Полезное:
Как сделать разговор полезным и приятным
Как сделать объемную звезду своими руками
Как сделать то, что делать не хочется?
Как сделать погремушку
Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами
Как сделать идею коммерческой
Как сделать хорошую растяжку ног?
Как сделать наш разум здоровым?
Как сделать, чтобы люди обманывали меньше
Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили?
Как сделать лучше себе и другим людям
Как сделать свидание интересным?
Категории:
АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника
|
Выделение и идентификация культуры возбудителя. Культивирование.A. pleuropneumoniae — факультативный анаэроб, температурный оптимум 37-38°С, рН 7,2-7,4Культивирование. A. pleuropneumoniae — факультативный анаэроб, температурный оптимум 37-38°С, рН 7,2-7,4. Известны два биовара возбудителя: ДПН-зависимый (1-й биовар) и ДПН-независимый (2-й биовар). Наиболее часто изолируют из материала культуры первого биовара, которые не растут на обычных плотных и жидких питательных средах, даже обогащенных нативной кровью и сывороткой крови. Исследуемый материал засевают дробно на 5%-ный кровяной (кровь барана) или сывороточный питательный агар (МПА, агар Хоттингера, и т.д.) в чашках Петри с размещением дисков, пропитанных ДПН, либо с последующим крестообразным посевом в виде линии по диаметру чашки Петри культуры «бактерии-кормилки» (см. «Гемофилезный полисерозит поросят»). Можно высевать материал на агар Левинталя, «шоколадный» и сывороточно-дрожжевой МПА и МПБ с 5% сыворотки крови крупного рогатого скота и 10% дрожжевого экстракта. Контаминиро-ванный сопутствующей микрофлорой материал целесообразно высевать на селективную среду Chapin с соавт. (1983). Посевы инкубируют при 37-38°С в течение 24-48 часов. На кровяном или сывороточном агаре с использованием в качестве источника ростового фастора дисков с ДПН, «бактерии-кормилки», рост A.pleuropneumoniae 1-го биовара наблюдается в виде сателлит-ных колоний вблизи источника ДПН. В непосредственной близости от ростового фактора изолированные колонии имеют диаметр 0,25-0,35 мм, по мере удаления размер колоний уменьшается до 0,1-0,15 мм вплоть до неразличимых невооруженным глазом. Радиус зоны сателлитного роста обычно не шире 1,5-3 см. Колонии на кровяном агаре окружены четкой зоной Культуры A. pleuropneumoniae 2-го биовара не требуют для своего роста ДПН, поэтому растут на обычном кровяном и сывороточном МПА, МПБ, то есть не дают феномена сателлитного роста. Колонии по своим характеристикам аналогичны колониям культур 1-го биовара, но более крупные, а рост на жидких питательных средах несколько интенсивнее. Морфология клеток возбудителя в культуре. Из агаровых и бульонных культур готовят мазки, окрашенные по Граму, Гинсу (на капсулу), а также обязательно препарат «раздавленная капля» для выявления подвижности. Морфология клеток A.pleuropneumoniae аналогична таковой у бактерий в исследуемом материале, но достаточно часто, наряду с палочковидными клетками (коккобактерии), обнаруживаются короткие нитевидные формы. В отличие от В. bronchiseptica клетки A. pleuropneumoniae подвижностью не обладают. Идентификация A. pleuropneumoniae на уровне рода. Дифференциация представителей родов семейства Pasteurellaceae представляет определенные трудности в случае использования общепринятых фенотипических признаков. К роду Actinobacillus относят культуры грамотрицательных палочковидных бактерий, проявляющих тенденцию к образованию вязких колоний, клетки которых не имеют жгутиков, обладающие способностью к росту на агаре Мак-Конки, ферментирующие с образованием кислоты глюкозу, фруктозу, ксилозу, образующие фосфатазу, дающие варьирующие результаты в тестах на каталазу, оксидазу, Фогес-Проскауэра, отрицательный результат в пробе с метиловым красным, негидролизирующие твин-80, не ферментирующие дульцит, инозит, инулин. При идентификации A.pleuropneumoniae важнейшим признаком является обнаружение NAD-зависимости, поэтому перечисленные признаки более существенны при идентификации культур NAD-независимого биовара. Идентификация A. pleuropneumoniae на видовом уровне. На первом этапе посевом испытуемой культуры на кровяной или сывороточный питательный агар с экзогенным источником NAD («бактерия-кормилка», диски, пропитанные NAD) определяют ее NAD-зависимость. Культуры, показавшие зависимость от ростового фактора, имеющие характерные для A. pleuropneumoniae культуральные, морфологические и тинкториальные признаки, отбирают для дальнейшего изучения. Практически, с учетом происхождения материала, их приходится дифференцировать от единственного NAD-зависимого вида бактерий, который можно выделить при пневмониях свиней — Н. parasuis. Основные отличительные признаки A. pleuropneumoniae 1-го биовара и Н. parasuis следующие: Н. parasuis не синтезирует гемолизины и не ферментирует D-маннит, A. pleuropneumoniae обычно образует β-гемолизины и расщепляет с образованием кислоты D-маннит; Н. parasuis не образует уреазу, A.pleuropneumoniae всегда продуцирует этот фермент; Н. parasuis растет на «шоколадном», сывороточно-дрожжевом агаре, агаре Левинталя более скудно, чем A. pleuropneumoniae, колонии образует более мелкие, клетки преимущественно палочковидные, а не в виде коккобактерий в отличие от A. pleuropneumoniae. В случае выделения культур бактерий, не зависимых от NAD, но сходных с A. pleuropneumoniae (что позволяет предполагать возможную их принадлежность ко второму биовару A. pleuropneumoniae), возникает необходимость дифференциации от более широкого круга бактерий. Сходные признаки с A. pleuropneumoniae, включая гемолитическую и уреазную активность, имеет В. bronchiseptica. Для их дифференциации у культур определяют способность к утилизации цитратов в качестве единственного источника углерода (посев на среду Кристенсен), а также подвижность клеток и ферментацию углеводов. В. bronchiseptica, в отличие от A. pleuropneumoniae, использует цитраты, Имеет жгутики, не ферментирует углеводы, например фруктозу, Серологическая идентификация культур возбудителя. Вид
Таблица 76 - Дифференцирующие признаки некоторых видов актинобацилл
1)— регистрируется не у всех штаммов; 2)— варьирующий признак. Антигенная обособленность сероваров выражена у недиссоциированных культур достаточно четко, хотя имеется тесное антигенное родство у Некоторых сероваров. В РФ диагностические иммунные сыворотки против A. pleuropneumoniae как коммерческие препараты не выпускают. При наличии антисывороток серовариантную идентификацию штаммов A. pleuropneumoniae проводят в РА на стекле, в реакции коагглютинации, непрямой иммунофлуоресценции, РДП. Биопроба. Проводят с целью определения патогенных свойств изолированной культуры бактерий. Наиболее подходящей лабораторной моделью являются морские свинки живой массой 250-300 г. Заражение проводят интрана-зально под легким эфирным наркозом 18-24-часовой агаровой культурой в дозе 0,5-1,0x109 м.к. Вирулентные штаммы возбудителя вызывают гибель животных в течение 1-4 суток после заражения при симптомах поражения легких. На вскрытии у павших животных обнаруживают геморрагическую пневмонию, при достаточно длительном переболевании — фибринозный плеврит. Белые мыши несколько устойчивее к А. pleuropneumoniae.
|