Энтеротоксинами и хозяевами

Поскольку, как отмечалось выше, в большинстве случаев корреляция между энтеротоксигенностыо штаммов эшерихий и их серогрупповой при­надлежностью отсутствует, проводить диагностику заболеваний, вызван­ных ЕТЕС с помощью обнаружения у них О- или К-антигенов, нецелесооб­разно. Для этой цели необходимо выявлять либо адгезины, либо непосред­ственно энтеротоксины.

Определение энтеротоксигенных свойств Е. coli проводят на изолиро­ванных петлях тонкого кишечника кролика или морской свинки. Метод основан на феномене расширения кишечной петли за счет скопления в ее просвете жидкости, что и является показателем токсигенной активности испытуемых штаммов.

При использовании кроликов (классическая модель) отбирают клини­чески здоровых животных массой 2,0-2,5 кг, выдерживают их на голод­ной диете со свободным доступом к воде в течение 36-48 часов, после чего оперируют под эфирным наркозом с фиксацией в спинном положении. Общепринятыми хирургическими методами осуществляется лапаротомия, тонкий кишечник извлекается на стерильную салфетку и орошается физио­логическим раствором через каждые 5-7 минут операции. На кишечник накладывают шелковые лигатуры так, чтобы образовалось 8-12 сегмен­тов по 10 см с промежутками между ними в 3-5 см. В опытные сегменты вводят испытуемый материал в объеме 2 см³ (суспензия испытуемого штам­ма эшерихий в физиологическом растворе концентрацией
1 млрд. микроб­ных клеток в 1 мл. Культуру выращивают на плотных средах в течение 16-24 часов. В контрольные сегменты вводят по 2 см³ стерильного физио­логического раствора. Петли кишечника вправляют в брюшную полость, брюшину с брюшными мышцами зашивают непрерывным швом. Через 16-18 часов кроликов усыпляют. Извлекают кишечник, из каждого опытного сегмента жидкость переносят в мерный цилиндр. Индекс дилатации опре­деляют соотношением объема скопившейся жидкости в сегменте к длине этого сегмента. Энтеротоксигенными считают штаммы, дающие индекс дилатации 1 и более.

При использовании морских свинок тест выполняется аналогичным образом. При этом отбирают животных массой 250-500 г. Лигатуры накладывают на тощую кишку так, чтобы образовались сегменты дли­ной 1,0-1,5 см. Исследуемый материал вводят в объеме 0,1см³. Энтеротоксигенными признают штаммы, дающие индекс дилатации 0,5 и бо­лее.

Для обнаружения ТЛ-энтеротоксина в настоящее время используют тест отека лап белых мышей, кожную пробу на кроликах, реакцию агрегации тромбоцитов, ре­акцию отсутствия прилипания лейкоцитов в вате, реакцию латекс-агглю­тинации, РИД по Манчини и др. ТС-энтеротоксин выявляют в анальной пробе на 15-дневных мышатах-сосунах или в пробе на 15-дневных кури­ных эмбрионах.

Патогенные эшерихии сероваров О157:Н7 и О157:Н-, вызывающие ди­арею животных с признаками геморрагического гастроэнтерита, бактерии, образующие адгезивный антиген F 18 и вызывающие отечную форму колибактериоза по­росят, продуцируют вероцитотоксин.