ГЕКСАХЛОРЦИКЛОГЕКСАН (ГХЦГ).

Объекты исследования: желудок с содержимым, печень, почки, кровь, моча.

Для изолирования из желудка с содержимым, печени или почек 100 г объекта из­мельчают, помещают в круглодонную колбу, смешивают с водой до кашицеобразной мас­сы. Далее проводят перегонку с водяным паром. Собирают 300 мл дистиллята. В ходе перегонки на внутренней стенке холодильника может появиться серовато-белый налет, а в дистилляте белые частицы ГХЦГ. После отгонки холодильник промывают эфиром. Эфирный р-р присоединяют к дистилляту. Дистиллят переносят в делительную во­ронку и три раза экстрагируют диэтил. эфиром по 100 мл. Эфирные вытяжки объе­диняют, промывают водой в делительной воронке. Затем эфир отгоняют до небольшого объема, переносят в выпарительную чашку и осторожно упаривают до сиропообразной массы. Эту массу исп-ют для обнаружения ГХЦГ следующими испытаниями.

Реакция дехлорирования с последующим нитрованием. Часть остатка из чашки помещают в колбу с обратным холодильником, добавляют двукратный объем 10% спир­тового раствора гидроксида калия и нагревают в течение часа на водяной бане. При ки­пячении со спиртовой щелочью ГХЦГ отщепляет 3 и более атомов хлора. Затем упаривают эту смесь до 1/3 объема, подкисляют азотной кислотой и прибавля­ют раствор нитрата серебра. При этом выпадает белый осадок хлорида серебра. Полученный осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают до небольшого объема, добавляют к нему 0,1 г нитрата натрия и 2 мл концентрированной серной кислоты. Смесь нагревают на песчаной бане в течение 10 мин при температуре 125-130°С. После охлаж­дения смесь экстрагируют в делительной воронке диэтиловым эфиром. Эфир осторожно выпаривают. Остаток растворяют в 0,5 мл ацетона и добавляют 2 мл 10% спиртового раствора гидроксида калия - появляется красно-фиолетовая или розовая окраска. Предел обнаружения - 4 мг ГХЦГ в 100 г объекта. При дехлорировании ГХЦГ образуется бензол или хлорбензол, которые при взаимодействии с серной кислотой и нитратом натрия превращаются в п-нитро-или м-динитропроизводные. Нитропроизводные с ацетоном и гидроксидом калия обра­зуют окрашенные соединения.

Реакция с янтарной кислотой и сульфатом железа(III). К части сухого остатка из чашки добавляют несколько кристалликов янтарной или фталевой кислоты. Отверстие пробирки закрывают фильтровальной бумагой, смоченной 0,1% раствором сульфата железа(Ш). Пробирку погружают в глицериновую баню, нагретую до 200°С, и темпе­ратуру бани постепенно повышают до 230°С. При наличии ГХЦГ в пробе на бумаге появляется синее пятно. Можно предположить, что в результате реакции ГХЦГ с янтарной (фталевой) кис­лотой образуются летучие фенольные соединения, которые дают с сульфатом железа(ПГ) синее окрашивание. Предел обнаружения составляет 30 мг ГХЦГ в пробе.

Для изолирования ГХЦГ из крови в пробирку с притертой пробкой вносят 2 мл цельной крови, 10 мл диэтилового эфира, смесь взбалтывают 15 мин и сливают эфирную вытяжку. Экстрагирование повторяют еще 2 раза с 10 мл эфира. Эфирные вытяжки сли­вают вместе, добавляют к ним 5 г безводного сульфата натрия и взбалтывают в течение 10 мин. Затем эфирную вытяжку отделяют, осторожно упаривают до небольшого остатка (около 1 мл).

Для изолирования ГХЦГ из мочи 20 мл мочи экстрагируют трижды эфиром по 20 мл. Далее экстракты обрабатывают безводным сульфатом натрия и после упаривания оставшую­ся эфирную вытяжку используют для обнаружения и количественного определения ГХЦГ. Обнаружение ГХЦГ в извлечениях из крови и мочи проводят с помощью тонкослой­ной хроматографии и описанных выше реакций.

Обнаружение ГХЦГ методом ТСХ. На линию старта хроматографической пла­стинки со слоем силикагеля наносят несколько капель эфирной вытяжки. Рядом наносят каплю «стандарта». Пятна подсушивают и хроматографируют, используя в качестве под­вижной фазы н-гексан. После окончания хроматографирования пластинку подсушивают и обрабатывают водно-ацетоновым аммиачным раствором нитрата серебра, а затем об­лучают УФ-лучами в течение 15-20 мин. ГХЦГ проявляется в виде серо-черных пятен.