Получение соматостатина

В Национальном медицинском центре “Хоуп” (Калифорния, США) был синтезирован гормон гипоталамуса – соматостатин. Молекула соматостатина состоит из 14 аминокислотных остатков. Соматостатин подавляет выделение инсу­лина и гормона роста человека. Ученые из “Хоуп” осуществлен химико-ферментатив­ный синтез гена длиной в 42 нуклеотида, способного кодировать соматостатин. Участок ДНК, кодирующий гормон соматостатин, получен путем последовательного соединения тринуклеотидов, отвечающих определенной аминокислоте. Из 52 н. п. синтетического гена 42 пары составляли структурный ген гормона, а остальные слу­жили для присоединения синтетического гена к плазмиде pBR322, а также к сегменту лактозного оперона (lac) из генома Е. coli или к β-галактозидазному гену. Такую синтетическую чужеродную ДНК встраивали непосредственно за бактериальным геномом (или внут­ри его) после расщепления ДНК рестрикционными эндонуклеазами с образованием в результате трансляции гибридного белка.

Основные этапы генно-инженерного синтеза соматостатина по­казаны на (рис.2.) Синтетический ген соматостатина был встроен в плазмиду pBR322 E. coli вблизи конца гена, кодирующего фер­мент β-галактозидазу. Между двумя генами был помещен кодон метионина. После выделения рекомбинантной плазмиды в бакте­риальную клетку кишечная палочка стала синтезировать гибридный белок. Часть его (соматостатин) затем отщепляли от β-галактозидазы BrCN. Такой сложный способ получения гормона был необходим, так как соматостатин, синтезированный в виде свобод­ных молекул, быстро деградирует под действием бактериальных протеаз. Первый синтез соматостатина генно-инженерным спосо­бом был осуществлен в 1977 г. Бойером. Выход гормона составил 10 000 молекул на одну клетку. Из 100 г биомассы Е. coli, выра­щенной в ферментере объемом 8 л, удалось вьщепить 5 мг сомато­статина, т.е. столько, сколько можно его вьщепить из 100 г овечь­их мозгов.

Date: 2016-02-19; view: 763; Нарушение авторских прав