Выделение и идентификация культуры возбудителя. Культивирование. Возбудитель — факультативный анаэроб, температурный оптимум 37-38°С, рН 7,2-7,6, проявляет потребность при культивировании в NAD

Культивирование. Возбудитель — факультативный анаэроб, температурный оптимум 37-38°С, рН 7,2-7,6, проявляет потребность при культивировании в NAD, сыворотке крови (лучше использовать куриную сыворотку), повышенном содержании СО₂ в атмосфере.

Исследуемый материал высевают на 10%-ный кровяной агар в чаш­ках Петри (кровь овцы, кролика, курицы, крупного рогатого скота) с последующим посевом «культуры-баккормилки» (стафилококк, кишечная палочка). Можно использовать кровяной агар Левинталя, сывороточно-дрожжевой агар. Поскольку материал обычно контаминирован сопутствующей микрофлорой, целесообразно применять селективные пи-тательные среды. Посевы инкубируют при 37-38° С в течение 24-48 часов в эксикаторах в атмосфере 10% СО₂.

На кровяном агаре с «баккормилкой» возбудитель формирует вокруг штриха питающей культуры мельчайшие сателлитные, негемолитические колонии. На «шоколадном агаре», агаре Левинталя и сывороточно-дрож-жевом агаре через 48 часов культивирования возбудитель формирует круг­лые, выпуклые, с гладкой поверхностью, полупрозрачные, сероватые, диа­метром до 1 мм колонии. В жидких питательных средах возбудитель растет со слабым равномерным помутнением питательной среды.

Морфология клеток возбудителя в культуре. В мазках из подозрительных колоний, бульонных культур клетки H.paragailinarum имеют форму коккобактерии, полиморфных палочек, нитей, грамотрицательные, жгутиков нет. При окраске по методу Гинса или другими методами обнаруживается капсула.

Идентификация H.paragailinarum на уровне рода и вида. Для отнесения выделенной культуры к роду Haemophilus используют те же критерии, что и для Н. parasuis. Основную сложность в процессе идентификации представляет дифференциация Н. paragallinarum и Pasteurella avium (прежнее наименование Haemophilus avium). P. avium no морфологическим, тинкториальным, культуральным признакам сходна с Н. paragallinarum и также зависит от V-фактора.

С целью дифференциации двух указанных видов бактерий у выделен­ных культур исследуют зависимость роста от наличия сыворотки крови, образование пигмента, способность синтезировать каталазу, фосфатазу, расщеплять трегалозу, галактозу, мальтозу, маннит, сорбит, сахарозу, па-тогенность для кур (см. табл. 75).

Таблица 75 - Дифференциальные признаки H. paragallinarum и P. avium

d— 21 -79% штаммов положительные.

^1)- слабая реакция.

²⁾-для роста возбудителя необходимо добавлять в среду NAD (10 мкг/мл)

или дрожжевой экстракт (10%).

От других видов пастерелл H.paragallinarum легко отличить по потреб­ности в NAD. Этот признак исследуют посевом культуры на сывороточный или кровяной агар с последующим высевом «баккормилки» или нанесени­ем на поверхность питательной среды бумажного диска, пропитанного NAD (10 мг/мл). Через 24 часа инкубирования сателлитный рост дают только культуры Н. paragallinarum и P. avium, остальные пастереллы и другие родные виды бактерий растут с одинаковой интенсивностью по всей по­верхности питательной среды (NAD-зависимость отсутствует).