Полезное:
Как сделать разговор полезным и приятным
Как сделать объемную звезду своими руками
Как сделать то, что делать не хочется?
Как сделать погремушку
Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами
Как сделать идею коммерческой
Как сделать хорошую растяжку ног?
Как сделать наш разум здоровым?
Как сделать, чтобы люди обманывали меньше
Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили?
Как сделать лучше себе и другим людям
Как сделать свидание интересным?
Категории:
АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника
|
Определить количество редуцирующих cахаров в гидролизате крахмала. Для этого следует использовать йодометрический и глюкозооксидазный методы- Йодометрический метод определения редуцирующих cахаров, основанный на способности йода в щелочной среде окислять альдосахара в соответствующие кислоты: CH2OH–(CHOH)4–CHO + I2 + 3 NaOH → глюкоза (альдосахар) → CH2OH –(CHOH)4–CO(ONa) + 2 NaI + 2 H2O глюконовая кислота Избыток йода титруют тиосульфатом натрия: I2 + 2 Na2S2O3 → 2 NaI + Na2S4O6 I2 + 2e → 2 I2- 2 S2- - 2e → S22- На анализ отбирают 25 мл полученного ранее нейтрализованного гидролизата и переносят в коническую колбу для титрования. С помощью пипеток вносят 10 мл 0,1 н раствора йода и сразу вслед за этим – 20 мл 0,1 н раствора едкого натра (щелочь вносят по каплям при перемешивании!). Колбу с опытным раствором закрывают бумажным колпачком и оставляют на 15 минут в темном месте. По истечении 15 минут к раствору добавляют 20 мл 0,1 н раствора серной кислоты, а также по каплям 1% раствор крахмала до тех пор, пока раствор не приобретет насыщенный фиолетовый цвет вследствие взаимодействия крахмала с избыточным непрореагировавшим йодом. Затем полученный раствор титруют 0,1 н раствором тиосульфата натрия до полного обесцвечивания. Одновременно ставят контрольный опыт с теми же количествами реагентов, с той лишь разницей, что вместо 25 мл гидролизата берут 25 мл дистиллированной воды. Объем 0,1 н раствора йода, пошедшего на окисление глюкозы до глюкуроновой кислоты, определяют по разности объемов тиосульфата натрия, пошедшего на титрование контрольного и опытного растворов. Разница в объемах контроля и опыта должна составлять 0,5-6 мл. Если она меньше 0,5 мл или больше 6 мл, то титрование повторяют с большим или меньшим соответственно объемом гидролизата. По полученным данным проводят расчет: Условная крахмалистость (УК) сырья определяется по формуле: УК = , % (1.1) где – количество глюкозы в навеске сырья по результатам титрования, соответствующая содержанию крахмала в сырье, г; 0,9 – коэффициент пересчета количества глюкозы на условный крахмал; М – навеска анализируемого сырья с учетом влажности (обычно от 11 до 40 %), г. Согласно уравнению ниже на титрование 1 грамм-эквивалента глюкозы приходится 1 грамм-эквивалент йода: С6Н12О6 + 3 NaOH + I2 → C6H11O7Na + 2 NaI + 2 H2O
Итак, из вышеуказанной пропорции находим, что 1 мл 0,1 н раствора тиосульфата натрия соответствует 9,008 мг глюкозы. Тогда количество глюкозы в опытном растворе определяется по формуле = , г(1.2) где Vк – объем 0,1 н раствора тиосульфата натрия (Nа2S2О3), пошедшего на титрование контрольного опыта, мл; Vо – объем 0,1 н раствора тиосульфата натрия (Nа2S2О3), пошедшего на титрование опытного раствора, мл; 9,008 – количество глюкозы, соответствующее 1 мл 0,1 н раствора йода, мг; Vа – 25 мл – объем пробы опытного раствора, отобранной на анализ; 1000 – коэффициент пересчета миллиграмм в граммы; n – коэффициент пересчета разбавлений. n = , (1.3) где V1 – объем клейстеризованной пробы (100 мл); V2 – объем фильтрата, отобранного на кислотный гидролиз (20 мл); V3 – объем фильтрата с учетом разбавления (100 мл); V4 –объем гидролизата, отобранного на нейтрализацию (40 мл); V5 – объем содержимого колбы (50 мл); V6 – объем пробы, отобранной на титрование (25 мл). k – поправочный коэффициент 0,1 н раствора йода: k = Vи/Vтс, (1.4) где Vи – 10 мл – объем 0,1 н йода, взятого на титрование для определения поправочного коэффициента; Vтс – объем 0,1 н раствора тиосульфата натрия (Nа2S2О3), пошедшего на титрование 10 мл 0,1 н раствора йода, мл. Результаты измерений и расчетов заносят в таблицу 2. Таблица 2 – Результаты эксперимента
- Глюкозооксидазный метод определения редуцирующих cахаров Ферментный препарат на основе глюкозооксидазы применяется в аналитике, благодаря высокой специфичности по отношению к β-D-глюкозе. Даже в отношении своего аномера – α-D-глюкозы – способность фермента к окислению в 150 раз ниже. ФАДН2 + О2 → ФАД + Н2О2
лактон глюконовой кислоты
глюконовая кислота Фермент представляет собой флавопротеин. На первом этапе ферментативная реакция протекает с образованием лактона глюконовой кислоты и восстановлением простетической группы ФАД. Образовавшийся лактон спонтанно гидролизуется до глюконовой кислоты. Далее восстановленная форма ФАД передает протоны на кислород с образованием перекиси водорода в количестве, эквимолярном окисленной глюкозе. Присутствующая в растворе пероксидаза катализирует окисление гексацианоферроата перекисью водорода с образованием окрашенного соединения гексацианоферриата калия: пероксидаза K4 [Fe(CN)]6 + O2 + H2O 4K3[Fe(CN)]6 + 4KOH В результате реакции раствор приобретает лимонно-желтый цвет. Интенсивность окраски пропорциональна количеству глюкозы в растворе (гидролизате). Вместо гексацианоферроата калия применяют о‑дианизидин или смесь 4-аминоантипирина с фенолом. Интенсивность окраски определяют на фотоколориметре. Содержание глюкозы в опытном растворе рассчитывают по формуле (1.5). Для проведения анализа готовят раствор глюкозооксидазы из стандартного реактива (см. приложение). В три пробирки вносят реактивы следующим образом: - контрольная проба – 2 мл рабочего раствора глюкозооксидазы; - опытная проба – 0,2 мл раствора, в котором определяется содержание глюкозы и 2 мл рабочего раствора глюкозооксидазы; - калибровочная проба – 0,2 мл калибровочного раствора глюкозы (1ммоль/л) и 2 мл рабочего раствора глюкозооксидазы. Пробирки инкубируют 15 минут при температуре 37 °С или 30 минут при температуре 20 С. Через 5-10 минут после начала инкубации пробирки интенсивно встряхивают. После окончания инкубации определяют оптическую плотность при длине волны 510 нм (470-540 нм, зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм против калибровочной пробы. Окраска устойчива в течение 1 часа после окончания инкубации. По полученным данным проводят расчет: = (Do / Dк) · 10, (1.5) где – концентрация глюкозы в опытной пробе, ммоль/л; Do – оптическая плотность опытной пробы; Dк – оптическая плотность калибровочной пробы; 10 – содержание глюкозы в калибровочной пробе, ммоль/л. Результаты измерений и расчетов заносят в таблицу 2.
|