Принципы микробиологической диагностики инфекционных болезней

Лабораторная диагностика инфекционных болезней человека основана на обнаружении в организме больного микроба, вызвавшего болезнь, микробных антигенов или продуктов жизнедеятельности (токсинов и др.).

Материалом для исследования служат кровь, гной, моча, мокрота, ликвор, кал, рвотные массы, промывные воды и ткань (биопсия от живого организма или аутопсия от трупа). В некоторых случаях на исследование берут объекты окружающей среды: воздух, воду, пищевые продукты, смывы.

При взятии материала для микробиологического исследования необходимо соблюдать следующие правила:

1. Количество материала должно быть достаточным для проведения исследования и при необходимости его повторения.
2. Материал берут по возможности в начальном периоде болезни, именно в этот период возбудители выделяются чаще, их больше, они имеют более типичную локализацию.
3. Материал должен быть взят до начала антимикробной химиотерапии или через определенный промежуток времени после введения антибактериального препарата, необходимый для его выведения из организма.
4. Материал берут непосредственно из очага инфекции или исследуют, соответствующее отделяемое (гной, мочу, желчь и др.) в момент наибольшего содержания в нем возбудителя.
5. Необходимо исключить возможность контаминации материала нормальной флорой больного и микробами окружающей среды.
6. Любой клинический материал рассматриваться как потенциально опасный для человека.

Транспортировку материала в лабораторию следует проводить в максимально короткие сроки, соблюдая температурный режим, чтобы исключить гибель неустойчивых видов микроорганизмов, или помещать его в специальные транспортные среды. К материалу прилагают сопроводительный документ, содержащий основные сведения, необходимые для проведения микробиологического исследования (фамилия, имя и отчество больного, номер истории болезни, клинический диагноз и т. д.).

В процессе транспортировки материал следует оберегать от действия света, тепла, холода, от механических повреждений, чтобы исключить гибель микробов и контаминацию материала посторонней микрофлорой. Лучше всего доставлять материал в специальных металлических контейнерах.

Микробиологическая диагностика включает в себя пять методов:

микроскопический, микробиологический (культуральный), биологический, серологический и аллергический.

¨ Микроскопический метод - приготовление микроскопических препаратов (нативных или окрашенных) из исследуемого материала и их изучение с применением различных видов микроскопической техники (световая, темнопольная, фазово-контрастная, люминесцентная, электронная и др.). В бактериологии этот метод называют бактериоскопическим, в вирусологии - вирусоскопическим.

¨ Микробиологический (кулътуралъный) метод - посев исследуемого материала на питательные среды с целью выделения и идентификации чистой культуры возбудителя. В бактериологии культуральный метод называется - бактериологический в микологии - микологический, в протозоологии – протозоологический.

¨ Биологический метод (экспериментальный, или биопроба) - заражение исследуемым материалом чувствительных лабораторных животных. Его используют для выделения чистой культуры возбудителя, определения типа токсина и активности антимикробных химиотерапевтических препаратов.

¨ Серологический метод - определение специфических антител в сыворотке крови больного. С этой целью используют серологические реакции

¨ Аллергологический метод заключается в выявлении инфекционной аллергии (ГЗТ) на диагностический микробный препарат-аллерген. С этой целью ставят кожные аллергические пробы с соответствующими аллергенами.

Особое значение приобретают методы экспресс-диагностики, которые позволяют поставить микробиологический диагноз в течение короткого промежутка времени (от нескольких минут до нескольких часов) с момента доставки исследуемого материала в лабораторию. К этим методам относятся РИФ, ИФА, РИА, ПЦР, газовая хроматография и др.

В вирусологии методы лабораторной диагностики вирусных инфекций имеют свою специфику, учитывая особенности биологии вирусов. Используют три метода лабораторной диагностики:

вирусоскопический, вирусологический и серологический.

• Вирусоскопический метод заключается в обнаружении вируса в исследуемом материале под микроскопом. Чаще всего используют электронный микроскоп, реже люминесцентный.

• Вирусологический метод заключается в заражении исследуемым материалом лабораторных животных, куриных эмбрионов или культуры клеток, индикации вируса и его последующей идентификации.

Особенностью серологического метода в вирусологии является исследование парных сывороток. Первую сыворотку берут у боль­ного в начале болезни, хранят при температуре 4-8 °С, а вторую сыворотку берут через 10-14 дней. Сыворотки исследуют одномоментно. О болезни свидетельствует сероконверсия, т.е. нарастание титра антител во второй сыворотке по сравнению с первой. Диагностически значимой является сероконверсия в 4 раза и выше.