Иммуномодуляторы

Иммуномодуляторы - это природные или синтетические препараты, способные оказывать регулирующее действие на функции иммунной систе­мы; кроме того, их влияние распространяется на другие системы организма: сосудистую, нервную, эндокринную, кроветворную.

Иммуномодуляторы синтезируются клетками организма (цитокины, гормоны, биологически активные пептиды), их также получают путем био­синтеза или химического синтеза и применяют в качестве лечебных и про­филактических средств при различных заболеваниях и трансплантации.

Интерлейкины получают, используя в качестве продуцентов культуры нормальных лимфоцитов или макрофагов, культуры Т-клеточных гибри­дов и рекомбинантные клетки микроорганизмов. Т-клеточные гибридомы -это продукты слияния Т-лимфоцитов, продуцирующих определенный интерлейкин, и опухолевых клеток, способных к неограниченному росту. В ка­честве рекомбинантных продуцентов используют Е. coli, Saccharomyces cerevisiae и другие микроорганизмы, в геном которых методами генетической инженерии введены гены, контролирующие синтез интерлейкина (ИЛ-1, ИЛ-2).

Колониеспшмулирующие факторы (КСФ) - это разновидность цитокинов с преимущественным действием на гемпоэз, служат факторами выжи­ваемости и роста кроветворных предшественников. Рекомбинантные препа­раты КСФ (лейкомакс, молграстим, лейкоген, ленограстим) используют для нормализации подавленного гемопоэза и активации иммунной системы, в частности, на фоне цитотоксической терапии опухолей и индуцированной иммунодепрессии при трансплантации.

Среди цитокинов ранее всего в медицинскую практику вошли препара­ты интерферона, которые используют при вирусных и некоторых злокачественных заболеваниях.

Интерфероны (ИФН) - это группа белков и гликопротеинов, каждый из которых синтезируется определенными клетками организма и выполня­ет специфические функции. Известно около 20 природных ИФН, различаю­щихся по структуре и биологическим свойствам: α-ИФН состоит из 12 под­видов, β-ИФН - из 3-4 подвидов, γ-ИФН - из 2-3 подвидов. Рекомбинантные ИФН также имеют разновидности.

Продуцентом α -ИФН являются лейкоциты периферической крови че­ловека, которые культивируют на специальной среде в присутствии вируса -интерфероногена. Нативный ИФН выделяют из культуральной жидкости осаждением и хроматографией. Метод имеет ограниченное применение из-за необходимости использования большего количества донорской крови.

β-ИФН синтезируется в культуре фибробластов (клеток соединитель­ной ткани человека) в присутствии в качестве интерфероногена двухцепочечной РНК.

γ -ИФИ - в культуре иммунных Т- или В-лимфоцитов, в том и другом случае с низким выходом, поэтому производство с использованием культур клеток человека - процесс дорогостоящий. Экономически оправда­но получение ИФН с использованием рекомбинантных культур микроорга­низмов: Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Saccharomyces cerevisiae. Очистку ИФН проводят методом аффинной хроматографии с использова­нием моноклональных антител.

Технологическая схема получения генно-инженерных интерферонов (как одна из возмож­ных) принципиально сводится к следующему:

1. индукция синтеза и выделение интерфероновой мРНК из клеток,

2. получение кДНК, комплементарной интерфероновой мРНК из

лейкоцитов,

3. встраивание кДНК в плазмиду,

4. введение реконструированной плазмиды в клетки Е. coli,

5. размножение бактерий, содержащих реконструированную плазмиду, в

культуральной среде,

6. сепарирование клеток Е. coli,

7. дезинтеграция и экстракция клеток Е. coli,

8. осаждение (например, полиэтиленамином) с последующим центрифуги-

ованием,

9. высаливание интерферона из супернатанта сульфа­том аммония

10. диализ осадка интерферона,

11. растворение интерферона, пропускание раствора через колонку с имму-

носорбентом (пришитыми моноклональными антителами),

12. элюция интерферона с последующей хроматографией на целлюлозном

катионообменнике.