Нейтрофилов (визуальный способ)

Необходимые материалы и реактивы: микропипетки или пипетки для взятия крови на СОЭ; пробирки стеклянные (лучше силиконизированные) или из пластика; предметные стекла; микроскоп с иммерсией; термостат; свежеприготовленный раствор 5% цитрата натрия; живая суточная культура микроор­ганизмов, например стафилококк штамм 209; оптический стандарт мутности с образцами в 5, 10, и 20 ед., соответ­ствующими 0,5 -, 1- и 2-миллиардной взвеси микроорганизмов.

В пробирку, содержащую 0,1 мл 5% раствора цитрата натрия, вливают 0,2 мл капиллярной крови и добавляют 0,1 мл 2-миллиардной взвеси микроорганизмов. Инкубируют 30 мин при 37°С. Из взвеси клеток и микроорганизмов делают мазки, оставшуюся взвесь продолжают инкубировать еще в течение 1 ч и снова делают мазки. Мазки фиксируют смесью Никифорова и окрашивают по Романовскому-Гимзе. Под микроскопом просматривают 100 нейтрофилов, определяют количество поглощенных микробов.

Оценка фагоцитоза in vitro производится в соответствии фазами реакции: через 30 мин и 2 часа. Поглотительная способность клеток оценивается по двум показателям: процент фагоцитоза, количество фагоцитов на 100 нейтрофилов через 30 мин и 2 часа инкубации (в процентах), ФИ – среднее число микробов на 1 фагоцит через 30 мин и 2 часа инкубации. О последней фазе фагоцитоза – переваривании – судят по коэф­фициентам процента фагоцитоза и ФИ (отношение соответствующих показателей, изученных через 2 часа контакта, к тем же показателям через 30 мин). Фагоцитоз считается за­вершенным при коэффициентах менее 1.

НСТ – ТЕСТ

Тест с нитросиним тетразолием (НСТ-тест) используется для выявления так называемых активированных гранулоцитов и моноцитов. В основе активации фагоцитов лежит резкое усиление окислительных реакций. К числу индикаторов этого явления относится реакция с нитросиним тетразолием: поглощенный из раствора, он под влиянием окислительных процессов в клетке превращается в нерастворимый формазан. Последний определяется в клетке в виде темно-синих гранул.

Различают спонтанный и стимулированный НСТ-тест. Результаты спонтанного теста указывают на количество активированных клеток в крови больного, например под влиянием инфекции. Результаты стимулированного теста дают представ­ление о способности исследуемых нейтрофилов к активации in vitro. Этот тест следует проводить при сниженном числе спонтанных НСТ-положительных клеток у больного с бакте­риальной инфекцией, чтобы выявить наличие или отсутствие дефекта окислительного метаболизма.

Date: 2015-07-02; view: 474; Нарушение авторских прав