Инвентарь и оборудование, необходимые при работе с дрозо­филой

1.Стаканчики из толстого стекла высотой 5—7 см и диа­метром 2,5—3 см. 2. Тонкий глазной пинцет и мягкая кисточка. 3. Молочно-белое стекло размером 5 см X 10 см. 4. Бинокулярная лупа или небольшие настольные лупы различных конструкций с увеличением не менее Х4. 5. Часовое стекло. 6. Капельница для серного эфира. 7. Эфиризатор, или морилка. Эфиризатор может быть специальный любой конструкции, либо — обычный стаканчик, закрытый корковой пробкой с ватным тампоном. 8. Бутыль с не­большим количеством керосина или отходов спирта (¹/₄ часть ее объема). В эту бутыль выбрасываются ненужные мухи после ана­лиза. 9. Вата для изготовления пробок. 10. Кастрюля и плитка для приготовления питательной среды. 11. Мензурка, весы, карандаш, этикетки, тушь.

Питательные среды и их приготовление. Главные составные части питательных сред для дрозофилы — дрожжи и сахар. В питательную среду обычно добав­ляют агар-агар. Он придает среде желеобразную кон­систенцию. Агар-агар должен быть светлым, прозрач­ным, хорошо очищенным от химических примесей. Ниже приводится ряд наиболее распространенных и доступных рецептов приготовления питательных сме­сей, рассчитанных примерно на 50 пробирок.

Рецепты наиболее распространенных сред

I. Вода 300 мл

Изюм 150 г

Агар-агар 6 г

II. Вода 400 мл

Картофель 200 г

Изюм 150 г

Агар-агар 4г

III. Вода 500 мл

Дрожжи 30 г

Изюм 25 г

Манная крупа 18 г

Агар-агар 5 г

Сахар 8 г

IV. Вода 350 мл

Дрожжи 40 г

Манная крупа 13 г

Сахар 13 г

Агар-агар 4,5 г

Методика приготовления среди по рецепту III. Дрожжи тщательно растирают и помещают в дистил­лированную воду, налитую в алюминиевую кастрюлю или в фарфоровый стакан. Тщательно перемешивая, доводят до кипения. Из изюма предварительно уда­ляют косточки, тщательно промывают его, растирают в фарфоровой ступке и кладут в кипящую воду с дрожжами.

Смесь варят на слабом огне при тщательном пе­ремешивании в течение 45 мин. Затем в нее засыпают манную крупу и варят еще 25 мин. Агар-агар предва­рительно замачивают в дистиллированной воде в те­чение 30—40 мин, после чего кладут в кипящую среду и кипятят 3—5 мин. Если вода выкипит, ее добав­ляют до первоначального объема. Готовую среду охлаждают до 50—60 °С и разливают в тщательно вымытые и простерилизованные пробирки или ста­канчики (примерно на 1 —1,5 см их высоты), покры­вают чистой марлей и еще раз охлаждают до ком­натной температуры. В таком виде среду можно ис­пользовать либо сразу после охлаждения, либо через некоторое время. Хорошо приготовленная среда может храниться в холодильнике 3—4 суток в ста­канчиках или пробирках, закрытых ватными проб­ками.

Перед тем как поместить мух на среду в стакан­чики, поверхность среды засевают дрожжами. Для этого свежие дрожжи разводят в дистиллированной воде до консистенции сливок, мягкой кисточкой одну каплю переносят на поверхность среды и дают ей подсохнуть. В приготовленные таким образом стакан­чики со средой переносят мух либо для размножения, либо специально подобранные пары для скрещива­ния. По такой же методике готовят среды и по дру­гим рецептам.

Дрожжи для приготовления сред должны быть обязательно свежими, среда не слишком твердой (мо­лодые личинки не могут проникнуть в глубь твердой среды и погибают) и не слишком жидкой (в жидкой среде могут погибнуть отложенные яйца).

Наркотизация мух. Анализ и подсчет мух, а также отбор девственных самок и подбор родительских пар для скрещивания проводят на матово-белом стекле под лупой после того, как их усыпят серным эфиром.

Для этой цели мух помещают в эфиризатор (морил­ку) или, если специального эфиризатора нет, в обыч­ную пробирку или стаканчик, в которых размножают мух. К. этому стаканчику подбирают плотную корко­вую пробку, в нижней части которой делают углуб­ление. В это углубление вставляют плотный ватный тампончик, смачиваемый из капельницы по мере на­добности 1—2 каплями серного эфира. Стаканчик с мухами осторожно постукивают об ладонь (мухи при этом собираются в нижней его части), затем осторожно снимают ватную пробку, накрывают ста­канчик эфиризатором и опрокидывают так, чтобы стаканчик с мухами был наверху. Легким постукива­нием стаканчика о ладонь всех мух переводят в эфи­ризатор и закрывают его пробкой с ватным тампо­ном, смоченным одной каплей эфира. Как только заснет последняя муха, их осторожно вытряхивают из эфиризатора на молочно-белое стекло и, пользуясь лупой и мягкой кисточкой, быстро подсчитывают, так как в наркотизированном состоянии они могут нахо­диться только около 5 мин. Если наркотизацию сле­дует продлить, мух накрывают большим часовым стеклом, под которое вкладывают ватный тампон, смоченный одной каплей эфира. Если эти мухи нужны для последующего размножения, их помещают в чи­стые пробирки с питательной средой, засеянной дрож­жами. В одну пробирку для размножения следует помещать 2—3 самки и 3—5 самцов. Для того чтобы сонные мухи не упали на дно пробирки и не увязли в среде, их помещают на чистую стенку стаканчика со средой, и держат стаканчик в горизонтальном по­ложении до тех пор, пока мухи не проснутся.

По окончании работы с мухами их усыпляют и выбрасывают. От большой дозы эфира мухи поги­бают через 3—5 мин. О их гибели можно заключить по растопыренным кверху и в стороны крыльям и без­жизненно вытянутым лапкам.

Всю работу с дрозофилой и результаты наблюде­ний фиксируют в соответствующем журнале. Форма журнала может быть различной, но в нем дол­жны быть точно зафиксированы дата постановки опыта или размножения линии, основные сведения о родительских парах, взятых для гибридизации, ре­зультаты анализа и т. д.

Date: 2015-09-02; view: 575; Нарушение авторских прав