Понятие о микродиссекции. Этапы микродиссекции

Этот метод был предложен в 1981 для картирования специфических последовательностей политенных хромосом Drosofila melanogaster. Суть метода заключается в том, что из метафазных хромосом под микроскопом вырезают интересующий участок, который затем клонируют, получая специфическую для данного района библиотеку. Является достаточно быстрым и эффективным методом получения библиотек, специфичных для определенных хромосомных участков.

Этапы:

1.«вырезания» целой хромосомы или какого-либо специфического участка.

2. клонирование данного участка

3.получение ДНК зондов. Механизм создания зондов полного окрашивания стало возможно после образования метода микродиссекции.Зонды полного окрашивания хромосом окрашивают хромосому по всей длине (поэтому они не пригодны для окраски внутрихромосомных перестроек).

Использование метода микродиссекции позволило получить маркеры, сыгравшие важную роль в исследовании группы наследственных лейкемий, нейрофиброматоза-2, синдрома Беквита-Видеманна.

Помимо средства получения маркеров из заданных районов генома, в настоящее время метод микродиссекции довольно широко применяется для " раскрашивания хромосом ". Это позволяет однозначно идентифицировать фрагменты хромосом и мини-хромосомы, которые появляются в гибридных клетках или при некоторых наследственных заболеваниях.

Лазерная захватывающая микродиссекция — метод изоляции отдельных клеток с необходимыми характеристиками из биологических образцов ткани, позволяющий избежать возможных повреждений или изменений клетки либо минимизировать их.

Процедура

Прозрачная плёнка накладывается на образец, затем нужные клетки идентифицируются под микроскопом. Под воздействием лазерного луча клетки слипаются с плёнкой и вместе с ней вынимаются из образца для дальнейшего исследования.

Применение

ЛЗМ позволяет избежать повреждений морфологии клетки и её химического состава, что делает этот метод оптимальным при изучении ДНК, РНК, белкового состава клетки. Среди возможных образцов — мазки крови, цитологические препараты, культуры клеток, и даже замороженные и парафинированные образцы.

К недостаткам метода микродиссекции относятся техническая сложность и то, что после получения библиотеки необходимо проводить картирование полученных клонов.

Date: 2015-09-02; view: 998; Нарушение авторских прав