ЗАНЯТИЕ № 4

Методы генной инженерии (2ч.)

Вопросы для обсуждения

1. Основные ферменты генной инженерии:

1.1. ферменты рестрикции

1.2. ДНК-полимераза

1.3. ДНК-лигаза

1.4. ревертаза

2. Гибридизация ДНК:

2.1. коннекторный метод

2.2. рестриктазно-лигазный метод

3. Полимеразная цепная реакция

4. Клонирование ДНК

5. Секвенирование ДНК:

5.1. химический метод

5.2. энзиматический метод

6. Химический синтез гена

Вопросы и задания для самоконтроля

1. Назовите основные этапы развития генной инженерии.

2. Что положено в основу номенклатуры рестриктаз?

3. Расшифруйте следующие рестриктазы: Hin d I, Hin d II, Eco RI, Eco RII, Bam HI.

4. Чем отличается библиотека кДНК от библиотеки геномной ДНК? Какая из них обладает большими генетико-инженерными возможностями и почему?

5. Определите последовательность стадий получения банка геномной ДНК и назовите для каждой из них фермент.

6. Определите последовательность стадий получения банка кДНК и назовите для каждой из них фермент.

7. В чем отличие коннекторного метода от рестриктазно-лигазного метода гибридизации нуклеиновых кислот?

8. Какой метод генной инженерии позволил У. Гилберту выявить мозаичное строение генов эукариот?

9. В каких случаях используется блоттинг-анализ?

10. Почему в методе ПЦР используют термоустойчивую ДНК-полимеразу?

11. Для каких целей используют метод ПЦР?

12. Почему полимеразную цепную реакцию прекращают после 20-25 циклов амплификации?

13. В ходе каких процессов новый генетический материал может попадать в бактериальную клетку?

14. Какой генетический материал можно считать вектором? Какими свойствами он должен обладать?

15. Какими свойствами обладают плазмидные векторы?

16. Какие используют векторы для генно-инженерных работ в клетках растений?

17. В чем принципиальное отличие методов секвенирования Максама – Гилберта и Сангера – Коулсона?

18. С использованием каких генно-инженерных методов была реализована программа «Геном человека»?

19. Кто первым осуществил синтез гена? Что кодирует этот ген, и какие методические приемы были при этом использованы?

20. Схематично изобразите энзиматическое секвенирование следующего фрагмента ДНК: 5′ ААТЦГЦАТТЦГАГГТ 3′.

21. Схематично изобразите химическое секвенирование следующего фрагмента ДНК: 3′ ГТГАЦЦТАЦГГАТАА 5′.