Главная Случайная страница


Полезное:

Как сделать разговор полезным и приятным Как сделать объемную звезду своими руками Как сделать то, что делать не хочется? Как сделать погремушку Как сделать неотразимый комплимент Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами Как сделать идею коммерческой Как сделать хорошую растяжку ног? Как сделать наш разум здоровым? Как сделать, чтобы люди обманывали меньше Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили? Как сделать лучше себе и другим людям Как сделать свидание интересным?

Категории:

АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника






Регулируемые промоторы





Наиболее широко для создания экспрессирующих векторов используются следующие сильные регулируемые промоторы: промоторы lac- и trp-оперонов Е.coli; специально сконстру­ированный tac-промотор, состоящий из отдельных фрагментов lac- и trp-оперонов и ряд других. С каждым из них связываются соответствующие репрессоры, ко­торые опосредуют включение и выключение транскрипции специфических генов.

В отсутствии лактозы в среде lac- промотор Е. coli находится в репрессированном состоянии и транскрипция его гена блокирована. Индукция, или включение lac- оперона происходит при добавлении в среду лактозы. Аналогично, активность trp-оперна регулируется добавлением триптофана.

Другим способом регулирования экспрессии является использование термочувствительных промоторов, например промотор бактериофага рL. Белок- репрессор, блокирующий данный промотор, активен при 310С, но неактивен при 380С, следовательно, при инкубировании бактерий при 310С клонированный ген не экспрессируется и, наоборот повышение температуры вызывает инактивацию репрессора и высокий уровень синтеза нужного белка. Это очень удобно, т.к. позволяет управлять процессом культивирования продуцента, проводя его наработку при 310С и вызывая синтез целевого продукта только при достижении оптимального состояния культуры (стадия роста, плотность), путем повышения температуры до 380С.

Наличие регулируемых промоторов позволяет предотвращать преждевременный, бесконтрольный синтез неконститутивных рекомбинантных белков, который будет тормозить рост клеточной культуры в lag- и log-фазах и запускать его только после накопления необходимого, оптимального количества биомассы клеток (в стационарной фазе).

Суммарная активность экспрессируемого гена возрастает с ро­стом числа копий рекомбинантной ДНК в расчете на клетку. Ис­пользуя многокопийные плазмиды, можно обеспечить сверхсинтез нужных белковых продуктов. Поэтому получение бактериаль­ных штаммов-сверхпродуцентов - одна из важ­нейших задач современной биотехнологии в экономическом, ме­дицинском и социальном аспектах. Обычно используемые сейчас плазмидные векторы поддержива­ются в клетке в количестве 20-50 копий и это не предел. Так в лабораторных условиях получены температурно-чувствительные мутантные плазмиды, способные накопить до 1- 2 тыс. ко­пий на клетку без нарушения жизненно важных функций бакте­рий. Естественно, подбор условий культивирования для таких продуцентов играет решающее значение.






Date: 2016-02-19; view: 308; Нарушение авторских прав

mydocx.ru - 2015-2019 year. (0.004 sec.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав - Пожаловаться на публикацию