Антигены-диагностикумы

Исследования сывороток больных животных на наличие антител, а также определение титров антител в специфических сыворотках при их промышленном изготовлении осуществляются с помощью антигенов-диагностикумов.

По происхождению такие антигены подразделяются: бактериальные,

риккетсиальные,

вирусные.

Антигены (от греческого слова anti - против и genos - рождение, происхождение) - высокомолекулярные коллоидные вещества, способные при поступлении в организм вызвать образование антител, специфически реагирующих с антигенами.

Основные признаки антигенов:

Чужеродность (гетерогенность).

Высокомолекулярная природа.

Коллоидное состояние.

Способность вызывать образование антител.

Способнобность воздействовать с антителами.

Специфичность реакции образования антител и

формирование комплекса антиген-антитела.

Молекулярный вес антигенов - не менее 10 000; чем крупнее молекула,. тем выше ее антигенная способность.

В основе любой иммунологической реакции лежит взаимодействие антител с антигеном. Как известно, антитела представляют собою растворимые молекулы белков. Антигены бывают разные, но далеко не все видны невооруженным глазом и большинство также растворимы. Слияние двух растворимых молекул приводит к образованию также растворимого комплекса, следовательно, невидимого глазом.

Для визуализации комплекса антиген-антитело при постановке реакции агглютинации используют физраствор и в результате иммунный комплекс выпадает в осадок. Чтобы преципитат стал видимым реакцию иммунодиффузии ставят на агаре, РСК – с использованием гемолитической системы и т. д.

Все эти методы являются качественными или полукачественными, хотя их считают классическими методами исследования, в ряде случаях используют и по настоящее время.

В зависимости от характера антигена и условий его взаимодействия с антителом наблюдаются различные комплексы антиген-антитела в виде серологических и иммунологических реакций: агглютинации, преципитации, связывания комплимента, нейтрализации, анафилаксии и др.

Антитело, образованное иммунным организмом, реагирует только с тем антигеном, который вызвал возникновение антитела.

При изготовлении бактериальных антигенов используют живые культуры или гомогенные стандартизированные взвеси убитых микробов. Антигены из живых культур применяются редко, что связано с технологическими трудностями и возможностью заражения лабораторного персонала. Диагностикумы из убитых культур являются предпочтительными.

Бактериальная клетка содержит в себе комплекс различных антигенов, как полноценных, так и гаптенов (неполноценных).

У микробов различают видовые, типовые, групповые (видо-, типо-,группоспецифические) антигены, специфичность которых определяется химическими группами молекул клеток.

Различают капсульные, жгутиковые и соматические антигены. Каспсульные антигены содержатся в капсуле капсулообразующих микробов и отличаются от антигенов клетки.

Капсульные антигены являются полисахаридами, так капсула сибиреязвенного микроба содержит протеиноподобное вещество - полипептид. Жгутиковые антигены (Н-антигены) содержатся в жгутиках подвижных бактерий, термолабильны, легко разрушаются при температуре 60-80˚С; являются белками.

Соматические антигены (О-антигены) содержатся в протоплазме бактерий, термостабильны - выдерживают нагревание при температуре 100˚С 1-2 ч, представляют собой полисахаридно-полипептидный комплекс.

Каждый антиген вызывает образование особых антител. Например, Н-антигены не участвуют в формировании иммунитета, а О-антигены обладают хорошо выраженной иммуногенной способностью.

Приготовление диагностикумов связано прежде всего с тщательной подготовкой и селекцией штаммов микроорганизмов, из которых они готовятся. Производственные штаммы должны находиться в S-форме. Это обеспечивает им хорошую агглютинабильность, специфичность и образование устойчивой гомогенной взвеси.

Для получения диагностикумов определенные штаммы микроорганизмов выращивают на агаровых средах. Культуры микробов смывают с поверхности агара; а затем их инактивируют 0, 5%-м раствором формалина (бруцеллезный, туляремийный антиген), 1%-ми растворами борной кислоты (листериозный, сальмонеллезные, коли-антигены), нагреванием (бруцеллезный антиген) и другими методами.

О-диагностикумы готовят обычно из неподвижных вариантов культур, полученных при выращивании на плотных питательных средах и обработанных спиртом или глицерином.

Наиболее трудно приготовить Vi-антиген, так как он обладает малой устойчивостью к различным воздействиям, в том числе и к формалину. Готовится он из поверхностных компонентов микробных клеток, консервируется формалином, но перед формалнизацией его стабилизируют 25%-м раствором хлорида кальция.

Антигены бывают корпускулярными и растворимыми.

Корпускулярные антигены представляют собой взвесь убитых, реже живых микробов в физиологическом растворе с определенной концентрацией консерванта. Во всех случаях антигены подвергают высокой степени очистки. Такие антигены используются для постановки РА, РСК, РДСК.

Корпускулярные риккетсиозные, вирусные антигены-диагностикумы готовят из тканей зараженных животных, желтков зараженных эмбрионов или из культур клеток. Такие материалы предварительно подвергают обработке эфиром и дифференциальному центрифугированию для максимального освобождения от тканевых элементов. Очищенную взвесь риккетсий или вирусов консервируют 0,25—0,5%-м раствором фенола или 0, 2%-м раствором формалина.

Растворимые антигены готовят в виде экстрактов из агаровых культур соответствующих микробов. Они используются для постановки серологического диагноза с применением РСК при сапе, бруцеллезе, инфекционном эпидидимите баранов и других заболеваниях, а также при постановке реакции иммунодиффузии (РИД) на бруцеллез, лейкоз и многие другие инфекции.

При диагностике пуллороза — тифа птиц при постановке кровекапельной реакции агглютинации (ККРА) на стекле используют цветной антиген, представляющий собой гомогенную взвесь микробных клеток S. gallinarum, убитых формалином и окрашенных кристалл-виолетом.

Антиген готовится из пяти штаммов указанного микроба, вирулентных для птиц и находящихся в S-форме.

Из Mycoplasma gallisepticum готовится антиген для диагностики респираторного микоплазмоза птиц. Он представляет собой взвесь микробных клеток, обезвреженных фенолом и окрашенных 0,5%-м спиртовым раствором генцианвиолета.

При некоторых инфекционных заболеваниях (бруцеллез, пуллороз и другие) используются эритроцитарные диагностикумы.

Такие антигены представляют собой 5-10%-ю взвесь эритроцитов барана, сенсибилизированных полисахаридно-полипептидной фракцией соответствующих возбудителей болезни. Они предназначены для прижизненной диагностики указанных и некоторых вирусных инфекций с применением реакции непрямой гемагглютинации (РНГА).

Для получения полисахаридно-полипептидной фракции проводят гидролиз бактерийной массы сальмонелл уксусной кислотой и осаждение её этиловым спиртом.

Кровь для получения эритроцитов берут стерильно из яремной вены животного в сосуд со стерильным раствором Олсевера. Эритроциты несколько раз отмывают стерильным фосфатным буфером, центрифугируют, консервируют формалином и ресуспендируют в фосфатно-буферном растворе. Затем ихсенсибилизируют полисахаридно-полипептидной фракцией сальмонелл. Сенсибилизированные эритроциты разводят фосфатным буфером с формальдегидом до 10%-й концентрации, расфасовывают во флаконы и сдают на контроль. Эритроцитарный антиген контролируют на активность, специфичность, стерильность, концентрацию эритроцитов и pH.

Date: 2015-09-25; view: 5140; Нарушение авторских прав