Состав реактивов и окраска при детектировании

Задачей обнаружения веществ по схеме ненаправленного предварительного ТСХ-скрининга является обнаружение максимального количества химических групп при минимальном расходе извлечения.

Для этого одна хроматографическая зона последовательно обрабатывается общегрупповыми реагентами. Параллельная зона предназначена для обработки частными реагентами.

Принципиальная схема ненаправленного хроматографического скрининга включает два этапа (рис. 9.1):

1. Использование общей системы растворителей, обнаружение исследуемых соединений комбинированным применением общих реагентов, определение принадлежности вещества к определенной группе.

2. Исследование в частных системах растворителей, обнаружение специфическими и чувствительными реагентами, обнаружение неизвестного вещества, элюирование его, проведение подтверждающих методов анализа, количественное определение.

Комбинирование общих систем растворителей включает: 1) поиск комбинаций систем растворителей с максимальной разделяющей способностью; 2) определение корреляции найденных систем растворителей.

Сочетание общих и частных систем растворителей. Для решения этого вопроса необходимо выбрать общую систему растворителей, частные системы растворителей и элюент. Учитывая требования, предъявляемые к общим системам растворителей, в качестве общих систем были выбраны:

- система для разделения веществ кислого, нейтрального и слабоосновного характера - хлороформ:ацетон (9:1);

- система для разделения веществ основного и слабоосновного характера – ацетон:хлороформ:25% раствор аммиака (24:12:1).

Обнаружение исследуемых веществ на хроматограмме

Для обнаружения лекарственных веществ кислого, нейтрального и слабоосновного характера выбраны следующие детекторы: УФ-свет, ртути сульфат в сочетании с дифенилкарбазоном (чувствительность для производных барбитуровой кислоты – 1 мкг); 10% раствор железа окисного хлорида (чувствительность для ароматических карбоновых кислот – 1,5 мкг, пиразолона – 1 мкг); реактив Драгендорфа в сочетании с 1 М раствором серной кислоты (для лекарственных веществ, содержащих третичный ароматический или гетероциклический атом азота, чувствительность – от 1 до 4 мкг).

Для обнаружения лекарственных веществ основного и слабоосновного характера выбраны: 10% раствор железа окисного хлорида (чувствительность для производных пиразолона – 1 мкг); 57% раствор хлорной кислоты, содержащий 3% 0,5% раствора натрия нитрита (для производных фенотиазина, тиоксантена); реактив Драгендорфа в сочетании с 1 М раствором серной кислоты (для алкалоидов и синтетических лекарственных веществ, содержащих третичный ароматический или гетероциклический атом азота). Обнаружение производных 1,4-бензодиазепина основано на переведении последних в бензофеноны путем солянокислого гидролиза при 120^оС в течение 30 минут и проведении реакции Браттона-Маршала.

Рис. 9.1. Схема предварительного ненаправленного ТСХ-скрининга.

В силу особенностей проведения химико-токсикологического анализа на наличие неизвестного яда более рациональным является последовательное (комбинированное) использование реагентов общегруппового назначения, особенно в сочетании с параллельным применением специфических реагентов.

Основные этапы

1 этап – исследование в общих системах растворителей.

2 этап - исследование в частных системах растворителей.