Серологический метод в диагностике болезней растений

Метод основан на реакции преципитации (образование осадка) между специфичными антителами и белками (антигенами) возбудителя заболевания. Метод серологической диагностики неприменим для идентификации вироидов из-за отсутствия белкового компонента.

При введении теплокровному животному чужеродного белка в кровяной сыворотке образуются специфические белки, или антитела, которые способны связывать этот белок и переводить его в безвредное для организма состояние. Вещества, которые при введении животным вызывают у них образование антител, получили название антигенов, а реакция между антигеном и антителами сыворотки — серологической реакции (от латинского слова serum — сыворотка).

Полученная из крови теплокровного животного сыворотка и содержащиеся в ней антитела являются строго специфичными, т. е. обладают способностью реагировать (давать положительную реакцию) только с тем антигеном, который был введен в тело животного и по отношению к которому получена антивирусная сыворотка.

В практике широко применяют капельный серологический метод, разработанный М. С. Дуниным и Н. Н. Поповой (1937), и его модификации. Метод заключается в следующем. На предметное стекло наносят 2 капли испытуемого сока. В одну из них добавляют 1-2 капли сыворотки, специфичной к определенному вирусу, а в другую — такое же количество контрольной сыворотки, получаемой от неиммунизированных животных. Капли сока и сыворотки перемешивают уголками чистого предметного стекла. Если в соке растения вирус, соответствующий антителам в сыворотке, присутствует, то в капле через 1-3 мин образуется хлопьевидный осадок — преципитат (положительная реакция). Если в соке вируса нет, то капля остается, как и контрольная, равномерно мутной.

Для идентификации вирусов в растении могут использоваться другие следующие модификации серологической диагностики:

1) Иммуноферментный анализ (ИФА) – наиболее высокочувствительный метод, который позволяет получать количественные оценки. В его основе лежит специфическое распознавание поверхностных антигенов вируса антителами, в присутствии ферментов.

2) Метод двойной диффузии – проводится в агаровом геле, для определения сферических и других мелких вирусов. Проводится по такой методике, в одни лунки, которые вырезаны в слое агаровой среды, добавляют антисыворотку, а в другие – очищенный сок растения. В геле вирусные частицы и антитела диффундируют друг другу на встречу, и в месте встречи образуют отчетливые линии преципитации в случае их комплиментарной специфичности.

3) Метод радиальной иммунодиффузии. При использовании данного метода антисыворотку добавляют непосредственно в агаровую среду, при этом лунки заполняют соком растений. Реакция является положительной, если вокруг лунок образуются преципитаны в форме колец.

4) Метод адсорбции. Метод основан на том, что перед реакцией с антигеном антитела связывают каким-либо инертным материалом с крупными частицами, например, латексом. При реакции с антигеном происходит хорошо заметная агглютинация (склеивание и выпадение в осадок) всего комплекса.