Микроскопирование

Министерство здравоохранения республики Беларусь

УЧРЕЖДЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ «ВИТЕБСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ОРДЕНА ДРУЖБЫ НАРОДОВ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

КАФЕДРА НОРМАЛЬНОЙ ФИЗИОЛОГИИ

АНАТОМИЯ И ФИЗИОЛОГИЯ ЧЕЛОВЕКА.

ПРАКТИКУМ

для студентов 1 курса фармацевтического факультета

Учебное пособие в 2-х частях

Часть 1

«ОСНОВЫ АНАТОМИИ И ОБЩЕЙ ФИЗИОЛОГИИ ЧЕЛОВЕКА.

ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ РЕГУЛЯЦИИ ФУНКЦИЙ»

«АНАТОМИЯ И ФИЗИОЛОГИЯ НЕРВНОЙ И ЭНДОКРИННОЙ СИСТЕМ. СЕНСОРНЫЕ СИСТЕМЫ. ВЫСШАЯ НЕРВНАЯ ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ ЧЕЛОВЕКА»

Студент ___ 1 курса _____ группы

фармацевтического факультета

(Ф.И.О студента)

201___/ 201___ учебный год

Витебск 2015

СОДЕРЖАНИЕ

Введение. Общие указания к проведению физиологических опытов, инструктаж по технике безопасности.

Тема № 1. Общее понятие о тканях. Скелет человека. Соединительные ткани. Роль кальция и фосфатов в костной ткани и в организме человека.

Тема № 2. Общая физиология возбудимых клеток. Биоэлектрогенез.

Тема № 3. Периферическая нервная система. Строение и функции периферических нервов. Классификация нервных волокон. Нервная ткань.

Тема № 4. Синапсы. Рецепция.

Тема № 5. ЦНС. Рефлекторная теория. Нервные центры. Возбуждение и торможение в ЦНС, медиаторные механизмы.

Тема № 6. Мышечные ткани. Скелетные мышцы. Гладкая мышечная ткань.

Тема № 7. Механизм сокращения и расслабления одиночного мышечного волокна и мышцы в целом. Сила, работа и утомление мышц.

Тема № 8. Эпителиальные ткани. Железы. Железистый эпителий, секреция. Кожа.

Тема № 9. Итоговое занятие. Коллоквиум: «Основы анатомии и общей физиологии человека. Общие принципы регуляции функций».

Тема № 10. Частная анатомия и физиология спинного мозга, продолговатого и среднего мозга. Соматические рефлексы.

Teма № 11. Строение и функции мозжечка, промежуточного и переднего мозга. Ликвор.

Тема № 12. Автономная нервная система. Вегетативные рефлексы.

Тема № 13. Эндокринная система. Гипоталамус, гипофиз, эпифиз, щитовидная железа, паращитовидные железы, надпочечники: строение, топография, функции.

Тема № 14. Инкреторная функция поджелудочной железы. Репродуктивная система мужчины и женщины. Эндокринная функция половых желез.

Тема № 15. Общие принципы строения сенсорных систем. Строение и функции зрительной, акустической и вестибулярной сенсорных систем.

Тема № 16. Строение и функции обонятельной, вкусовой, кожной и висцеральной сенсорных систем. Ноцицептивная и антиноцицептивная системы.

Тема № 17. Итоговое занятие. Коллоквиум: «Анатомия и физиология нервной и эндокринной систем. Сенсорные системы».

Тема № 18. Интегративные функции мозга. Врожденные и приобретенные формы поведения. Типы высшей нервной деятельности человека. Высшие интегративные функции мозга: память, внимание, речь, мышление, мотивации, эмоции. Сон.

МИКРОСКОПИРОВАНИЕ

Микроскоп - это оптический прибор, позволяющий получить обратное изображение изучаемого объекта и рассмотреть мелкие детали его строения, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности глаза.

Разрешающая способность микроскопа дает раздельное изображение двух близких друг другу линий. Невооруженный человеческий глаз имеет разрешающую способность около 1/10 мм или 100 мкм. Лучший световой микроскоп примерно в 500 раз улучшает возможность человеческого глаза, т. е. его разрешающая способность составляет около 0,2 мкм или 200 нм.

В учебных лабораториях обычно используют световые микроскопы, на которых микропрепараты рассматриваются с использованием естественного или искусственного света. В микроскопе выделяют две системы: оптическую и механическую (рис.4). К оптической системеотносят объективы, окуляры и осветительное устройство (конденсор с диафрагмой и светофильтром, зеркало или электроосветитель).

Объектив -одна из важнейших частей микроскопа, поскольку он определяет полезное увеличение объекта. Качество объектива определяет разрешающая способность микроскопа.

Окуляр состоит из 2-3 линз, вмонтированных в металлический цилиндр. Между линзами расположена постоянная диафрагма, определяющая границы поля зрения. Увеличение окуляров обозначено на них цифрами: х7, х10, х15. Увеличение микроскопа - величина, показывающая, во сколько раз линейные размеры изображения, формируемого оптической системой микроскопа, больше линейных размеров объекта. Увеличение микроскопа зависит от увеличений объектива и окуляра и численно равно произведению этих увеличений. При этом необходимо помнить, что объектив увеличивает изучаемый объект, а окуляр - изображение, полученное при помощи объектива, не добавляя к нему новых деталей, не выявленных объективом.

Осветительное устройство состоит из зеркала, конденсора с ирисовой диафрагмой и светофильтром, расположенных под предметным столиком. Они предназначены для освещения объекта пучком света.

Электроосветитель устанавливается под конденсором в гнездо подставки.

Конденсор состоит из 2-3 линз, вставленных в металлический цилиндр. При подъеме или опускании его с помощью специального винта соответственно конденсируется или рассеивается свет, падающий от зеркала на объект.

Микровинт служит для незначительного перемещения тубусодержателя.

Револьвер предназначен для быстрой смены объективов, которые ввинчиваются в его гнезда. Центрированное положение объектива обеспечивает защелка, расположенная внутри револьвера.

Винт грубой наводки используют для значительного перемещения тубусодержателя, а, следовательно, и объектива с целью фокусировки объекта при малом увеличении.

Предметный столик предназначен для расположения на нем препарата. В середине столика имеется круглое отверстие, в которое входит фронтальная линза конденсора. На столике имеются две пружинистые клеммы - зажимы, закрепляющие препарат.

Рис. 4. Устройство светового микроскопа

Правила работы с микроскопом

При работе с микроскопом необходимо соблюдать операции в следующем порядке:

1. Работать с микроскопом следует сидя.

2. Микроскоп осмотреть, вытереть от пыли мягкой салфеткой объективы, окуляр, зеркало или электроосветитель.

3. Микроскоп установить перед собой, немного слева на 2-3 см от края стола. Во время работы его не сдвигать.

4. Открыть полностью диафрагму, поднять конденсор в крайнее верхнее положение.

5. Работу с микроскопом всегда начинать с малого увеличения.

6. Опустить объектив в рабочее положение, т.е. на расстояние 1 см от предметного стекла.

7. Установить освещение в поле зрения микроскопа, используя электроосветитель или зеркало. Глядя одним глазом в окуляр и пользуясь зеркалом с вогнутой стороной, направить свет от окна в объектив, а затем максимально и равномерно осветить поле зрения.

8. Положить микропрепарат на предметный столик так, чтобы изучаемый объект находился под объективом. Глядя сбоку, опускать объектив при помощи макровинта до тех пор, пока расстояние между нижней линзой объектива и микропрепаратом не станет 4-5 мм.

9. Смотреть одним глазом в окуляр и вращать винт грубой наводки на себя (!), плавно поднимая объектив до положения, при котором хорошо будет видно изображение объекта. Нельзя смотреть в окуляр и опускать объектив. Фронтальная линза может раздавить покровное стекло, и на ней появятся царапины.

10. Передвигая препарат рукой, найти нужное место, расположить его в центре поля зрения микроскопа.

11. Если изображение не появилось, то надо повторить все операции пунктов 6, 7, 8, 9.

12. Для изучения объекта при большом увеличении, сначала нужно поставить выбранный участок в центр поля зрения микроскопа при малом увеличении. Затем поменять объектив на 40 х, поворачивая револьвер, так чтобы он занял рабочее положение (до щелчка). При помощи микрометренного винта добиться хорошего изображения объекта. На коробке микрометренного механизма имеются две риски, а на микрометренном винте - точка, которая должна все время находиться между рисками. Если она выходит за их пределы, ее необходимо возвратить в нормальное положение. При несоблюдении этого правила, микрометренный винт может перестать действовать;

13. По окончании работы с большим увеличением, установить малое увеличение, поднять объектив, снять с рабочего столика препарат, протереть чистой салфеткой все части микроскопа.

Изучение микропрепаратов должно сопровождаться обязательной зарисовкой. Это дает возможность лучше понять препарат, научиться выделять основные структуры и вместе с тем обращать внимание на такие детали, которые иначе ускользают от наблюдения. Обычно на препарате бывают участки, где детали выявлены лучше, яснее; часто это зависит от плоскости разреза (удобнее поперечные или продольные разрезы и нежелательны косые), а иногда - от качества обработки препарата, которое не всегда одинаково на протяжении среза. Поэтому не надо спешить переходить к большому увеличению (ув.х400), не рассмотрев детально препарат при слабом увеличении. Зарисовка в некоторых случаях делается при слабом увеличении, в других - при сильном. Зарисовывая препарат при слабом увеличении, надо время от времени, по ходу изучения препарата, применять сильное увеличение для рассмотрения отдельных деталей.

Для изучения очень мелких гистологических структур используется иммерсия (ув.х900), позволяющая повысить разрешающую способность микроскопа. При этом на покровное стекло препарата наносится капля иммерсионной жидкости (вода, глицерин, кедровое масло и др.), после чего с помощью макровинта объектив осторожно опускается до соприкосновения его фронтальной линзы с иммерсионной жидкостью. Плавно вращая микровинт, добиваются появления четкого изображения. По окончании работы иммерсионная жидкость удаляется с объектива и покровного стекла сухой марлей.

При работе на больших увеличениях конденсор необходимо поднять вплоть до соприкосновения с предметным стеклом. При работе на малом увеличении конденсор следует несколько опустить.

Рассмотреть строение очень мелких структур клетки, невидимых в световом микроскопе позволяет электронная микроскопия – метод субмикроскопического исследования, осуществляемый с помощью трансмиссионного (просвечивающего) электронного микроскопа. В таком микроскопе длина электромагнитных волн в 100 000 раз короче волн видимого света. Теоретически разрешающая способность у него составляет 0,001 – 0,0005 мкм. В современных электронных микроскопах разрешающая способность составляет 0,1 – 0,7 нм. Метод сканирующей электронный микроскопии обеспечивает объемное изучение поверхности объекта исследования.