Главная Случайная страница


Полезное:

Как сделать разговор полезным и приятным Как сделать объемную звезду своими руками Как сделать то, что делать не хочется? Как сделать погремушку Как сделать неотразимый комплимент Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами Как сделать идею коммерческой Как сделать хорошую растяжку ног? Как сделать наш разум здоровым? Как сделать, чтобы люди обманывали меньше Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили? Как сделать лучше себе и другим людям Как сделать свидание интересным?

Категории:

АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника






Этапы изготовления гистопрепаратов и техника микроскопирования





Подготовка гистологического материала и

приготовление парафиновых срезов

 

  1. Фиксировать небольшие (0,5 х 0,5 х 1,0 см) кусочки органов в 10% водном растворе формалина (или жидкости Буэна: 15 объемов насыщенного водного раствора пикриновой кислоты + 5 объемов формалина + 1 объем ледяной уксусной кислоты) – 24 часа. (Величина кусочка не должна превышать указанную, так как фиксатор за сутки проникает на глубину не более 0,2 см. Объем фиксатора должен превышать объем кусочка в 30-50 раз).
  2. Промыть кусочки в проточной воде – 24 часа.
  3. Обезводить кусочки (и частично уплотнить) в спиртах возрастающей крепости – 700, 800, 900, 960 и 1000 (в зависимости от характера материала от 6 до 24 часов).
  4. Выдержать в ксилоле – 2 часа (в хлороформе – 24 часа) – это связано с тем, что парафин не соединяется со спиртом.
  5. Выдержать в насыщенном растворе ксилола (или хлороформа) с парафином при температуре 370 С (в термостате) – 2 часа (можно до суток), чтобы избежать большого перепада температур.
  6. Выдержать в чистом парафине (или содержащем до 5 % пчелиного воска) при температуре 56-600 С.
  7. Залить материал парафином в бумажных или металлических формочках. Охладить в воде.
  8. Вырезать кусочки и наклеить на деревянные кубики.
  9. Изготовить тонкие (5-6 мкм) срезы на микротоме (санном или роторном).
  10. Поместить срезы на предметные стекла, смазанные яичным белком с глицерином.
  11. Расправить срезы на капле дистиллированной воды при легком подогревании.
  12. Подсушить срезы в термостате при температуре 370 С.

 

Окрашивание срезов гематоксилин-эозином

 

  1. Депарафинировать в ксилоле – 2 мин.
  2. Удалить ксилол 960 спиртом – 2 мин. Затем стекло со срезами поместить в дистиллированную воду – 2 мин (можно дольше).
  3. Окрашивание: на срез нанести каплю раствора гематоксилина на 2-3 мин.
  4. Срез поместить в водопроводную воду на 5-10 мин (можно на сутки, тогда гематоксилин лучше «вызреет» и окраска будет лучше).
  5. Срез ополоснуть дистиллированной водой и нанести каплю раствора эозина – 1 мин.
  6. Сполоснуть в 2-3 порциях дистиллированной воды по 0,5-1 мин в каждой.
  7. Обезводить в двух порциях 960 спирта по 1 мин в каждом (лучше капать из капельницы).
  8. Окончательно обезводить в 1000 спирте или карболксилоле – 1 мин.
  9. Просветлить срез ксилолом – 2 мин.
  10. Заключить срез в бальзам и покрыть покровным стеклом.

После этого препарат подсушивают, чтобы бальзам затвердел. Хранят препараты в защищенном от света месте.

Помимо этого классического и наиболее широко распространенного метода существует большое количество других методов для выявления различных клеточных и тканевых структур, а также цито- и гистохимические методы.

Техника микроскопирования гистологических препаратов приведена выше.

 

Таблица 2






Date: 2015-04-23; view: 911; Нарушение авторских прав

mydocx.ru - 2015-2019 year. (0.009 sec.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав - Пожаловаться на публикацию