Определение осахаривающей активности амилолитических микробных ферментных препаратов и ферментов солода

Цель работы: Определить осахаривающую активность ферментных препаратов различной природы и найти оптимальные концентрации.

Метод определения осахаривающей активности ферментов основан на определении скорости ферментативной реакции превращения крахмала в редуцирующие сахара. В процессе реакции образуется целый комплекс редуцирующих сахаров, поэтому осахаривающую активность определяют в пересчете на какой-либо один сахар, содержащийся в гидролизате в преобладающем количестве – мальтозу (при анализе солода), глюкозу (при анализе микробных ферментных препаратов).

За единицу осахаривающей активности или способности (ОС) принимают такое количество фермента, которое в определенных условиях катализирует расщепление до редуцирующих сахаров 1 микроэквивалента гликозидных связей крахмала.

Осахаривающая активность выражается числом указанных единиц в 1 г ферментного препарата.

Под стандартными условиями осахаривания крахмала для определения осахаривающей активности ферментного препарата понимают:

- 1 % раствор растворенного крахмала;

- температура 30 °С;

- рН 4,7 для ферментных препаратов грибного происхождения, рН 6 – бактериального происхождения, рН 4,8-4,9 для ферментов солода;

- продолжительность 10 минут (обеспечивает гидролиз 25 % гликозидных связей крахмала, что соответствует гидролизу 50% крахмала до мальтозы);

-концентрация субстрата в реакционной среде 0,667 %;

-объем реакционной смеси 30 мл (20 мл раствора крахмала и 10 мл ферментного препарата).

Далее с использованием йодометрического метода находят содержание образовавшихся сахаров.

Объекты исследования и реактивы:

- основной раствор крахмала (субстрат)

- ферментные препараты:

АФП (1% раствор)

ОФП (1 % раствор)

солод (основной раствор)

солод (рабочий раствор)

- кислота соляная (1 н раствор)

- йод (0,1 н раствор)

- натр едкий (0,1 н раствор)

- кислота серная (25 % раствор)

- натрия тиосульфат (0,1 н раствор)

- фосфатный буфер (раствор с рН 6,0 и рН 4,7)

Лабораторное оборудование и посуда:

- водяная баня (термостат)

- термометр

- электроплитка

- колбы конические объемом 100 и 250 мл

- цилиндры мерные объемом 10, 50 и 100 мл

- пипетки объемом 1, 2, 5, 10 мл

- бюретка для титрования

Задание (выполняется по бригадам с отдельным ферментным препаратом, затем результаты обсуждаются совместно):