Методические рекомендации по самоподготовке

Лейкоциты — ядерные клетки шаровидной формы. В цитоплазме лейкоцитов находятся гранулы. В зависимости от типа гранул, лейкоциты подразделяют на гранулоциты (зернистые) и агранулоциты (незернистые).

· Гранулоциты (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы) содержат специфические (вторичные) и азурофильные (лизосомы) гранулы.

· Агранулоциты (моноциты, лимфоциты) содержат только азурофильные гранулы.

Гранулоциты имеют дольчатое ядро разнообразной формы, отсюда их коллективное название — полиморфноядерные лейкоциты. Лимфоциты и моноциты имеют недольчатое ядро, это — мононуклеарные лейкоциты. Лейкоциты используют кровоток как средство пассивного транспорта. Лейкоциты имеют сократительные белки (актин, миозин) и способны к активному перемещению, что позволяет им выходить из кровеносных сосудов, проникая между эндотелиальными клетками (диапедез) и разрушая секретируемыми ими ферментами базальную мембрану эндотелия. Направленную миграцию лейкоцитов (хемокинез, хемотаксис) контролируют различные вещества (в том числе хемоаттрактанты). Лейкоциты участвуют в защитных реакциях, уничтожая микроорганизмы, захватывая инородные частицы и продукты распада тканей, осуществляя реакции гуморального и клеточного иммунитета.

В 1 л крови взрослого здорового человека содержится 3,8–9,8х10⁹ лейкоцитов. Изменяющаяся потребность в отдельных типах лейкоцитов отражается в увеличении (лейкоцитоз) или уменьшении (лейкопения) количества лейкоцитов в единице объёма циркулирующей крови. Например, при острых бактериальных инфекциях в крови увеличивается число нейтрофилов (нейтрофильный лейкоцитоз). При вирусных и хронических инфекциях происходит увеличение числа лимфоцитов (лимфоцитоз), при паразитарных инфекциях наблюдается эозинофилия.

Определение количества лейкоцитов В пробирку наливают 0,4 мл раствора Тюрка. Капиллярной пипеткой набирают из свежей капли 0,02 мл крови, осторожно выдувают её в пробирку с реактивом и ополаскивают им пипетку. Смесь хорошо перемешивают. Концом круглой стеклянной палочки отбирают каплю разведённой крови и наносят на край шлифованного стекла камеры Горяева. Подсчёт лейкоцитов ведут в 100 больших квадратах, собранных вместе по четыре. При этом используют малое увеличение микроскопа. Полученное значение умножают на 25, при этом получают количество лейкоцитов в 1 мкл периферической крови.

Физиологический лейкоцитоз — состояние, характеризующееся увеличением числа лейкоцитов в единице объёма крови выше нормы (>9х10⁹/л). Среди физиологических лейкоцитозов выделяют функциональные и защитно-приспособительные.

Функциональный лейкоцитоз обусловлен выполнением организмом определённой функции (например, лейкоцитоз во время беременности, увеличение числа лейкоцитов в крови после приёма пищи или после длительной физической работы).

Защитно-приспособительный лейкоцитоз развивается при воспалительных процессах, повреждении клеток и тканей (например, после инфарктов или инсультов, травмы мягких тканей), стресс-реакции.

Патологический лейкоцитоз наблюдается при лейкозах. Эта разновидность лейкоцитоза, развивающаяся за счёт увеличения числа лейкоцитов опухолевой природы, не имеет адаптивного значения для организма. Лейкозные лейкоциты характеризуются нарушением функциональной активности лейкоцитов: снижена их способность синтезировать и высвобождать цитокины и низка их фагоцитарная активность. В связи с этим у пациентов с лейкозами снижена эффективность реакций иммунитета, нередко развиваются аллергические реакции и болезни иммунной аутоагрессии.

Ложный лейкоцитоз (относительный, или перераспределительный лейкоцитоз) наблюдается при перераспределении лейкоцитов в сосудистом русле. Перераспределительный лейкоцитоз носит временный характер и не сопровождается увеличением числа молодых форм лейкоцитов. Перераспределительный лейкоцитоз: характеризуется скоплением большого числа зрелых лейкоцитов в каком-либо регионе организма, отсутствием признаков гиперплазии лейкопоэтической ткани, сохранением общего числа лейкоцитов в крови в пределах нормального диапазона.

Может наблюдаться после значительной физической нагрузки («миогенный лейкоцитоз»), при травматическом, гемотрансфузионном, анафилактическом шоке (увеличивается число лейкоцитов в крови микрососудов лёгких, печени, стенок кишечника).

Лейкопения — состояние, характеризующиеся уменьшением количества лейкоцитов в единице объёма крови ниже нормы (<4х10⁹/л). Различают первичные (врождённые или наследственные) и вторичные (приобретённые, вследствие радиационного поражения, отравлений, применений ЛС) лейкопении.Значение лейкопении. При выраженной лейкопении происходит снижение сопротивляемости организма (противоинфекционной, а также противоопухолевой). Это обусловлено тем, что лейкоциты участвуют в реализации гуморального и клеточного звеньев иммунитета, а также фагоцитарной реакции. При лейкопениях часто наблюдается бактериальное и вирусное инфицирование организма с развитием ринитов, бронхитов, плевритов, воспаления лёгких, конъюнктивитов и других форм инфекционной патологии.

Лейкоцитарная формула — процентное содержание в периферической крови отдельных форм лейкоцитов. Подсчёт лейкоцитарной формулы крайне важен для клинической практики, поскольку именно лейкоциты раньше и быстрее других элементов крови реагируют на внешние и внутренние изменения (в частности на воспаление).

· Увеличение сверх нормы числа отдельных видов лейкоцитов обозначают терминами нейтрофилия (нейтрофилёз), базофилия, эозинофилия (эозинофилёз), лимфоцитоз, моноцитоз.

· Уменьшение ниже нормального диапазона отдельных разновидностей лейкоцитов обозначают как нейтропения, эозинопения, лимфопения (лимфоцитопения), моноцитопения.

Агранулоцитоз — отсутствие или значительное снижение абсолютного числа всех видов зернистых лейкоцитов: гранулоцитов (нейтрофилов, эозинофилов и базофилов). Это состояние сочетается, как правило, с лейкопенией.

Определение лейкоцитарной формулы Приготовление мазка крови. К выступившей капле крови (при заборе периферической крови) прикасаются частью предметного стекла, близкой к одному из его концов. Шлифованное стекло подводят к капле под углом 45° и дают ей растечься по её шлифованной поверхности, после чего быстро и без сильного нажима, чтобы не повредить клеточные элементы, шлифованное стекло проводят по длине предметного стекла. Капля крови при движении должна находиться позади шлифованного стекла. Быстро, чтобы не изменилась морфология клеток, мазок высушивают на воздухе (до исчезновения влажного блеска). В середине мазка пишется фамилия больного. Хорошо сделанный мазок должен быть желтоватым и просвечивать.

· Фиксация мазка. Фиксация необходима для прикрепления крови к стеклу и придания стойкости форменным элементам крови по отношению к воде, содержащейся в красителе. Мазок крови фиксируют опусканием его пинцетом в метиловый спирт на 5 мин. Затем мазок вынимают пинцетом и высушивают на воздухе.

· Окрашивание мазка. Мазок крови заливают разведённым красителем Романовского–Гимзы (метиловый азур и жёлтый эозин) и выдерживают 30 мин. Далее краситель смывают сильной струёй воды и ставят вертикально для просушивания.

· Подсчёт лейкоцитарной формулы. Мазок исследуют с иммерсионной системой. Подсчёт ведут в четырёх углах по краям мазка, считая в каждом углу по 50 лейкоцитов. Мазок передвигают, поле за полем, по ломанной прямоугольной линии. После завершения подсчёта вычисляют процентное содержание отдельных видов лейкоцитов.

Относительные и абсолютные изменения в лейкоцитарной формуле. При изменениях относительного (процентного) содержания того или иного вида лейкоцитов в лейкоцитарной формуле говорят либо об относительной нейтропении, эозинопении, лимфопении, моноцитопении (при уменьшении процентного содержания лейкоцитов соответствующего вида), либо об относительной нейтрофилии, эозонофилии, относительном моноцитозе, лимфоцитозе (при увеличении их относительного содержания).

Изменения абсолютного содержания лейкоцитов в единице объёма крови обозначают как абсолютная нейтропения, эозинопения, лимфопения, моноцитопения (при уменьшении их абсолютного числа в единице объёма крови) или абсолютная нейтрофилия, эозинофилия, абсолютный моноцитоз или лимфоцитоз (в случае увеличения количества соответствующих разновидностей лейкоцитов).

При характеристике изменений состава лейкоцитов необходимо оценивать как относительное, так и (обязательно!) абсолютное их содержание. Это определяется тем, что именно абсолютные величины отражают истинное содержание тех или иных видов лейкоцитов в крови, а относительные характеризуют только соотношение различных клеток между собой в единице объёма крови.

· Во многих случаях направленность относительных и абсолютных изменений совпадает. Часто встречается, например, относительная и абсолютная нейтрофилия или нейтропения.

· Отклонение относительного (процентного) содержания клеток в единице объёма крови не всегда отражает изменение их истинного, абсолютного количества. Так, относительная нейтрофилия может сочетаться с абсолютной нейтропенией (подобная ситуация возникает, если относительная нейтрофилия наблюдается в условиях значительной лейкопении: например, содержание нейтрофилов равно 80%, а общее число лейкоцитов составляет лишь 1,0х10⁹/л).

· Для определения абсолютного количества того или иного вида лейкоцитов в крови необходимо рассчитать эту величину исходя из знания общего числа лейкоцитов и процентного содержания соответствующих клеток (в приведённом примере 80% от 1,0х10⁹/л составит 0,8х10⁹/л. Это более чем в два раза меньше 2,0х10⁹/л — нижней границы нормального абсолютного содержания нейтрофилов).

Возрастные изменения клеток крови Количество лейкоцитов у новорождённых повышено и составляет 10–30х10⁹/л. Число нейтрофилов составляет 60,5%, эозинофилов — 2%, базофилов — 0,2%, моноцитов — 1,8%, лимфоцитов — 24%. В течение первых двух недель количество лейкоцитов снижается до 9–15х10⁹/л, к 4 годам уменьшается до 7–13х10⁹/л, а к 14 годам достигает уровня, характерного для взрослого. Соотношение нейтрофилов и лимфоцитов меняется, что обусловливает возникновение так называемых физиологических перекрестов.

Первый перекрест. У новорождённого соотношение содержания этих клеток такое же, как у взрослого. В последующем содержание нейтрофилов падает, а лимфоцитов возрастает, так что на 3–4 сутки их количество уравнивается. В дальнейшем количество нейтрофилов продолжает снижаться и к 1–2 годам достигает 25%. В этом же возрасте количество лимфоцитов составляет 65%. Второй перекрест. В течение следующих лет число нейтрофилов постепенно повышается, а лимфоцитов — понижается, так что у четырёхлетних детей эти показатели снова уравниваются и составляют по 35% общего количества лейкоцитов. Количество нейтрофилов продолжает повышаться, а лимфоцитов — снижаться, и к 14 годам эти показатели соответствуют таковым у взрослого.