Полезное:
Как сделать разговор полезным и приятным
Как сделать объемную звезду своими руками
Как сделать то, что делать не хочется?
Как сделать погремушку
Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами
Как сделать идею коммерческой
Как сделать хорошую растяжку ног?
Как сделать наш разум здоровым?
Как сделать, чтобы люди обманывали меньше
Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили?
Как сделать лучше себе и другим людям
Как сделать свидание интересным?
Категории:
АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника
Протокол лабораторной работы
|
|
| Задание | Выполнение |
| 1. Зафиксируйте и окрасьте мазок крови | |
| 2. Проведите микроскопию мазка крови, зарисуйте все виды клеток, которые Вы видите, подпишите их | |
| 3. Определите лейкоцитарную формулу, сравните ее с нормативными показателями | |
| 4. Проведите микроскопию препаратов, найдите и зарисуйте ретикулоциты | |
| 5. Проведите анализ предложенных гемограмм согласно приведенным принципам. Сделайте заключение по гемограммам |
Красный костный мозг и методы его исследования.
Миелограмма, ее диагностическое значение
Существуют четыре основных подхода к дифференцировке костномозговых клеток, предопределенные исторически внедрением новых методов исследования: морфологический, цитохимический, иммунофенотипический, молекулярно-биологический.
Основным материалом для исследования является красный костный мозг, забираемый с помощью пункции грудины (стернальная пункция) или биопсии подвздошной кости (трепанобиопсия). Из полученного материала готовят мазки по стандартным технологиям либо исследуют суспензию клеток. Красный костный мозг исследуется четырьмя основными методами.
1. Морфологический метод. Морфологическая дифференцировка клеток костного мозга проводится при микроскопическом исследовании препарата, окрашенного по Романовскому–Гимзе, либо другими схожими методами. Наиболее ранние стадии дифференцировки костно-мозговых клеток (стволовые клетки, плюрипотентные предшественники, унипотентные клетки) морфологически неразличимы. Морфологическая дифференцировка миелоидных клеток возможна для делящихся и поэтому различимых клеток-предшественниц миелопоэза, эритропоэза, лимфопоэза, моноцитопоэза и мегакариоцитопоэза. В основе морфологической дифференцировки костномозговых клеток лежат особенности строения и окраски клетки в целом, ее ядра и цитоплазмы (табл. 9).
Таблица 9. Основные морфологические признаки костномозговых клеток при стандартных методах окраски (азур-эозин по Романовскому–Гимзе, Май–Грюнавальду и проч.)
| Клетка | Размеры, мкм | Особенности ядра | Особенности цитоплазмы | Соотношение ядра и цитоплазмы |
| предшественники полинуклеарных лейкоцитов | ||||
| Миелобласт | 15–20 | Округлое, хроматин нежносетчатый с равномерной окраской и калибром нитей, видны 2–5 ядрышек | Базофильная, содержит зернистость (у эозинофильных миелобластов представлена одинаковыми элементами, располагающимися и на ядре фиолетового или коричневатого цвета; у базофильных миелобластов зернистость обильная, почти черная, полиморфная; у нейтрофильных миелобластов зернистость мелкая, незначительная) | Ядро занимает преимущественное место, цитоплазма узким ободком окружает его |
| Промиелоцит | > 25 | Овальное или бобовидное, располагается эксцентрично, хроматин более грубый, неравномерный, видны ядрышки | Базофильная, но степень базофилии различна, обильная зернистость (у нейтрофильного промиелоцита зернистость имеет красно-фиолетовый, фиолетово-синий, темно-сине-красный и синий цвет; у эозинофильного промиелоцита зернистоть плотно заполняет цитоплазму, она крупная равномерная, базофильная, часть зерен имеет эозинофильную окраску; для базофильного промеилоцита характерна крупная полиморфная базофильная зернистость) | Ядро занимает преимущественное место, его окружает цитоплазма более широким, чем у миелобласта, ободком |
| Миелоцит | 14–16 и менее | Овальное, бобовидное, с бухтообразным вдавлением, хроматин более грубой структуры, с чередованием темных и светлых участков, сетчатое строение полностью утрачено | Оксифильная, светло-розовая или светло-фиолетовая, специфическая зернистость хорошо различима, характерна для нейтро-, эозино- или базофилов, в целом зернистость более скудная, чем у промиелоцита | Цитоплазма занимает более значительное место, чем у промиелоцита |
| клетки лимфатического ряда | ||||
| Лимфобласт | 20–22 | Округлое, хроматин нежносетчатый, 1–2 ядрышка | Нежнобазофильная, с перинукларной зоной просветления | Ядро занимает большую часть клетки |
| Пролимфоцит | 11–12 | Груборыхлая структура ядра, видно ядрышко, ядро более бледно окрашено | Нежнобазофильная, может быть скудная азурофильная зернистость, цитоплазма имеет перинуклеарное просветление | Ядро занимает большую часть клетки |
| клетки моноцитарного ряда | ||||
| Монобласт | 15–20 | Бобовидное с неправильными волнистыми очертаниями, но может быть схожим с миелобластом и лимфобластом, имеет 2–4 ядрышка | Нежно-голубая | Ядро занимает большую часть клетки |
| Промоноцит | 15–20 | Ядро неправильной формы, грубая структура хроматина, ядрышек не видно | Нежнобазофильная с мелкой, пылевидной зернистостью | Ядро занимает большую часть клетки, но ободок цитоплазмы более широкий, чем у монобласта |
| клетки эритроидного ряда | ||||
| Эритробласт | 16–20 | Округлое, нежносетчатый хроматин, 2–4 ядрышка | Яркобазофильная, без перинуклеарного просветления | Ядро занимает большую часть клетки |
| Пронормоцит | 16–20 | Округлое, четко очерченное ядро, более грубая структура хроматина, ядрышек нет | Яркобазофильная, перинуклеарное просветление | Ядро занимает большую часть клетки |
| Нормоцит | Инволюция ядра | Полихроматофилия, оксифилия | Ядро занимает меньшую часть клетки |
Морфологическое исследование красного костного мозга с определением процентного соотношения отдельных типов клеток представляет собой миелограмму.
2. Цитохимический метод дифференцировки костномозговых клеток связан с микроскопическим детектированием ряда ферментов, характерных для определенного уровня дифференцировки клеток (табл. 10). Дополнительные цитохимические тесты позволяют увеличить специфичность исследования клеток красного костного мозга, поскольку визуализируют отдельные химические вещества (нуклеопротеиды, ферменты, липиды и др.), присутствующие в клетках.
Таблица 10. Цитохимические маркеры костномозговых клеток
| Фермент/ органическое вещество – вариант метода | Для каких клеток характерен | Диагностическое значение |
| Нуклеопротеиды – метод Фейльгена, метиловый зеленый пиронин, авторадиография | Для клеток с разным уровнем синтеза РНК и ДНК | Диагностика лейкозов |
| Белки и аминокислоты – метод Шиффа для выявления NH2-групп, ферриферрицианидный метод для выявления сульфгибрильных групп и др. | Практически все клетки на разных стадиях дифференцировки | Предварительное исследование клеточных включений |
| Углеводы/гликоген – ШИК-реакция | Гранулоциты | Дифференцировка гранулоцитов |
| Липиды и суданофилия | Гранулоциты, особенно – зрелые формы, моноцитарные клетки | Дифференцировка гранулоцитов, определение моноцитарных клеток |
| Железо и другие неорганические элементы – реакция Перльса | Макрофаги, ретикулоциты (клетки стромы красного костного мозга) | Адекватность накопления железа |
| Фосфатазы – метод гомори, азосочетания и др. | Щелочная фосфатаза – только зрелые гранулоциты, кислая фосфатаза практически во всех клетках, но характер распределения и уровень различны | Диагностика лейкозов, лекарственных нейтропений и др. |
| Эстеразы | Для Т-лимфоцитов и моноцитарных клеток, эритроидных предшественников при патологических синдромах (Ди Гульемо) характерна a-нафтилацетат(бутират)эстераза, для гранулоцитов и моноцитарных клеток – a-нафтилAS-D-ацетатэстераза | Дифференцировка лейкозов, субклассификация Т- и В‑клеточных лейкозов |
| Дегидрогеназы | Максимальная активность в молодых клетках всех рядов миелопоэза | Диагностика лейкозов |
| Оксидазы/пероксидазы | Миело- и монобласты, гранулоциты | Диагностика лейкозов |
3. Иммунофенотипический метод основан на использовании проточной цитометрии и моноклональных антител в отношении как к мембранным структурам, так и к внутриклеточным (нуклеиновым кислотам, ферментам, структурам цитоскелета), что позволяет значительно увеличить информативность диагностических процедур.
4. Молекулярно-биологический метод дифференцировки костномозговых клеток связан с обнаружением мутаций в хромосомах, а также молекулярно-биологических маркеров ряда гематологических заболеваний.
Date: 2015-07-02; view: 917; Нарушение авторских прав