Реакция кольцепреципитации

Этот метод был разработан Асколи (1910) в основном для исследования кожевенного сырья на сибирскую язву. Эта реакция получила и другое название – асколизация кожевенного сырья.

Для ее проведения необходимы следующие компоненты:

1. Экстракт из исследуемого сырья. Исследуемые пробы кожи, нанизанные на проволоку, стерилизуют в автоклаве при 1,5 атм 30 минут. Пробы охлаждают, измельчают, помещают в баночки и заливают карболизированным физиологическим раствором (на 1 г сырья 10 мл экстрагента). Продолжительность экстрагирования от 16-20 ч (холодный способ).

Пробы от свиных шкур и мяса экстрагируют горячим способом в водяной бане в течение 30 минут.

Полученные пробы фильтруют через асбестовую вату. Экстракт из исследуемого сырья должен быть прозрачным.

В экстракте, полученном из кожсырья больных животных, содержится сибиреязвенный антиген.

2. Сибиреязвенную преципитирующую сыворотку получают путем гипериммунизации лошадей на биофабриках.

Для этого лошадям-продуцентам внутривенно вводят многократно (16-17 раз) возбудитель сибирской язвы (антиген) с интервалом в три дня в нарастающих дозах с 5 до 70 мл. Предварительно до гипериммунизации лошадей вакцинируют для создания грунд-иммунитета.

Через 9-10 дн. после последнего введения антигена у лошадей берут кровь в количестве 5-6 литров и из нее получают преципитирующую сыворотку, которая содержит сибиреязвенные антитела. Эту полученную специфическую сыворотку консервируют 0,5%-ным раствором фенола и отстаивают в течение двух месяцев, фильтруют через стерилизующие пластины и расфасовывают в стерильные флаконы.

Для контроля используют следующие компоненты:

1. Специфический сибиреязвенный антиген биофабричного изготовления, который представляет собой обезвреженный экстракт, полученный из возбудителя сибирской язвы.

2. Нормальную сыворотку, полученную от здоровых животных, фабричного изготовления.

Date: 2016-08-29; view: 434; Нарушение авторских прав