Практичні роботи

Завдання 1. Визначення наявності речовини у розчині методом осадження; на прикладі осадження білків з розчину сульфосаліциловою кислотою.

Принцип методу. Білки легко осаджуються із водного розчину мінеральними, органічними кислотами та солями важких металів. Денатурація і осадження білка кислотами обумовлюється нейтралізацією поверхневого заряду колоїдних частинок білка, руйнуванням гідратаційної оболонки білкових молекул та утворенням комплексних солей білка з кислотами. Важкі метали утворюють стійкі комплекси з SH-групами білків, що викликає зміни структури та втрату розчинності білка. Особливо чутливою реакцією на наявність білка в розчині є осадження трихлроцтовою та сульфосаліциловою кислотою (чутливість останньої реакції складає 1:50000). Крім того, сульфосаліцилова кислота поряд з високомолекулярними білками, здатна осаджувати низькомолекулярні білки та продукти розпаду білків – поліпептиди і олігопептиди.

Хід роботи. У пробірку наливають 1,0 мл досліджуваного розчину білка та додають 3-5 крапель 20% -го розчину сульфосаліцилової кислоти. Спостерігають за утворенням осаду білка.

Клініко-діагностичне та практичне значення. Реакція з сульфосаліциловою та трихлороцтовою кислотою використовується для якісного та кількісного визначення білка в сечі.

Здатність білка міцно зв’язувати іони важких металів використовується в клінічній практиці. Білок використовують як протиотруту при отруєннях солями ртуті, свинцю, тощо. У разі отруєння солями важких металів хворому дають велику кількість білка (яєчного білка або молока). В шлунку утворюються нерозчинні комплекси металів з білками, внаслідок чого припиняється всмоктування отрут у кров, послаблюється інтоксикація та посилюється їх виведення з організму.

Завдання 2. Визначення наявності речовини у розчині за специфічною кольоровою реакцією; на прикладі біуретової реакції виявлення пептидного зв’язку у розчині білка після його часткового гідролізу (1, 6, 12 годин).

Принцип методу. Біуретова реакція – характерна реакція на сполуки, що містять в своєму складі не менше двох пептидних зв’язків. Такі сполуки в лужному середовищі утворюють з мідним купоросом комплекс, забарвлений в рожево-фіолетовий колір. В утворенні цього комплексу приймають участь пептидні зв’язки в енольній формі.

Біуретова реакція служить доказом наявності пептидних зв’язків в білках та пептидах.

Хід роботи. В пробірку № 1 вносять 1 мл досліджуваного розчину білка, в пробірку № 2 – 1 мл гідролізату білка (1 год.), в пробірку № 3 – 1 мл гідролізату білка (6 год.), в пробірку № 4 – 1 мл гідролізату білка (12 год.). У кожну пробірку додають по 5 крапель 10%-го розчину NaOH та по 5 крапель 1%-го розчину сульфату міді (CuSO₄). Поява фіолетового забарвлення (біуретова реакція) свідчить про наявність у розчині білка чи поліпептидів. Інтенсивність забарвлення змінюється залежно від часу гідролізу.

Зробити висновок за зміною інтенсивності забарвлення.