Определение количества лимфоцитов в лимфотоксическом тесте с помощью моноклональных антител

Принцип метода. Для определения субпопуляций Т-лимфоцитов можно использовать методы проточной цитометрии, непрямой иммунофлуоресценции и лимфотоксический тест (ЦТТ). Для выполнения этих методов необходимы мАТ к дифференцировочным антигенам (АГ) Т-лимфоцитов. В случае отсутствия проточного цитометра применение ЦТТ имеет ряд преимуществ перед иммунофлуоресценцией: этот метод более прост. Он основан на способности мышиных мАТ класса IgM и IgG и комплемента оказывать цитотоксическое воздействие на соответствующую субпопуляцию лимфоцитов, что выявляется с помощью красителя. Для идентификации лимфоцитов различных популяций используют мАТ-фиксирующий комплемент. После инкубации лимфоцитов с мАТ необходима дополнительная инкубация клеток с антимышиными кроличьими сыворотками.

Постановка метода:

1. Кровь в объеме 0,5 мл разводят в отношении 1:2 средой 199.

2. Наслаивают на 0,5 мл раствора фиколл-верографина (плотностью 1,077 г/см³) и центрифугируют при 400g 25 мин.

3. Пастеровской пипеткой отбирают лейкоцитарное кольцо и дважды отмывают центрифугированием (200g, 10 мин) в среде 199.

4. Осадок ресуспендируют в среде 199 с 2%-ной эмбриональной телячьей сывороткой в объеме 1 мл.

5. С помощью камеры Горяева определяют число ядросодержащих клеток и доводят их концентрацию до 2·10⁶ клеток/мл средой 199 с 2%-ной эмбриональной телячьей сывороткой.

6. В лунку 96-луночного планшета вносят 20 мкл суспензии лимфоцитов (объем суспензии при указанной концентрации может колебаться от 10 до 40 мкл) и 5 мкл мАТ в рабочем разведении

7. Инкубируют 40 мин при комнатной температуре.

8. Центрифугируют 5 мин при 300g для удаления избытка мАТ и надосадок сливают.

9. В качестве источника комплемента (подбор комплемента см. ниже) к осадку добавляют 25 мкл свежей сыворотки кролика в разведении 1:2, осадок взбалтывают и инкубируют 90 мин при комнатной температуре.

10. В лунку вносят 10 мкл 2%-ного раствора эозина на изотоническом растворе хлорида натрия.

11. Через 5 мин в лунки добавляют 10 мкл 1–2%-ного формальдегида с pH 7,2–7,4, что дает возможность сохранять препарат в течение нескольких дней. ЦТТ можно остановить переносом планшетов с реакцией на лед, но в этом случае результаты реакции учитывают в течение 1–2 ч.

Результаты ЦТТ учитывают в препарате «раздавленная капля» (объектив ×20). Целесообразно просматривать препараты в микроскопе с фазовоконтрастным устройством для более точной идентификации лимфоцитов и моноцитов и возможной примеси нейтрофилов. Считают число «убитых» лимфоцитов на 200 лимфоцитов. Убитые клетки окрашены, существенно увеличены, становятся как бы плоскими, распластанными. Средние арифметические значения содержания (± стандартные отклонения) Т-лимфоцитов, Т-хелперов и Т-супрессоров/киллеров у здоровых добровольцев составляют 74,9 ± 4,8; 42,9 ± 7,3 и 24,8 ± 6,2 соответственно, что совпадает с данными, полученными с помощью метода цитофлуориметрии.

Подбор комплемента — важнейший этап в ЦТТ. В качестве последнего используют свежую сыворотку кроликов массой 1,5–2,0 кг. Комплемент получают смешиванием сывороток от нескольких (6 и более) животных, предварительно проверенных на отсутствие токсичности и достаточную активность в ЦТТ. Сыворотку кроликов получают на холоде с последующим замораживанием при –70 °C. Комплемент при этом может храниться в течение 1–1,5 мес. При замораживании в жидком азоте срок хранения неограничен. Размороженные образцы комплемента должны быть использованы в течение 4 ч. Повторное замораживание не допускается!

Метод оценки функциональной активности лимфоцитов in vitro ─ реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ)

Принцип метода. Существуют вещества растительного и бактериального происхождения, которые оказывают на лимфоциты млекопитающих митогенное действие. Для оценки функционального состояния Т-лимфоцитов используют фитогемагглютинин (ФГА) и конканавалин А (Кон A) — лектины растительного происхождения, а для оценки функционального состояния В-клеток (в присутствии Т-лимфоцитов) — митоген лаконоса (МЛ). Мононуклеары периферической крови инкубируют в присутствии вышеуказанных митогенов в течение 72 ч. Результаты реакции оценивают по включению Н³-меченого тимидина.

Постановка метода реакции бласттрансформации с клетками селезенки мышей не имеет принципиальных отличий при использовании клеток крови других животных. Селезенки мышей забирают в стерильных условиях и готовят клеточную суспензию: селезенки помещают во флакончики со средой, расстригают ножницами, многократно пропускают через шприц с иглами уменьшающегося диаметра, фильтруют через металлическую сеточку и 3 раза отмывают центрифугированием при 1000 об/мин в течение 10 мин со сменой среды. Осадок клеток селезенки ресуспендируют в полной среде RPMI-164, содержащей 10 % эмбриональной сыворотки телят, 10 мМ Hepes, 4·10^–5 М 2-меркаптоэтанола, 2 мМ L-глутамина, 50 мкг/мл гентамицина, и подсчитывают их общее количество. Полученную клеточную суспензию доводят до концентрации 0,7·10⁶ клеток/мл полной среды и помещают в 96-луночные круглодонные планшеты для культивирования по 100·10³ клеток/лунку в объеме 150 мкл/лунку. Добавляют оптимальные дозы митогенов LPS E. сoli 055:B5, Con A, PWM, определенные в предварительных опытах: 30 мкг/мл, 2 мкг/мл и 1мкг/мл соответственно — в объеме 10 мкл. Для оценки спонтанной пролиферации в лунки добавляют 10 мкл среды RPMI-1640. Все пробы проводятся в триплетах. Инкубацию клеточной культуры проводят при +37 °С в атмосфере, содержащей 5 % СО₂, в течение 72 ч.

Пролиферативную активность клеток оценивают по включению Н³-тимидина в ДНК делящихся клеток. Метку вносят за 16 ч до конца культивирования по 1 мкКи в каждую лунку планшета. Для этого основной раствор Н³-тимидина сначала растворяют в среде RPMI-1640 до концентрации 100 мкКи/мл, а затем по 10 мкл раствора добавляют в каждую лунку планшета. По окончании инкубации клетки собирают на стеклянно-волокнистые фильтры (Flow Lab) с помощью аппарата Harvester (TITERTEK). Фильтры помещают во флаконы для сцинтилляционного счета, и радиоактивность подсчитывают в сцинтилляторе (4 г дифенилоксазола и 0,1 г дифенилоксазолилбензола на 1 л толуола) в жидкостном сцинтилляционном счетчике Delta. Результаты оценивают в имп/мин. на 100·10³ клеток, подсчитывают средние значения по триплету. Оценка результатов проводится как в абсолютных значениях, так и в индексах стимуляции (ИС):

ИС = имп/мин митогениндуцированной пролиферации.

имп/мин спонтанной пролиферации

Результаты экспериментов представляются в виде среднего счета (имп/мин) из трех идентичных культур.

Показания к применению. Проведение РБТЛ целесообразно в случае: первичных иммунодефицитов, связанных с нарушениями клеточного иммунитета; вторичных иммунодефицитов, связанных с нарушениями клеточного иммунитета, которые развиваются вследствие воздействия на организм какого-либо повреждающего фактора (ВИЧ-инфекция, острые и хронические вирусные инфекции, злокачественные заболевания); физиологических иммунодефицитов, например, при старении, когда ослабление иммунитета затрагивает реакции, обусловленные Т-клетками, что служит одной из причин повышения ча­стоты опухолей в старости; аутоиммунных заболеваний.

Необходимое оборудование и реактивы:

1. Ламинарный бокс (рис. 17).

2. 96-луночные круглодонные планшеты.

3. Инкубатор на 37 °C с возможностью поддерживать 5%-ную атмосферу СО₂ (Flow).

4. Автоматические пипетки с переменным объемом («Ленпипет»).

5. Фиколл-пак (Sigma).

6. Среда 199 (Sigma).

7. Среда для культивирования клеток: RPMI-1640 (Sigma).

8. Гентамицин (АО «Белмедпрепараты»).

9. Эмбриональная телячья сыворотка (Flow).

10. Глутамин (Sigma).

11. Жидкостный сцинциляционный счетчик.

12. Фитогемагглютинин (Sigma). Маточный раствор (1 мг/мл в RPMI-1640). Рабочий раствор (5 мкг/мл в ПКС). Готовится в день постановки.

13. Митоген лаконоса (Sigma). Маточный раствор (1 мг/мл в RPMI-1640). Рабочий раствор (0,5 мкг/мл в ПКС). Готовится в день постановки.

14. ³[Н]-тимидин («Изотоп», Санкт-Петербург). Рабочий раствор (1 мкКи/мл). Размораживается один раз перед применением.

15. Сцинциляционная жидкость.

16. Стекловолоконные фильтры Titertek.

17. Полная культуральная среда (ПКС).

Рис. 17. Стерильный ламинарный шкаф

Выполнение метода включает следующие процедуры:

Выделение клеток. Используют мононуклеарные клетки из периферической крови человека или животного. Забор крови производят натощак в стерильную пробирку с гепарином (20 ME на 1 мл крови). От забора крови до начала выделения должно пройти не более 3 ч. Кровь в это время хранится при комнатной температуре в плотно закрытой пробирке. Перед разведением ее следует перемешать. Гепаринизированную кровь разводят в два раза средой 199, затем наслаивают на градиент плотности фиколл-пака (8 мл разведенной крови на 2 мл фиколла в центрифужной пробирке). Пробирки центрифугируют 30–40 мин при 400g. Затем отбирают образовавшееся в интерфазе «кольцо» мононуклеаров. После этого клетки дважды отмывают центрифугированием средой 199. Концентрацию клеток доводят до 2·10⁶ клеток/мл полной культуральной средой. Их жизнеспособность после выделения должна составлять не менее 95 %, что определяют по включению 0,2%-ного трипанового синего.

Постановка реакции. Мононуклеары культивируют в объеме 150 мкл ПКС (полной культуральной среды — питательная среда содержит все необходимые для культивирования компоненты: эмбриональную телячью сыворотку, 2-меркаптоэтанол, гентамицин) в 96-луночных круглодонных планшетах при 37 °C в атмосфере 5%-ного СО₂ в течение 72 ч в присутствии выше указанных митогенов в рабочих концентрациях. В качестве контроля используют клетки, инкубированные только в присутствии среды. За 6 ч до окончания реакции в каждую лунку добавляют Н³-тимидин в концентрации 1 мкКи на лунку. По окончании реакции клеточную взвесь переносят на стекловолоконные фильтры. Высушенные в течение ночи фильтры переносят в сцинциляционные флаконы с 3 мл сцинциляционной жидкости и подсчитывают включения радиоактивной метки: в культуре со средой: спонтанная бластгрансформация, с фитогемагглютинином — ФГА-индуцированная бласттрансформация, с митогеном лаконоса — МЛ-индуцированная бласттрансформация. Результаты выражают в импульсах в минуту (имп/мин) и в виде индекса стимуляции — отношение включения метки в присутствии митогена к включению метки в присутствии только среды.

Чувствительность и специфичность. Следует отметить, что данная методика разработана только для определенных митогенов, которые обладают неспецифическим воздействием на клетки, проводится in vitro, и у исследователя могут возникать вопросы при экстраполяции полученных при помощи данного теста результатов на реальное состояние Т- и В-звеньев иммунитета и иммунитета в целом. Для выявления специфического ответа лимфоцитов на антигены требуется более длительное (до 7 сут.) культивирование клеток. Поэтому сам по себе показатель активности лимфоцитов не должен служить единственным изучаемым критерием при клеточных иммунопатологиях самого различного генеза. Известно, что обусловленная терапией «нормализация митогензависимой активности» не обязательно развивается параллельно с улучшением клинической картины. Снижение пролиферативного ответа на митогены в большинстве случаев является косвенным доказательством наличия клеточного иммунодефицита, но механизмы последнего могут быть различными. Только в комплексе с другими количественными и, особенно, качественными характеристиками иммунной системы метод может дать наиболее полную информацию о состоянии иммунитета, выявлении конкретного иммунологического дефекта и, следовательно, подобрать адекватное лечение и/или способ иммунокоррекции.

Для высокой диагностической эффективности и достаточной иммунокоррекции следует соблюдать ниже приведенные условия и правила.

• Необходимо использовать инактивированную эмбриональную телячью сыворотку (ЭТС).

• Для большей информативности этот анализ нужно проводить лишь в комплексе с другими показателями и оценкой клинической картины в целом, а для исследования функциональной активности лимфоцитов — с синтезом цитокинов, определением активности ЕКК и др.

• Реальную информацию об изменении параметра несут лишь сильные сдвиги показателя (±20–40 % от нормы и более).

• Для диагностической и прогностической оценки иммунитета важнейшее значение имеет индивидуальный показатель нормы у данного больного (особенно с учетом возраста и наличия хронических заболеваний).

• При оценке функциональной активности лимфоцитов, как и при оценке других показателей иммунограммы, следует прежде всего исключить возможность их колебания в связи с приемом пищи, физическими нагрузками, стрессом, временем суток и др.

Определение активности естественных киллерных клеток

Принципметода. Определяется способность естественных киллерных клеток периферической крови убивать клетки-мишени эритромиелоидной линии К-562.

Необходимые реактивы:

1. Мононуклеары крови, выделенные на фиколл-верографине.

2. Культура К-562.

3. Среда RPMI-1640.

4. Эмбриональная телячья сыворотка (ЭТС).

5. Антибиотики.

6. ³Н-уридин.

7. Ламинарный шкаф (см. рис. 17).

8. Световой микроскоп.

9. Набор автоматических пипеток.

10. СО₂-инкубатор.

11. Центрифуга на 3000 об/мин.

12. Стерильные микропланшеты.

13. Жидкостный сцинциляционный счетчик.

Постановка метода:

1. Клетки-мишени [(1–4)·10⁶ кл/мл] метят Н³-уридином (1 мкКи/мл) и инкубируют при 37 °С на водяной бане 1 ч.

2. Меченые клетки трижды отмывают большим объемом
среды 199 с 10%-ной ЭТС.

3. Для предотвращения реутилизации клетками-эффекторами продуктов гидролиза ДНК, включившей радиоактивную метку, клетки-мишени инкубируют 2 ч при 37 °С и вновь отмывают один раз в большом объеме среды 199 с 10%-ной ЭТС.

4. Цитотоксический тест выполняют в круглодонных 96-луночных планшетах. В шесть лунок помещают клетки-мишени в количестве 1·10⁴ в 0,2 мл питательной среды (контрольные культуры). В другие шесть лунок помещают клетки-мишени в количестве 1·10⁴ в объеме 0,1 мл и клетки-эффекторы в количестве 5·10⁵ в 0,1мл. В каждую лунку добавляют панкреатическую РНКазу Serva в конечной концентрации 0,25–10,0 мкг/мл.

5. Культуры инкубируют 14 ч при 37 °C.

6. После инкубации клеточные культуры переносят на фильтры с помощью собирателя клеток — харвестра.

7. Фильтры высушивают и помещают в сцинтилляционную жидкость; проводят учет реакции с помощью P-счетчика. Показатель активности ЕКК выражают в виде индекса цитотоксичности, который определяется по формуле:

ИЦ = среднее значение в опыте (имп/мин).

среднее значение в контроле (имп/мин)

Реакция гиперчувствительности замедленного типа in vivo (ГЗТ)

Клеточные реакции иммунной системы in vivo оцениваются по выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа, отражающей функциональную активность Th1 (хелперов 1-го типа) и макрофагального звена при ответе на Т-зависимый антиген.

Реакция гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) состоит из двух этапов — фазы сенсибилизации и разрешения. По результатам влияния на сенсибилизацию оценивается возможность образования антигенспецифических Т-лимфоцитов, результаты разрешающей фазы оценивают интенсивность воспалительной реакции, связанной с выделением провоспалительных цитокинов.

Животных иммунизируют (сенсибилизируют) 2,5·10⁷ ЭБ/мышь внутрибрюшинно для тестирования интенсивности клеточного ответа — реакции гиперчувствительности замедленного типа. На 4-е сутки после сенсибилизации вводят разрешающую дозу антигена под подошвенный апоневроз правой задней лапы (5·10⁸ ЭБ/мышь в объеме 50 мкл). В контрлатеральную лапу вводят растворитель в том же объеме. Степень выраженности реакции ГЗТ оценивают по величине отека лапы после введения разрешающей дозы ЭБ сенсибилизированным животным (Crowle, 1975).

Учет реакции проводят через 24 ч после введения разрешающей дозы ЭБ по величине местного отека; величину отека оценивают штангенциркулем. Результаты выражают в абсолютных (разности между отеком лапки, в которую были введены ЭБ, и отеком контралатеральной лапки) и относительных единицах (отношение разности между отеком лапки, в которую были введены ЭБ, и отеком контралатеральной лапки к отеку контралатеральной лапки, умноженное на 100 %).

Определение цитокинов

Термином «цитокины» объединяют так называемые ростовые факторы, которые регулируют пролиферацию, дифференцировку и функцию клеток крови, в том числе и клеток иммунной системы.

Цитокины представляют собой новую самостоятельную систему регуляции функций организма, обеспечивающую в первую очередь развитие защитных реакций и поддержание гомеостаза при внедрении патогенов (микроорганизмов) и нарушении целостности тканей, а также при эндогенно возникающих состояниях (опухолевые клетки, клетки, измененные вирусами, старением и т.д.).

Одним из важных показателей функционирования иммунной системы является оценка продукции цитокинов. Оценивается как спонтанная, так и стимулированная митогенами продукция цитокинов in vitro клетками селезенки мышей методом иммуноферментного анализа.

Изучение уровней цитокинов позволяет получить информацию о функциональной активности различных типов иммунокомпетентных клеток; о тяжести воспалительного процесса, его переходе на системный уровень и прогнозе, о соотношении процессов активации Т-хелперов 1-го и 2-го типов, о стадии развития ряда аллергических и аутоиммунных заболеваний. Оценка уровней цитокинов, в частности с использованием иммуноферментных диагностических тест-систем, позволяет по-новому подойти к изучению состояния иммунной системы организма в клинической практике.

Цитокины продуцируются и секретируются клетками иммунной системы, они выполняют функции ее медиаторов, обеспечивающих межклеточную кооперацию, позитивную и негативную иммунорегуляцию.

Цитокины регулируют амплитуду и продолжительность воспалительного и иммунного ответов, поэтому они должны продуцироваться и секретироваться транзиторно (индуцибельно), и иметь короткий полупериод жизни.

Классификация цитокинов в основном проводится по их биологическим свойствам.

• Интерлейкины (ИЛ) — факторы взаимодействия между лейкоцитами (гуморальная связь между лейкоцитами);

• Интерфероны (ИФН) — цитокины с противовирусной активностью (осуществляют естественную защиту организма от вирусов) — ИФН-α, -β, -γ.

• Факторы некроза опухоли (ФНОα) — обладают провоспалительными, гемопоэтическими и иммуностимулирующими свойствами.

• Колониестимулирующие факторы (КСФ) — гемопоэтические цитокины (способствуют продукции форменных элементов крови, лимфоцитов и макрофагов), вызывающие размножение и дифференцировку клеток-предшественников различных ростков гемопоэза на разных этапах их созревания, — Г-КСФ, М-КСФ, ГМ-КСФ.

• Хемокины (ХК) — хемотаксические цитокины (ответственны за хемотаксис) — СС, CXC.

• Ростовые факторы — обладают противовоспалительным действием, способствуют регенерации поврежденных тканей.

Изучение уровня цитокинов (интерлейкинов) в сыворотке периферической крови и биологических жидкостях:

• провоспалительные цитокины — ИЛ-1, ФНОα;

• противовоспалительные цитокины ИЛ-4, ИЛ-10.

Количественное определение цитокинов в культуральном супернатанте клеток селезенки проводится методом иммуноферментного анализа с использованием соответствующих тест-систем на иммуноферментном анализаторе «Мультискан». Расчеты количества цитокинов проводятся путем построения калибровочной кривой с помощью компьютерной программы. Количество цитокинов выражают в пкг/мл. Индекс стимуляции высчитывается как соотношение показателей индуцированной липополисахаридами и спонтанной продукции.

Оценка интерферонового статуса

При возникновении инфекции в организме человека развиваются иммунные реакции со сложными клеточными взаимодействиями. Регуляторами этих взаимодействий являются специальные белки — цитокины. Одним из ключевых цитокинов является интерферон.

Спектр основных биологических эффектов ИФН:

• подавление размножения внутриклеточных инфекционных агентов вирусной и невирусной природы (хламидии, риккетсии, бактерии, простейшие);

• антипролиферативная активность;

• антитуморогенный эффект;

• антитоксическое действие;

• антимутагенный эффект;

• радиопротективный эффект;

• подавление или усиление продукции антител;

• стимуляция макрофагов, усиление фагоцитоза;

• усиление цитотоксического действия сенсибилизированных лимфоцитов на клетки-мишени;

• активация естественных киллерных клеток.

Существует три типа природного интерферона: альфа (ИНФ-α), бета (ИНФ-β), гамма (ИНФ-γ). Это интерфероны 1-го поколения. Диагностическую ценность имеет выявление уровня интерферона в сыворотки крови и определение способности лейкоцитов периферической крови продуцировать различные типы интерферонов в ответ на активирующий сигнал (вирусные частицы или иммуномодуляторы). Такое исследование и получило название «Интерфероновый статус».

Целью определения интерферонового статуса является:

1. Исследовать способность иммунной системы к развитию адекватных иммунологических реакций в ответ на этиологический фактор.

2. Выявить уровень продукции интерферона в настоящий момент (в норме или на фоне заболевания).

3. Подобрать иммуномодулирующий препарат, на который развивается максимальный ответ иммунокомпетентных клеток для применения в терапевтических целях.

Исследование интерферонового статуса включает определение уровня сывороточного интерферона (ИФН), спонтанной продукции ИФН, способности лейкоцитов к стимулированной продукции ИФН-α (под воздействием вируса болезни Ньюкасла), а также способности продуцировать ИФН-γ под воздействием фитогемагглютинина.

Показатель «Циркулирующий интерферон», варьирующий в норме от 2 до 8 ед/мл, характеризует суммарное «фоновое» количество всех типов интерферонов, циркулирующих в крови, смесь интерферонов различных типов. У здоровых взрослых и детей старшего возраста в кровотоке определяется незначительная часть интерферона в результате его разведения и быстрого выведения. Процессы продукции и элиминации интерферона находятся в равновесии, и уровень сывороточного интерферона в кровотоке не выходит за пределы нормы. Уровень (циркулирующего) сывороточного интерферона служит объективным суммарным показателем количества данного белка in situ, повышенный уровень — показатель остроты процесса.

Анализ информативен, когда необходимо оценить общее количество интерферона: подозрение на генерализованный герпес, гепатит, рассеянный склероз (общее снижение), бронхиальная астма, крапивница (корреляция со степенью тяжести) и др.

Определение уровня продукции α- и γ- интерферонов дает важную информацию о потенциальной активности системы интерферона. Взрослые доноры способны к значительной их продукции (до 640 ед/мл для γ-интерферона).

Все интерфероны обладают противовирусным, иммуномодулирующим, противоопухолевым и антипролиферативным эффектами.

ИНФ-α:

• обладает выраженным противовирусным и противоопухолевым действием, в этом есть сходство с ИНФ-β;

• в меньшей степени проявляет иммуномодулирующие свойства.

Основными клетками продуцентами для ИНФ-α являются В-лимфоциты, макрофаги (для ИНФ-β — клетки эпителия, фибробласты).

Титры ИФН-α в пробах цельной крови — показатель функциональной активности В-лимфоцитов и состояния противовирусной защиты организма;

Уровень ИНФ-α в норме варьирует от 128 до 640 ед/мл.

ИНФ-γ:

• обладает выраженным иммуномодулирующим действием;

• вместе с интерлейкином-2 (ИЛ-2) и фактором некроза опухолей (ФНО α) относится к основным провоспалительным цитокинам;

• является индуктором клеточного звена иммунитета.

Противовирусные и противоопухолевые свойства слабее, чем у ИНФ-α и ИНФ-β. Основными клетками-продуцентами являются Т-лимфоциты, натуральные или естественные киллеры (NK-клетки).

Титры ИФН-γ — показатель функциональной активности Т-лимфоцитов и способности к активации иммунной системы (в частности, при вирусных инфекциях).

Уровень ИНФ-γ в норме варьирует от 32 до 256 ед/мл.

Нормализация показателей уровня интерферонов является критерием эффективности терапии, и, как правило, коррелирует с положительной динамикой заболевания.

Показатели ИФН-статуса в целом позволяют судить об иммунореактивности организма:

1. У здоровых лиц наблюдается определенное содержание сывороточного интерферона и значительный «запас» продукции α- и γ-интерферонов.

2. Стрессы и острые вирусные инфекции, аллергические состояния характеризуются повышением уровня сывороточного интерферона и снижением уровня индуцируемой продукции α- и γ-интерферонов.

3. Хронические вирусные инфекции (герпес, гепатит, рассеянный склероз) сопровождаются глубоким подавлением всех показателей интерферонового статуса.

4. Аутоиммунные заболевания (системная красная волчанка, ревматоидный артрит) характеризуются подавлением индуцируемой продукции α-интерферона, наличием спонтанно вырабатываемого ИФН.

5. Острый лимфолейкоз, злокачественные образования, проказа сопровождаются подавлением индуцируемой продукции γ-интерферона.

6. При бронхиальной астме, крапивнице уровень сывороточного интерферона коррелирует с тяжестью заболевания.

Изучение неспецифической резистентности организма

Защиту макроорганизма от возбудителей инфекционных болезней обеспечивает не только иммунная система, но и механизмы неспецифического порядка: непроницаемость слизистых и кожных покровов, фагоцитоз, бактерицидное действие лизоцима, а также гуморальные факторы: комплемент, пропердин и др.

Date: 2016-05-13; view: 1389; Нарушение авторских прав