Методы исследований

В комплекс обследований больных с ЯБ входили клинические, инструментальные и лабораторные методы.

Клиническое обследование включало изучение жалоб, анамнеза и объективного статуса. Для исследования анамнеза и особенностей клиники использовалась разработанная формализированная карта наблюдения.

Из инструментальных методов применялись эндоскопические, рентгенологические, электрогастрографические, манометрические, эхографические исследования секреторной функции желудка.

Фиброэзофагогастродуоденоскопия (ФЭГДС) проводилась всем больным по общепринятой методике гибким волоконным фиброэндоскопом JiF-Q "Olympus" (Япония). Исследовались локализация, размеры, глубина язвенного дефекта, наличие язвенных осложнений (кровотечение, перфорация, пилоростеноз, пенетрация). Выраженность явлений воспаления, состояния слизистой желудка, двенадцатиперстной кишки, пищевода, функцию кардиального жома, наличие гастродуоденального и дуоденогастрального рефлюкса. При проведении ФЭГДС выполнялась биопсия желудка (2 биоптата в области тела и антрального отдела по большой кривизне, 1 биоптат по малой кривизне в области тела желудка и 2 биоптата по медиальной и латеральной стенкам луковицы двенадцатиперстной кишки). Материал биопсий фиксировался в формалине и модифицированном растворе Буена, после чего проводились гистологические и иммуногистохимические исследования.

В рентгенологические исследования входили - рентгенография желудка, дуоденография, при необходимости холецистохолангиография, тракционная рентгенбаллоннаяграфия, ирригография. Оценивались форма, расположение, ширина просвета, соотношение частей, характер перистальтики, скорость эвакуации. Выявлялись признаки дуоденогастрального рефлюкса, гастро- и дуоденостаза, нарушения дуоденальной проходимости.

У больных с сочетанной гепатобилиарной патологией и при подозрении на ее наличие проводилась холецистохолангиография. Ирригография проводилась у больных с сочетанной проктологической патологией, по общепринятой методике.

В электрогастрографических исследованиях применялась методика М.А.Собакина (113) с использованием отечественного аппарата ЭГС 4М.

Регистрировались биоэлектрические потенциалы мышечных сокращений желудочной стенки с оценкой функционального состояния гастродуоденальной моторики.

На электрогастрограммах (ЭГГ) определялась амплитуда колебаний в мВ, средний биопотенциал, частота перистальтических сокращений в 1 минуту. Оценка типа гастрограмм проводилась по классификации М.Г.Красильникова (68), в которой различают 4 типа: нормокинетический (амплитуда колебаний 0,2-0,35 мВ), гиперкинетический (0,3-0,5 мВ), гипокинетический (ниже 0,2 мВ) и тормозной (ниже 0,1 мВ).

Желудочный кровоток изучался по результатам реоплатизмографии и реографии желудка, проводившийся с помощью реогастрографа (ВП2. 893.001 пс) с компьютерной приставкой. Больному натощак вводили в желудок специальный интрагастральный зонд с установленными на нем 11 металическими электродами, соединенными с реогастрографом. Затем производили измерение полного модуля электрического сопротивления тканей желудка, расположенных между соседними электродами. Переключение зон обследования желудка и частот зондирования осуществляли в ручном или автоматическом режиме. Данные исследования выводились на цифровом табло и мониторе компьютера в виде реоплатизмографического профиля желудка, а в последующем распечатывались на принтере.

Исследования в частном режиме 200 и 300 кГц позволяет судить о состоянии желудочной стенки и, косвенно, о степени и характере кровенаполнения. Проведение исследований в другом частотном режиме 10 и 200 кГц за короткий промежуток времени позволяет получить информацию о содержании желудка и выводных протоков желез желудочной слизистой на участке расположения электродов зонда. Абсолютное значение величин электрических сопротивлений соответствует показателям секреторной активности исследуемого участка слизистой. При этом, на регистрируемом профиле желудка по абсцисс регистрируется анатомические образования (точки координаты), в которых производятся измерения, а по оси ординат величины секреции в Ом и ммоль/л (рассчитанных эмпирически создателями прибора) в каждой зоне обследования.

Кислотопродукция исследовалась аспирационным способом и методом внутрижелудочной рН - метрии. В исследовании аспирационным способом применялись методики Е.С.Рысса и А.Р.Лужис (63) и Maratka (145). Выяснялись следующие вариации желудочной гиперсекреции: преобладающей гистаминовый, преобладающий инсулиновый, смешанный. Для титрования желудочного сока использовался универсальный автоматический титратор СН - 407 (Венгрия). Внутрижелудочная рН - метрия проводилась двухэлектродными рН зондами на отечественном ацидогастрометре АГМ - 01 М по традиционной методике. Исследовалась значение рН в желудке, области пищеводно-желудочного перехода. При наличии желудочно-пищеводного рефлюкса рН снижалась ниже 4,0 ед. При рН метрии зонд для измерения кислотности устанавливался под рентген контролем, для избежания ошибок, связанных с регистрацией кислотности в кишке. Измерения базальной секреции начиналось через 20 минут после установления зонда, а чтобы предотвратить колебания кислотности, вызванные механическим раздражением слизистой, после измерения базальной кислотности для стимулирования секреции вводили под кожу гистамин, из расчета 0,1 мг/кг массы тела больного. Уровень кислотности регистрировался каждые 5 минут, отмечался точками на графике рН метрической кривой.

Для исключения сочетанной абдоминальной патологии проводилась ультразвуковая томография (УЗТ) органов брюшной полости и забрюшинного пространства. Исследования проводились на ультразвуковом многофункциональном томографе "Toshiba" (Япония).

К специальным методам относились изучение гликопротеидов желудочного сока, выявление хеликобактерносительства, морфометрические и иммуногистохимические исследования биоптатов желудка и двенадцатиперстной кишки, радиоиммунологические исследования гормонов сыворотки крови.

Для оценки состояния защитного противоязвенного барьера желудка и двенадцатиперстной кишки исследовались гликопротеиды желудочного сока. Изучалось содержание сиаловой кислоты, фукозы, гексозаминов. Сиаловые кислоты определялись резорционовым методом, фукозы - цистеиновым методом по Z.Dishbe, L.B.Jhettis (145), гексозамины по Р.В.Меркульевой (94).

Хеликобактерносительство определялось бактериоскопически и тестом на уреазную активность гастробиоптатов. Мазки - отпечатки готовились путем раздавливания биоптатов, полученного фиброгастроскопически. Далее фиксировали спиртом, окрашивались по методике Гимза. Обсеменность хеликобактериями оценивалась по методу Л.И.Аруина (1988) в условных единицах: до 20 бактерий в поле зрения - +, до 60 бактерий ++, более 60 +++. Одновременно выполнялся тест на уреазную активность геликобактеров (Marshall, 1983), обладающего высокой корреляцией культуральным методом.

Для морфометрических исследований биопсийный материал фиксировался в формалине и подвергался гистологической обработке по общепринятой методике. Производилась заливка в формалин, готовились срезы толщиной 5 микрон, которые окрашивались гематоксилин-эозином ставилась ШИК реакция. Морфометрическое исследование препаратов заключалось в изучении под микроскопом с помощью окуляра микрометра толщины слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, глубина желудочных ямок, длины и плотности желудочных желез. Число желез подсчитывали в 1 мм ширины препарата на уровне средней или нижней трети при продольном их срезе. В главных желудочных железах подсчитывали количество главных, обкладочных и добавочных клеток, выявлены признаки гипертензии. В препаратах двенадцатиперстной кишки исследовалось состояние и плотность бруннеровых желез.

Эндокринные G и D-клетки исследовались следующим образом. Биоптаты пилорического отдела желудка и двенадцатиперстной кишки, фиксировали в модифицированном растворе Буэна, а затем заливали в парафин. Готовились серийные срезы толщиной 3 мкм. Депарафинированные срезы окрашивали гематоксилин-эозином. Проводилась иммуно-гистохимическая реакция с использованием собственных антисывороток к гастрину 1-17 и соматостатину 1-14 и комплекса пероксидаза-антипероксидаза фирмы " Miles" (Англия). Микроскопические исследования проводились с использованием светового микроскопа и сетки Г.Г.Автандилова, подсчитывались окрашенные эндокринные клетки в каждом препарате в 5-10 полях зрения с последующим пересчетом на 1 мм.кв. площади.

Кристаллографические исследования. Суть метода состоит в нанесении небольшой капли биологической жидкости (в нашем исследовании – плазмы и сыворотки крови больного ДР) на предметное стекло. После ее высыхания при определенных условиях получается сухая пленка – фация, в которой на микроскопическом уровне анализируются радиальные трещины, формирующие сектора фации, перпендикулярные трещины, ограничивающие отдельности, центры концентраций солей и белков – конкреции и некоторые другие формообразующие элементы. Причем высыхание капли на ровной поверхности предметного стекла происходит неравномерно, учитывая разную толщину капли в центре и на периферии, а также неодинаковое по своей величине действие онкотических и осмотических сил. Формообразование фации биологической жидкости зависит от тяжести патологического процесса в организме и меняется при его положительной или отрицательной динамике на системном уровне.

Оценка состояния гипоталамогипофизарногонадной системы гормональной регуляции проводилась радиоиммунологическими методами. Исследовались уровни содержания в сыворотке крови следующих гормонов: адренокортикотропного (АКТГ), кортизола (КР), соматостатина (СТ), трийодтиронина (Т3), тетрайодтиронина (Т4), инсулина (И), гастрина (Г), фолликулостимулирующего гормона (ФСГ, фоллитропин), лютеинизирующего гормона (ЛГ), пролактина (ПЛ), эстрадиола (Э), прогестерона (П) и тестостерона (Т).

Радиоиммунологические исследования проводились по общепринятым методикам с использованием стандартных наборов для определения гормонов сыворотки крови фирм "Jea-jre-jerin" - (Франция), и DR-J - (США) и института биоорганической химии АН Белоруссии. Подсчет радиоактивности проб производился на автоматическом гамма-счетчике "Гамма - 12" отечественного производства.

Математическая обработка полученных данных и построение стандартных калибровочных кривых осуществлялась на компьютере IBM-PC с использованием пакета прикладных программ.

Клинические, инструментальные и специальные методы исследования производились при поступлении в стационар в процессе лечения.

Математическая обработка полученных данных включала в себя расчет средних величин и средней ошибки (m). Вычислялся критерий Стьюдента (I) и определялся доверительный интервал для значений исследуемых показателей (m+tm).