Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ)

В асептических условиях из вены берется 5 – 10 мл крови в пробирку, содержащую 100 – 200 ЕД. гепарина. Содержимое пробирки осторожно перемешивают и оставляют на 60 мин. в термостате при t 37°С для осаждения эритроцитов, которое может быть ускорено добавлением декстрана, желатина и др. После инкубации в термостате надосадочный спой плазмы, обогащен­ный лейкоцитами, отсасывают в отдельную стерильную про­бирку. Определяют число лейкоцитов в 1 мл. Затем взвесь лейкоцитов разводят питательной средой 199 (содержащей 200 ЕД. пенициллина и 100 ЕД. стрептомицина в 1 мл) таким образом, чтобы в 1 мл содержалось 1.000.000 – 2.000.000 лейкоцитов, 20% аутологичной плазмы и 80% культуральной среды.

Приготовленную лейкоцитарную взвесь разливают в стериль­ные флаконы по 1 мл, добавляют 0,1 мл предварительно оттитрованного аллергена и пропускают газовую смесь, содержащую 5% углекислого газа. Флаконы закрывают пробками и помещают в термостат при t 37°С на 5 – 7 дней. За это время культура лейкоцитов периферической крови освобож­дается от сегментоядерных лейкоцитов, исключая эозинофилы, и содержит преимущественно одноядерные клетки, которые идентифицируются как малые, средние и большие ЛФ, бласты, ретикулярные клетки и макрофаги.

Интенсивность РБТЛ оценивается различными методами.

Морфологический метод заключается в подсчете в окрашен­ном мазке активированных клеток-бластов на 1000 клеток и определении их процентного содержания. Реакция расценивается как положительная, если число активированных клеток составляет не менее 4% от общего числа культивируемых клеток; максимальное число активированных клеток при действии специфического аллергена может достигать 35%.

Изотопный метод позволяет определить общую активность культур лимфоцитов путем подсчета, включенного в клетки, синтезирующие ДНК, меченного ^ЗН-тимидина, добавляемого в культуральную среду.

Достоверность РБТЛ проверяется контрольными исследова­ниями с культурой исследуемых ЛФ без добавления аллергена (для выявления спонтанной Б.л.) и с культурой ЛФ здоровых доноров, инкубируемой с соответствующим аллергеном.

2.