комплексов в тканях, прежде всего в сосудах микроциркулярного русла).

Для многих аутоиммунных болезней характерна смена реакций гиперчувствительности немедленного типа в фазе обострения на реакцию гиперчувствительности замедленного типа в фазе ремиссии. Особенностью аутоиммунных поражений является нередкое формирование лимфоидных фолликулов в органах- мишенях.

Существует ряд концепций механизма развития патологических аутоиммунных процессов, в которых на первый план выдвигаются изменения либо клеток (органов) - мишеней, либо первичные сдвиги в самой иммунной системе.

Сторонники первой группы концепций придают большое значение избыточному повышению концентрации аутоантигенов, циркулирующих в крови и находящихся на клеточных мембранах, а также демаскировке внутриклеточных антигенов. Предполагается важная роль утраты толерантности к антигенам «забарьерных» тканей: антигенам миелина нервной системы, передней камеры глаза и т.д. Существенная роль в патогенезе системной красной волчанки (СКВ) отводится нарушениям элиминации аутоантигенов и утилизации иммунных комплексов макрофагальной системой. Обсуждается роль нарушений экспрессии аутоантигенов клеточных мембран в патогенезе аутоиммунных болезней щитовидной железы, сахарного диабета 1 типа, первичного билиарного цирроза. Клетки- мишени при этих заболеваниях несут на мембране антигены II класса системы HLA, их экспрессия увеличивается под влиянием вирусов, и поэтому эти клетки способны представлять антиген без участия макрофагов. Все больше подтверждения находит концепция перекрестно-реагирующих антигенов (таблица 1).

Таблица 1. Перекрестно реагирующие антигены

Ряд патогенных микроорганизмов, таких как микоплазмы, гемолитический стрептококк, стафилококк, некоторые вирусы способны выделять так называемые суперантигены - иммуногенные белки способные связываться без предварительного захвата макрофагами с молекулами HLA 1 или 2 класса и стимулировать «запрещенные» аутореактивные клоны Т- лимфоцитов.

Дисфункции самой иммунной системы с избыточным реагированием на ауто- и перекрестно реагирующие антигены придается не меньшее значение. Исключительное место принадлежит концепции F. Burnet, отводящей ключевую роль мутациям лимфоцитов с нарушением элиминации возникающих аутоагрессивных клонов. В настоящее время аутоиммунные болезни рассматриваются ни как гиперфункция иммунной системы, а как её дисфункция, связанная с недостаточностью регуляторных механизмов, т.е. как своеобразный иммунный дефицит. Имеет значение генетически детерминированный высокий и низкий иммунный ответ на определенные антигены. При низком ответе на один антиген и высоком - на другие создаются условия для персистенции микроорганизмов в тканях, появления комплексных и модифицированных антигенов, истощение супрессорных механизмов.

Иммунокомпетентные клетки могут стать мишенью для вирусной атаки. Результатом является нарушение их функциональной активности, цитотоксический эффект, либо поликлональная активация лимфоцитов (например: при инфицировании вирусом Эпштейн - Барр), приводящая к нарушению иммунорегуляции и появлению избытка аутоантител.

Важное значение придается нарушениям в системе регуляторных Т-лимфоцитов, в частности, абсолютному или относительному дефициту Т-супрессоров. При этом причиной дисфункции системы регуляторных Т-лимфоцитов может служить врожденные или приобретенные нарушения деятельности тимуса.

3. АУТОИММУННЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ

Заболевания, в патогенезе которых патологические аутоиммунные процессы играют ведущую роль определяются как аутоиммунные болезни. В целом, развитие аутоиммунных заболеваний включает три основных группы факторов: предрасполагающие, инициирующие и способствующие (табл. 2).

Среди предрасполагающих факторов основное значение имеют генетические особенности (табл. 3). За исключением анкилозирующего спондилоартрита и близких состояний, связанных с носительством HLA –B27, все остальные аутоиммунные заболевания ассоциируются с определенными гаплотипами HLA класса 2 или молекулами главного комплекса гистосовместимости класса 3.

Таблица 2. Патогенез аутоиммунных болезней

Так, 80 – 90 % больных ревматоидным артритом являются носителями HLA – DR1 или одного из вариантов HLA DR4 (DW4, DW14, DW15). Дефект гена, контролирующего синтез С4 компонента комплемента обнаруживается у 50 – 80 % больных СКВ.

Таблица 3. Роль генетических факторов в развитии аутоиммунных болезней.

4. КЛАССИФИКАЦИЯ АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Классификация аутоиммунных заболеваний до сих пор остается весьма трудной и спорной проблемой. Большинство авторов делят аутоиммунные болезни в зависимости от характера аутоантигена, механизмов аутоиммунизации, степени доказанности её роли в патогенезе заболевания. Принято различать болезни, аутоиммунных характер которых не вызывает сомнений: СКВ, Ревматоидный артрит, аутоиммунные гемоцитопении, эндокринопатии, коагулопатии, ряд болезней ЦНС и глаз и др.); наиболее вероятен (первичный билиарный цирроз, узелковый периартериит, склеродермия, полимиозит и т.д.); лишь предполагается (дислипопротеидемии, эпилепсия, шизофрения, паркинсонизм и др.). Особо выделяют антительные болезни рецепторов (тиреотоксикоз, сахарный диабет 2 тип, миастения гравис, рассеяный склероз и др.). Выделяют аутоиммунные болезни с аутоиммунизацией, как основным фактором патогенеза (первичные) и заболевания с вторичными аутоиммунными нарушениями. Основной рабочей классификацией является деление на органоспецифические и органонеспецифические аутоиммунные заболевания. Более подробная классификация (цит. по Ширинскому В.С., 1997г) включает 5 классов: А - Е (схема 2).

Достаточно большие трудности возникают при дифференциальной диагностики ранних проявлений основных, так называемых, "Больших коллагенозах" - системных заболеваниях соединительной ткани с вовлечением в патологический процесс различных органов и систем. К этим заболеваниям относят: системную красную волчанку, прогрессирующий системный склероз, ревматоидный артрит, синдром Шегрена и группу смешанных заболеваний соединительной ткани.

Схема 2. Классификация аутоиммунных заболеваний.

Схема 2. Классификация аутоиммунных заболеваний (Ширинский В.С., 1997г).

КЛАСС: А (первичные аутоиммунные болезни с генетической и без генетической предрасположенности)

"Органоспецифические" «Промежуточные» "Органонеспецифические" Аутоиммунные заболевания

крови

тереоидит Хашимото пемфигус, пемфигоид системная красная волчанка аутоиммунная гемолитическая первичная микседема первичный билиарный цирроз ревматоидный артрит анемия

тиреотоксикоз печени дерматомиозит аутоиммунная тромбоцитопения

атрофический гастрит хронический активный гепатит системная склеродермия аутоиммунная нейтропения

адреналит синдром Шегрена смешанное заболевание гранулематоз Вегенера

некоторые формы язвенный колит соединительной ткани первичного бесплодия глютеновая энтеропатия рецидивирующий полихондрит инсулинозависимый синдром Гудласчера

диабет 1 типа

варианты гиперлипопротеидемий

миастения гравис

КЛАСС: В (вторичные аутоиммунные болезни с генетической и без генетической предрасположенности)

Ревматизм, болезнь Чагаса

постинфарктный и посткардиотомный синдромы

лекарственные аутоиммунные реакции

СПИД?

анкилозирующий спондилоартрит

эндогенный увеит

дилятационная кардиомиопатия

КЛАСС: С (болезни с генетическими дефектами комплемента)

ангионевротический отек

волчаночно-подобные синдромы

КЛАСС: Д (медленная вирусная инфекция)

рассеянный склероз

поствакцинальные реакции

КЛАСС: Е - сочетание заболеваний классов А - Д

5. ОСНОВНЫЕ СИСТЕМНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ

Системная красная волчанка

Системная красная волчанка (СКВ) - мультисистемное заболевание, возникающее на фоне многочисленных иммунных нарушений - продукции аутоантител, гипергаммаглобулинемии, патологии Т-лимфоцитов -супрессоров, снижения содержания сывороточных комплементарных белков, и повышения уровня ЦИК, играющих, как полагают, основную роль в патогенезе СКВ.

С достаточной долей уверенности можно говорить о нарушении функционирования Fc -IgG и C3b- рецепторов, ответственных за фагоцитоз ЦИК. Вместе с тем, не все появляющиеся в крови больных СКВ аутоантитела и иммунные комплексы являются равнозначными по патогенности. Некоторые аутоантитела вызывают патологические симптомы вследствие своей антигенной специфичности (к поверхностным антигенам эритроцитов или факторам свертывания). Действие других обусловлено изотипом иммуноглобулина, способностью фиксировать комплемент, их авидностью к тканям и т.д.

Несомненно участие половых гормонов в патогенезе СКВ. Эстрогены усиливают, а андрогены тормозят выработку аутоантител. У больных СКВ отмечают повышенное образование 16- альфагидроксиэстрона, что вызывает пролонгированную стимуляцию эстрогенов.

Клинические проявления болезни зависят от того, какая популяция аутоантител и ЦИК присутствуют в данный момент у конкретного больного, какие органы, клетки или клеточные продукты служат мишенями для них, а также от способности больного корригировать эти нарушения. Около 72% больных выживают более 10 лет после начала заболевания. Ведущими причинами инвалидизации и смертности являются инфекционные осложнения и почечная недостаточность.

Основные лабораторные критерии диагностики и мониторинга представлены в таблице 4:

Антитела к Sm- антигену высокоспецифичны для СКВ), однако их уровень не отражает тяжесть заболевания. Вместе с тем, клинически с присутствием антител к Sm чаще связаны поражения нервной системы и волчаночные психозы, но в то же время характерна относительная сохранность функции почек. Антитела к Sm выявляются у 25 –30% (РИФ –метод) и 50 – 60 % (метод ИФА) больных. Негативные результаты теста на антитела к SM не исключают заболевания. Концентрация антител к Sm- антигену существенно не меняется на фоне терапии и поэтому их количественный мониторинг не имеет практического смысла. Присутствие антител к Sm –антигену входит в критерии СКВ, принятые Американской ревматологической ассоциацией.

Уровень антител к нативной (двухспиральной) ДНК в отличии от антител к Sm отражает риск и тяжесть волчаночного нефрита и используется в качестве критерия эффективности терапии СКВ. Дополнительным лабораторным критерием служит снижение уровня С3 и С4 компонентов комплемента, что также коррелирует с активностью люпус- нефрита.

Приблизительно 80% всех больных СКВ имеют антитела к гистонам. Очень часто эти антитела обнаруживаются у пациентов с лекарственной красной волчанкой (ЛКВ). Однако при ЛКВ отсутствуют антитела к нативной ДНК. Следовательно, одновременное определение антител к гистонам и dsDNA позволяет проводить дифференциальную диагностику между СКВ и ЛКВ. Кроме того, антитела к гистонам можно обнаружить у пациентов с первичным билиарным цирозом, ревматоидным артритом и склеродермией.

Прогрессирующий системный склероз (Системная склеродермия)

ПСС - это мультисистемное заболевание, характеризующееся воспалительными, васкулярными и фиброзными изменениями в коже (склеродермия) и в различных внутренних органах, особенно в желудочно-кишечном тракте, легких, сердце и почках. Характер течения, степень распространенности по организму, тяжесть проявления заболевания существенно различаются у разных больных. В ряде случаев висцеральные проявления могут иметь место и без видимых кожных проявлений.

Этиология заболевания неизвестна, роль наследственных факторов неоднозначна. Заболевают обычно лица в возрасте 30 - 40 лет, женщины в 4 раза чаще, чем мужчины.

ПСС сопровождается нарушениями гуморального и клеточного иммунитета. в крови у больных часто обнаруживают гипергаммаглобулинэмию и антитнуклеарные антитела, антитела к клеточным мембранам фибробластов и к коллагену 1 и 4 типов.

Клинические проявления как правило (у 90% больных) начинаются с феномена Рейно - эпизодической вазоконстрикции артерий и артериол пальцев рук, стоп, иногда кожи лица, наступающей в результате действия холода или эмоционального стресса. Пораженные участки кожи вначале бледнеют, затем становятся цианотичными и затем краснеют. Прогноз заболевания определяется вовлеченностью в процесс миокарда, легочной гипертензией и почечной недостаточностью.

Сосуществование кальциноза кожи, феномена Рейно, гипокинезии пищевода, склеродактилии и телеангиэктазии получило название “CREST” - синдрома и оценивается как относительно доброкачественный вариант ПСС.

Лабораторные данные при ПСС зависят от стадии и активности патологического процесса, часто повышена СОЭ, у 50% больных отмечается гипергаммаглобулинемия в основном за счет IgG, низкий титр ревматоидного фактора выявляется у 25%, ANA - практически у 96% страдающих ПСС. Специфические аутоантитела: к ядерному рибонуклеопротеиду (РНП), белкам центромер и анти Scl-70. Вместе с тем, самый специфичный маркер анти Scl-70- встречается только в 20 % случаев ПСС. Антитела, реагирующие с центромерной областью метафазных хромосом, обнаруживаются у большинства больных, соответствующим группе “CREST ”-синдрома. Поэтому, если определение антител к Scl-70 при ПСС служит плохим прогностическим признаком, то выявление антицентромерных антител, напротив свидетельствует о более благоприятном течении заболевания.

Ревматоидный артрит

Ревматоидный артирит (РА) - хроническое полисистемное заболевание неизвестной этиологии, при котором наряду с разнообразными системными проявлениями, патогмоничным является персестирующий воспалительный синовиит, симметрично поражающий периферические суставы. Течение заболевания отличается большой вариабельностью, как правило, с волнообразным течением.

Специфических лабораторных тестов для диагностики РА не существует. Однако, ревматоидные факторы, которые являются аутоантителами, реагирующими с IgG, обнаруживаются у 60% больных. Сами ревматоидные факторы могут относится к классам: IgA, IgM или IgG. Частота выявления ревматоидных факторов среди здоровых лиц достигает 5% и увеличивается с возрастом. Кроме того, ревматоидный фактор может присутствовать при многих заболеваниях - СКВ, Синдром Шегрена, хронических заболеваниях печени, гепатите В, туберкулезе, сифилисе и т.д. В связи с этим, обнаружение ревматоидных факторов не устанавливает диагноз, но имеет определенное прогностическое значение, так как больные с его высоким титром (особенно IgM и IgA) имеет тенденцию к более тяжелому и прогрессирующему течению заболевания. Эозинофилия у больных РА указывает на тяжесть системных проявлений. Почти у всех больных наблюдается повышение СОЭ, СРБ, церулоплазмина, других белков острой фазы. Как правило, это коррелирует с активностью заболевания и указывает на прогрессирование повреждения суставов.

Смешанные заболевания соединительной ткани.

Смешанные заболевания соединительной ткани (СБСТк) - это синдром, характеризующийся различным сочетанием клинических проявлений, аналогичных тем, которые наблюдаются при СКВ, склеродермии, полимиозите и ревматоидном артрите на фоне необычно высоких титров циркулирующих аутоантител к антигену ядерных рибонуклеопротеидов (РНП). При этом наблюдается отсутствие либо весьма низкий титр антител к другим экстрагируемым ядерным антигенам и к ДНК. Кроме Анти- РНП, отмечается выраженная поликлональная гипергаммаглобулинемия, снижение компонентов комплемента, дефектность супрессорного звена Т-лимфоцитов, наличие ЦИК, отложение иммунных комплексов по ходу мембран сарколеммы и гломерулярных базальных мембран, лимфоцитарная и плазмоцитоклеточная инфильтрация многих тканей. Одним из основных проявлений СБСТк является пролиферативное поражение интимы и медии кровеносных сосудов, приводящее к их сужению. Именно поражение крупных и мелких сосудов питающих жизненно важные органы и определяет течение и прогноз данного заболевания. У некоторых больных имеются признаки нескольких аутоиммунных заболеваний, но в отличии от больных СБСТк, отсутствуют антитела к РНП. В этом случае, если имеющиеся признаки удовлетворяют сразу нескольким аутоиммунным заболеваниям, ставят диагноз «перекрестного синдрома», если нет – диагноз «недифференцированного заболевания соединительной ткани».

Синдром Шегрена

Синдром Шегрена (СШ) или “сухой” синдром - иммунологическая патология, характеризующаяся прогрессирующей деструкцией экзокринных желез, и сопровождающаяся разнообразными аутоиммунными нарушениями. Заболевание может возникнуть само по себе (первичный СШ), или на фоне других аутоиммунных аномалий (вторичный СШ). Кроме того, СШ подразделяют на гландулярную форму, когда клинические проявления ограничиваются системой экзокринных желез, и экстрагландулярную, когда в патологический процесс вовлечены и другие ткани.

Основные механизмы повреждения при СШ это лимфоцитарная инфильтрация и отложение иммунных комплексов. Примерно в 10 % случаев СШ развивается лимфопролиферативный процесс, получивший название псевдолимфома. У некоторых больных в дальнейшем развивается истинная неходжкинская лимфома. Довольно часто наблюдается аутоиммунное поражение щитовидной железы по типу тиреоидита Хашимото.

Кроме сухости слизистых оболочек (керотоконьюктивит, ксеростомия) у больных с СШ развиваются васкулиты, полиневропатия, интерстициальная пневмония, гломерулонефрит. В целом же, в сравнении с другими коллагенозами, прогноз для больных СШ может считаться вполне благоприятным.

При лабораторных исследованиях обращают внимание на повышение уровня ЦИК, лейкопению, тромбоцитоз, ускоренное СОЭ. Регистрируется позитивная реакция на ANA. Аутоантитела в основном представлены ревматоидным фактором, SSA (анти-Ro), SSB (анти-La). Большинство больных с наиболее серьезными системными проявлениями SSA-позитивны. У беременных наличие SSA значительно повышают риск рождения младенцев с нарушениями сердечной проводимости.

Полимиозиты и дерматомиозиты

Дерматомиозиты - системное заболевание соединительной ткани, при котором преимущественно поражается кожа и мышечная ткань. Разнообразные поражения кожи с патогмоничным периорбитальным отеком с пурпурно-лиловой эритемой сочетаются с миастеническим синдромом, миокардиодистрофией, полиартритом и присоединяющимся воспалением легких (гиповентиляционного и аспирационного генеза). Особого внимания заслуживает высокая частота сочетания дерматомиозита со злокачественными опухолями. Полимиозиты - системные воспалительные миопатии без существенного поражения кожи, представляющие группу заболеваний, характеризующиеся диффузным поражением мускулатуры вследствие периваскулярной и интерстициальной инфильтрации мышечной ткани воспалительными клетками, преимущественно лейкоцитами.

6. АУТОАНТИТЕЛА КАК СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ СИСТЕМНЫХ КОЛЛАГЕНОЗОВ.

Впервые проявления специфического LE- феномена было зарегистрировано в 1948 г в процессе инкубации сывороток различных пациентов со взвесью лейкоцитов нормальных доноров. Годом позже был идентифицирован сывороточный иммуноглобулин, осуществляющий антинуклеарную реакцию, лежащую в основе LE-феномена. Определение LE- клеток доминировало в 50- 70 годы как основная реакция выявления антинуклеарных антител (ANA).

В 80-х годах для выявления ANA был предложен метод непрямой иммунофлуоресценции, с тестированием сыворотки пациентов на срезах тканей почек и печени кролика (мыши), либо на культуре раковых эпителиоидных клеток человека (Hep-2). Метод зарекомендовал себя как высокочувствительный и специфичный, позволяющий регистрировать одновременное присутствие аутоантител к почти 40 отдельным ядерным антигенам. Особенности характера распределения специфического свечения при учете реакции (гомогенное, крапчатое, периферическое, связанное с ядрышками или с центромерами, наличие цитоплазматических связывающих фокусов) позволяет в первом исследовании определить основную антигенную специфичность выявляемых аутоантител. К недостаткам данного метода следует отнести относительную трудоемкость, зависимость от оптических характеристик люминисцентного микроскопа, а также проблемы стандартизации и контроля качества, в основном связанные с использованием тканей животных или клеточных культур.

Одновременное развитие получил метод использования твердофазного ИФА как для выявления суммарного комплекса антинуклеарных аутоантител (ANA- скрининг), так и для выявления отдельных аутоантител к экстрагируемым ядерным антигенам (ENA-скрининг и ENA-профиль). Достоинствами метода являются возможность автоматизации и высокая производительность. Чувствительность и специфичность сравнима с РНИФ, правда использование в некоторых тест-системах рекомбинантных антигенов потенциально может вызывать ложно положительные результаты при тестировании сывороток с высоким титром антибактериальных антител.

Другие известные методы идентификации аутоантител к ENA - иммунодиффузия в геле, иммуноэлектрофорез, гемагглютинация, иммунопреципитация и иммуноблотинг широкого применения в практике клинической лаборатории пока не получили.

Перечень наиболее важных аутоантител к экстрагируемым ядерным антигенам представлены в таблице 5:

Таблица 5. Основные серологические маркеры аутоиммунных заболеваний

В дифференциальной диагностике основных коллагенозов важное значение придается анализу маркеров аутоиммунных заболеваний выявленных как методом иммунофлуоресценции, так и в ИФА (табл. 6).

Таблица 6

Определение ANA в реакции непрямой иммунофлуоресценции

При осуществлении типичного теста, сыворотку пациента инкубируют с антигенными субстратами (ткань печени или почек животных, культура клеток Hep-2) для осуществления специфического связывания имеющихся в сыворотке антител с клеточными ядрами клеток. После отмывания несвязавщихся белков сыворотки, субстрат инкубируют с антителами против человеческих иммуноглобулинов. Поскольку вносимые антитела коньюгированы с флуоресцирующим веществом, при наличии в сыворотке антител к ядерным антигенам образовавшийся комплекс (ядерный антиген + антиядерные антитела сыворотки + антитела к антителам человека + флюоресцирующее вещество) можно выявить при люминесцентной микроскопии. Характер свечения - периферический, диффузный, крапчатый и т.д. позволяет выявить связь с конкретными внутриядерными структурами см. Таблицу 7:

Таблица 7. Оценка результатов определения ANA в реакции непрямой иммунофлуоресценции.

Определение ANA и ENA методом твердофазного ИФА

Тест-система для ИФА ANA (UBI MAGIWELL) - для скринингового анализа на антиядерные антитела обеспечивает полуколичественное определение широкого спектра антител к сорбированному в лунках комплексу различных клеточных ядерных антигенов: двухспиральной и одноцепочечной ДНК, гистонам, рибонуклеопротеинам (РНП), SS-A, SS-B, Sm и др.

Отличительной особенностью систем ИФА ENA- скрининг и ENA- профиль (CLARK LABORATORIES) является то, что на поверхности полистерольных лунок сорбированы предварительно высокоочищенные отдельные эксрагируемые ядерные антигены: SS-A, SS-B, Sm, Sm/РНП, Scl-70 и Jo-1. В скрининговом варианте - все 6 антигенов вместе, в профильном - каждый антиген в отдельной лунке. Таким образом, обычный алгоритм диагностики заключается в первичном анализе сыворотки на скрининговой системе и повторной постановке анализа положительных сывороток на тест-системе ENA - профиль для выявления антител к конкретным антигенам. В случае положительного теста на скрининговой ANA -системе и отрицательного результата в тест-системах ENA - необходимо тестирование сыворотки на тест-системах для изолированного определения антител к ДНК, гистонам и другим антигенам, отсутствующим в системах ENA.

В случае установленного диагноза и выявленным ранее аутоантителам - для мониторинга эффективности терапии используются тест -системы для количественного определения титра антител к отдельным антигенам.

В качестве альтернативы плашечным тест- системам можно использовать пробирочные ИФА тесты фирм "ROCHE" и "Sanofi".

Положительные результаты серологического тестирования на ANA и ENA могут наблюдаться у 1 - 5 % здоровых лиц, особенно в пожилом возрасте. Определенные лекарства, например такие, как р-аминосалициловая кислота, фенитион, изониазид, гидразин, прокаинамид и некоторые другие могут индуцировать образование антиядерных антител.

7. АУТОАНТИТЕЛА В ДИАГНОСТИКЕ СИСТЕМНЫХ ВАСКУЛИТОВ

Системные васкулиты – группа заболеваний, которые характеризуются хроническим воспалением и деструкцией стенок кровеносных сосудов. Этиологические факторы выполняющие тригерную роль включают: инфекционные агенты, медикаментозные препараты, опухолевую прогрессию, циркуляцию патологических белков и ЦИКов, аутоантитела. Вместе с тем, около половины всех случаев системных васкулитов не имеют явной этиологической обусловленности и расцениваются как «идиопатические». Важно помнить, что некоторые васкулиты со сходными клиническими проявлениями могут иметь существенно различный прогноз и требовать различных терапевтических подходов.

До сих пор, окончательно не отработаны классификационные схемы данной группы заболеваний. Последние классификации базируются на калибре преимущественно поражаемых сосудов и преобладающему в очаге деструкции типу клеточных элементов: нейтрофилов, моноцитов или лимфоцитов. Правда, это скорее отражает стадию процесса, нежели доминирующий патогенетический процесс.

Появление возможности определения аутоантител к нейтрофильным цитоплазматическим антигенам (ANCA) значительно улучшило диагностику этих заболеваний. Существуют два подкласса аутоантител к нейтрофилам человека: c-ANCA (цитоплазматические ANCA) и p-ANCA (перинуклеарные ANCA). Наиболее значимыми являются антитела к ферментам первичных гранул нейтрофилов: протеиназе-3 (PR3) и миелопероксидазе (МРО), соответственно. Определение спектра ANCA (PR3, MPO) позволяет проводить дифференциальную диагностику грануломатоза Вегенера и микроскопического полиартериита. Использование ANCA как показателя активности васкулита имеет определенные преимущества перед такими классическими показателями как СОЭ и СРБ, более адекватно отражая степень активности и эффективность проводимой терапии и независимо от присоединения инфекционных осложнений.

Таблица 8. Диагностическая значимость выявления различных противонейтрофильных (ANCA) –антител

8. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА АНТИФОСФОЛИПИДНОГО СИНДРОМА

Антитела к фосфолипидам представляют собой гетерогенную группу аутоантител против отрицательно заряженных фосфолипидов. Они обнаруживается, в первую очередь, в тесте, определяющем антитела против кардиолипина (АСА-тест), дают ложноположительные реакции в биологических тестах на сифилис и в антикоагулянтном тесте на волчанку. Все эти три теста обнаруживают схожие, но необязательно идентичные антитела. Таким образом, для того, чтобы идентифицировать антитела к фосфолипидам, иногда приходятся использовать все перечисленные тесты.

Из различных существующих методов анализа для определения антител к фосфолипидам наиболее чувствительным является твердофазный иммуноферментный метод определения антител к кардиолипину. Присутствие этих антител у пациентов помогает выявлять больных с риском венозного и/или артериального тромбоза, часто сопровождающегося тромбоцитопенией.

Термин антифосфолипидный синдром был предложен для обозначения группы заболеваний, сопровождающихся повышенным количеством аутоантител к фосфолипидам и подразделяется на первичный (не связанный с определенной аутоиммунной патологией) и вторичный, асоциированный с СКВ или другими аутоимунными болезнями.

Антифосфолипидный синдром наиболее часто проявляется у пациентов с системной красной волчанкой или у больных волчанко-подобными заболеваниями, где критерии системной красной волчанки не выполняются. Высокие уровни антител к кардиолипину наблюдаются при тромбозах, при потере плода, при тромбоцитопении и некоторых других заболеваниях. Низкие уровни антител к кардиолипиду были найдены при различных клинических нарушениях, не относящихся к антифосфолипидному синдрому. Поэтому низкие уровни этих антител имеют ограниченное диагностическое значение.

Антифосфолипидный синдром связан более четко с антителами к кардиолипину классов IgG и IgA, чем с антителами класса IgM. Однако, при лечении наибольшим образом изменяется уровень lgM-антител. Низкие уровни антител класса IgM можно наблюдать и при других аутоиммунных заболеваниях, таких как ревматоидные артриты, первичный синдром Шенгрена, системная волчанка, вызванная применением лекарств, болезнь Лайма и сифилис.

Тест-система ImmuLisa™ ACA-Screen EUSA является удобным инструментом для предварительного выявления тех пациентов, в крови которых содержатся АСА. Последующий анализ позитивных сывороток с помощью наборов ImmuUsa™ ACA-IgG, ImmuUsa™ ACA-lgA, ImmuUsa™ ACA'IgM позволяет определить индивидуальные изотипы этих аутоантител.

Таблица 9. Синдромы, связанные с АСА

Как показали проведенные исследования у пациентов с антифосфолипидным синдромом огромное значение имеет наличие антител не только к кардиолипину (АСА), но и к фосфатидилсерину, последние могут обнаруживаться как совместно с АСА, так и отдельно.

При СКВ АСА достаточно хорошо связываются и с фосфатидилсерином, в то время как некоторых инфекционных заболеваниях, АСА высокоспецифичны к кардиолипину. В связи с этим, определение отдельно антител к фосфатидилсерину является важным диагностическим критерием вторичного антифосфолипидного синдрома.

Показания для исследования на антифосфолипидный синдром:

- тромбозы и васкулиты при аутоиммунных заболеваниях (оценка тяжести состояния, прогноз и мониторинг терапии)

- частое прерывание беременности или внутриматочная гибель плода (возможность результативной профилактики в течение новой беременности)

- неясные неврологические проявления (хорея, мигрень, эпилепсия могут быть вызваны микротромбозами)

- рецидивирующая тромбоцитопения неясного генеза (уточнение диагноза)

- мраморная кожа

9. СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА АУТОИММУННЫХ ЭНДОКРИНОПАТИЙ

Некоторые эндокринные заболевания сопровождаются появлением аутоантител, которые, в ряде случаев играют существенную роль в их патогенезе. К числу таких заболеваний относятся: инсулин- зависимый диабет 1 типа, тиреоидит Хашимото, болезнь Грейвса, узелковый тиреоидит, синдром "кандидоза- эндокринопатии" и тд.

Определение антител к b- клеткам островков Лангерганса поджелудочной железы.

Известно, что ключевым моментом в развитии инсулинзависимого сахарного диабета 1 типа является феномен превращения b- клеток из "своего" в "не свое" и активацией их аутоиммунного поражения. При медленном течении болезни самым ранним признаком патологии служит появление антител к b- клеткам островков Лангерганса поджелудочной железы и, конкретно, к мембраносвязанной декарбоксилазе глутаминовой кислоты в период, когда уровень сахара в крови еще не превышает нормы, а толерантность к глюкозе остается нормальной. Поскольку первые клинические проявления диабета проявляются при поражении более 90% всех инсулин -синтезирующих клеток, антитела могут появляться за много лет (до 8 лет) до клинической манифестации болезни. Вместе с тем, присутствие антител к b- клеткам коррелирует с их остаточным количеством и по мере гибели оставшихся b- клеток снижается стимул к аутоиммунному ответу титр аутоантител может существенно снижаться вплоть до неопределяемых значений. Как правило, при обследовании лиц, страдающих диабетом 1 типа антитела к островковым клеткам выявляются в 50 - 80 % случаев. Частота встречаемости этих аутоатител у родственников (1-ой степени) диабетиков достигает 2 - 5 %. Известно, что ежегодно у 11% этой группы людей возникают симптомы диабета.

Определение антител к b- клеткам островков Лангерганса поджелудочной железы проводится как методом непрямой иммунофлуоресценции, так и методом твердофазного ИФА. В первом случае в качестве субстрата используются срезы поджелудочной железы обезьян, во втором- в лунках планшета сорбируются очищенные антигены островковых клеток. Гемолиз, липемия и микробная контаминация препятствуют проведению анализа. Сыворотки, содержащие большую концентрацию ANA затрудняют определение, особенно при проведении РНИФ.