Практичні роботи. Завдання 1. Вивчення процесу глікогенолізу в м’язовій тканині

Завдання 1. Вивчення процесу глікогенолізу в м’язовій тканині.

Принцип роботи. Про проходження реакцій глікогенолізу свідчить утворення молочної кислоти та зменшення вмісту неорганічного фосфату після інкубації гомогенату м’язової тканини з глікогеном.

Хід роботи. В дві пробірки вносять по 2 мл гомогенату м’язової тканини, додають 1 мл фосфатного буферу. В першу пробірку додають 2 мл 1% розчину глікогену, в другу – 2 мл фізіологічного розчину. Пробірки інкубують в термостаті при 37°С 15 хвилин. Після інкубації в пробірках визначають наявність молочної кислоти, що утворилась а процесі розщеплення глікогену, та зменшення вмісту неорганічного фосфату, що використався в реакціях субстратного фосфорилювання.

Завдання 2. Виявлення молочної кислоти в гомогенаті м’язової тканини.

Принцип роботи. При взаємодії комплексної сполуки феноляту заліза фіолетового кольору з молочною кислотою утворюється лактат заліза жовто-зеленого кольору.

Хід роботи. З кожної пробірки беремо 1,0 мл інкубаційного розчину, додаємо 5 крапель 1% розчину FeCL3 та 1,0 мл розчину фенолу. Спостерігаємо за появою жовто-зеленого кольору.

Завдання 3. Визначення неорганічного фосфору в гомогенаті м’язової тканини.

Принцип роботи. При взаємодії неорганічного фосфору з молібденовокислим амонієм утворюється комплексна сполука характерного жовтого кольору.

Хід роботи. З кожної пробірки беремо по 1,0 мл інкубаційного розчину, додаємо по 1,0 мл молібденовокислого амонію і спостерігаємо за появою кольору.

Результати досліду заносимо в таблицю.

Джерело ферментів глікогенолізу

Субстрат

Реакція на молочну кислоту Інтенсивність

якісної реакції на Рн

1. Гомогенат м’язів Глікоген

2. Гомогенат м’язів Фізіологічний розчин

Зробити висновки.

Література

Основна:

1. Губський Ю.І. Біологічна хімія. – Київ-Тернопіль: Укрмед-книга, 2000.-508 с.

2. Методичні розробки практичних занять з біологічної хімії. Практикум. За редакцією д.мед.н., професора Ю.В. Хмелевського. – Київ: НМУ. – 1985. – 204 с.

3. Обмін речовин та його показники. Методичні розробки практичних занять з біологічної хімії. – Київ: НМУ. – 1992.- 36с.

Додаткова:

1. Гонський Я.І., Максимчук Т.П., Калинський М.І., Біохімія людини.

Підручник. – Тернопіль: Укрмедкнига, 2002.-744 с.

2. Ленинджер А. Основы биохимии. В 3 т.-М.: Мир. 1985. – 1056 с.

3. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуєлл В. Биохимия человека: В 2т.-М.: Мир, 1993.-т.1-381 с.; т.2-414 с.