Полезное:
Как сделать разговор полезным и приятным
Как сделать объемную звезду своими руками
Как сделать то, что делать не хочется?
Как сделать погремушку
Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами
Как сделать идею коммерческой
Как сделать хорошую растяжку ног?
Как сделать наш разум здоровым?
Как сделать, чтобы люди обманывали меньше
Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили?
Как сделать лучше себе и другим людям
Как сделать свидание интересным?
Категории:
АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника
Методические аспекты определения гликированного гемоглобина
|
|
Существует несколько методов определения гликированного гемоглобина, используемых для клинических целей (таблица 25).
Таблица 25
| Аналитические методы для определения гликированного гемоглобина | |||||
| Метод | Принцип метода | Выявляемые фракции | Объем крови | Время анализа | Комментарии |
| Колоночная хроматография (макроколонка) | Ионообменная хроматография | HbA1a, HbA1b, HbA1c | 100 мкл | 8 – 18 ч | Лабильный HbA1c определяется частично, интерференция с HbF, HbS |
| Микроколонки | Ионообменная хроматография | HbA1a | 100 мкл | 20 мин | Интерференция с вариантами Hb, метод чувствителен к колебаниям температуры и рН |
| ВЭЖХ (HPLC) | Ионообменная хроматография | HbA1a, HbA1b, HbA1c | 10–400 мкл | 3,3-8 мин | Интерференция с вариантами Hb, метод чувствителен к колебаниям температуры и рН |
| Тиобарбитуровая кислота | Гидролиз и колориметрия кетогексоз | HbA1 | 2-4 мл | 8 ч | Определяются только кетоамины, реагируют сиаловые кислоты, результат в мкмоль/моль Hb |
| Электрофорез | Электрофорез в геле агарозы | HbA1 | 20 мкл | 35 мин | |
| Изоэлектрическое фокусирование | Градиент рН 5 – 6,5 | HbA1c | 10 мкл | 1 ч | Определяются одновременно изоформы Hb |
| Аффинная хроматография | Фенилборонатная колонка | Общий гликогемоглобин | 150 мкл | До 20 проб/ч | Результаты, как правило, выше, чем при других методах |
| Иммунохимические методы | Моноклональные антитела, иммунотурбидиметрия | HbA1c | 10-50 мкл | До 250 проб/ч | Возможно определение HbA2, HbS1c |
Катионообменная хроматография определяет гликирование, как исчезновение положительного заряда на поверхности молекулы гемоглобина. Со слабого катионообменника при увеличении ионной концентрации и/или повышении рН гликогемоглобины элюируются перед негликированными гемоглобинами. Поэтому гликогемоглобины получили терминологию «быстрые гемоглобины». Катионообменная хроматография проводится в микро- мини- и макроколоночных вариантах и как часть высокоэффективной хроматографии. Пик HbA1c при катионной хроматографии негомогенен и содержит некоторое количество вариантных форм негликозилированных гемоглобинов. Улучшить разделение возможно при использовании специальных материалов (поли-CATA), однако это метод не для клинических лабораторий. Этот метод можно использоват для референтных лабораторий. Все катионообменные хроматографические методы очень чувствительны к колебаниям температуры и рН.
Электрофорез. Изменение поверхностного заряда молекулы гликированных гемоглобинов используется для электрофоретического разделения на геле агарозы и для изоэлектрического фокусирования в геле с градиентом рН 5,0 – 6,5. В геле агарозы практически невозможно разделить подфракции гликозилированного Hb, но это можно сделать с помощью изоэлектрического фокусирования на геле агарозы. В настоящее время разработана технология автоматизированного проведения электрофореза гликированного Hb, это, в частности, решено фирмой Sebia (Франция).
 |
Рис. 24. Электрофореграмма с разделением фракций гликированного гемоглобина на геле агарозы.
Иммунохимические методы. Аминокислота валин, гликированная D-глюкозой на N- терминальном конце b-цепи, оказалась структурным эпитопом, который легко распознается антителами. Основываясь на этом, разработаны радиоиммунные и иммуноферментные методы с использованием моноклональных или поликлональных антител. При этом отсутствует интерференция с аномальными формами гемоглобина.
Фирмой Thermo Clinical Labsystems для биохимических анализаторов семейства Konelab разработан тест-набор для определения HbA1c, основанный на методе турбидиметрии. Последовательность процедур включает:
· Гемолиз образца крови
· HbA1c + специфические антитела = растворимый комплекс антиген-антитело + избыток антител
· Избыток антител anti-HbA1c + полигаптен = нерастворимый комплекс
· Турбидиметрическая детекция нерастворимого комплекса
· Общий гемоглобин + Фосфатный буфер = нерастворимый комплекс
· Колориметрическая детекция
· Автоматический расчет HbA1c, в % и в г/л
· HbA1c% = 0,82 х (HbA1c (г/л) х 100)/ Hb(г/л) + 2,76
В состав набора входят: гемолизирующий реагент, калибраторы, контрольные материалы (нормальный и патологический уровень). Исследование проводится на венозной или капиллярной крови. Внутрисерийная и межсирийная вариация теста не превышает 8 %.
Существенным при определении гликогемоглобина является проблема стандартизации. До настоящего времени не разработан референтный метод и нет стандартного образца для гликогемоглобина. Поэтому при проведении контроля качества нет единого контрольного материала, в многочисленных системах внешнего контроля качества используются метод- и/или производитель-зависимые контрольные материалы.
Date: 2015-07-17; view: 1520; Нарушение авторских прав