Главная Случайная страница


Полезное:

Как сделать разговор полезным и приятным Как сделать объемную звезду своими руками Как сделать то, что делать не хочется? Как сделать погремушку Как сделать неотразимый комплимент Как противостоять манипуляциям мужчин? Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами Как сделать идею коммерческой Как сделать хорошую растяжку ног? Как сделать наш разум здоровым? Как сделать, чтобы люди обманывали меньше Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили? Как сделать лучше себе и другим людям Как сделать свидание интересным?

Категории:

АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника






Диагностика на бешенство – РИФ





 

Реакция иммунофлуоресценции(РИФ)основана на выявлении специальными микроскопами (МЛ-2 Микмед-2-11, ЛЮМАМ и др.) вирусного антигена, вступившего в реакцию со специфической антирабической сывороткой, меченной флуоресцирующим красителем.

Для реакции делают тонкие и равнослойные отпечатки на тщательно обезжиренных стеклах из свежего или свежемороженого головного мозга. Отпечатки готовят, как и для микроскопического исследования. От каждого кусочка мозга готовят не менее 4 препаратов. Для контроля делают препараты из мозга здорового животного.

После высушивания на воздухе (высушивание на воздухе 15-40 минут) препараты фиксируют в ацетоне в течение 4х часов при температуре 2-4°. Сосуд с фиксатором должен быть хорошо закрыт, чтобы предупредить испарение фиксирующей жидкости. После фиксации ацетоном на препараты наносят несколько капель конъюгата в рабочем разведении. Затем их помещают во влажную камеру (чашки Петри или закрытый эмалированный кювет с увлажненным дном) на 20-30 минут при температуре 25°.

После этого препараты промывают водой или фосфатным буферным раствором в течение часа, ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и исследуют.

Препараты просматривают под иммерсионной системой. Для иммерсии используют нелюминесцирующее масло. В окрашенном препарате при люминесцентной микроскопии мозговая ткань флуоресцирует (светится) тусклым серовато-желтым светом. Антиген вируса бешенства выявляется в препаратах в виде ярких желтовато-зеленых или зеленых гранул различной формы и величины — от едва заметных до 15—20 мк в диаметре.

В контрольном препарате желто-зеленых интенсивно светящихся гранул не отмечают.

По интенсивности свечения результаты оценивают:

+ + + + яркая, сверкающая желто-зеленая люминесценция:

+ + + отчетливо выраженная, достаточно яркая зеленая люминесценция:

++ неяркая люминесценция зеленого цвета;

+ слабая люминесценция, обнаруживаемая в крупных включениях, зелено-серого цвета; отсутствие специфической люминесценции.

При исследовании с помощью метода флуоресцирующих антител диагноз бешенства считают установленным, если в нескольких полях зрения микроскопа обнаруживают достаточное количество (не менее 10) типичных гранул с ярким зеленоватым свечением. В контроле подобных образований не должно быть. При отсутствии положительной флуоресценции необходимо ставить биопробу на молодых белых мышах.

Метод флуоресцирующих антител высокочувствителен и позволяет получить ответ на исследование материала в день его поступления в лабораторию.

 






Date: 2015-08-15; view: 888; Нарушение авторских прав

mydocx.ru - 2015-2018 year. (0.007 sec.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав - Пожаловаться на публикацию