Метод ИФА на выявление лейкоза

Иммуноферментный анализ (ИФА)основан на иммунохимической реакции взаимодействия антиген-антитело и использовании в качестве индикатора этой реакции маркированных ферментами антител или антигенов.

Материалы и оборудование. Материалом для исследования может служить сыворотка крови, секрет вымени сухостойных коров, молозиво и молоко.

Сыворотки пригодны для использования в течение 10 дней при температуре хранения +4°С. Срок годности сыворотки, хранящейся при температуре -20°С и ниже, не ограничен.

Бактериально загрязненные, разложившиеся сильно гемолизированные сыворотки непригодны для исследования.

При постановке реакции используют стандартные коммерческие диагностические наборы согласно прилагаемому к ним наставлению по применению.

Для проведения исследования применяют:

- Микротирационные планшеты с 96 лунками разделенные на 12 полосок по 8 лунок в каждой

- Ампула с положительным контролем

- Ампула с отрицательным контролем

- Ампула с конъюгатом

- Флакон с промывочным раствором

- Флакон с раствором для разбавления

- Флакон с стоп-реагентом

- Дистиллированная вода

- Дозаторы

- Одноразовые наконечники

- Устройство для промывания планшетов

- Пробирки от 5 до 250 мл

- Термостат

Для начала подготовили реагенты: промывочный раствор, положительный и отрицательный контроли, конъюгат, после подготовили пробы (сыворотки крови животных). Затем по карте вносили пробы в планшеты. Сначала добавили раствор для разбавителя в каждую лунку пластины, после добавили положительный и отрицательный контроли, испытуемые пробы в лунки планшета должны вноситься в строгой последовательности. После внесения проб, мы выдерживали планшеты 30 минут при температуре +37.

Учет и оценка результатов реакции. Считывание должно производиться с помощью Спектрофотометра при 450 нм.

Тест может считаться действительным: если значение оптической плотности (ОП) сыворотки отрицательного контроля (должна быть больше 1) в 5 раз больше значения ОП сыворотки положительного контроля.

Если проводилось тестирование проб 2х повторов, значения ОП будут рассчитываться для каждой пробы как среднее арифметическое значение обоих значений.

Все пробы, значение ОП которых выше чем отрицательное пороговое значение должны считаться как Отрицательное.

Все пробы, значение ОП которых ниже чем положительное пороговое значение должны считаться как Положительное.