Лабораторна робота 7

(4 години)

«Імунодіагностика. Підбір імунокоригуючих препаратів»

Мета роботи: вивчити класифікацію, принципи застосування і фармакологічні властивості основних імунотропних препаратів:

· класифікацію імунотропних препаратів;

· основні принципи призначення імунотропних препаратів,

· фармакологічні властивості імунотропних препаратів тимічної групи;

· фармакологічні властивості синтетичних імунотропних препаратів;

· імунотропні властивості препаратів природного походження;

· фармакологічні властивості препаратів інтерферонів;

· фармакологічні властивості препаратів вакцинуючого типу.

План:

1. Поняття про імуномодуляцію, імуномодулятори та їх природу.

2. Класифікація імунотропних засобів.

3. Принципи імунокоригуючої терапії.

3. Вакцини та їх походження. Принципи вакцинації.

4. Імунологічна сутність вакцинації.

5. Сучасні вакцини: переваги і недоліки. Неспецифічна дія вакцин: негативні і позитивні аспекти.

6. Характеристика окремих імунотропних препаратів.

Матеріали та обладнання: зразки імунотропних препаратів (Імунал, настоянка ехінацеї тощо), світловий мікроскоп, камери Горяєва, імерсійне масло, предметні скельця, дефібринована кров людини або лабораторних тварин, розчин фікол-урографіну з питомою густиною р = 1,077 г/мл; розчин Хенкса, розчин 199; стерильні пластикові або скляні пробірки місткістю 1 – 2 см³; фарба Романовского-Гімзе, фарба Мая-Грюнвальда, етиловий спирт, центрифуга, центрифужні пробірки, зрівноважувачі для пробірок, пастерки, гумові груші №1.

Самостійна робота студентів:

1. Самостійно виділити лімфоцити з периферійної крові в градієнті густин фікол-верографіну (центрифугування, 1500 об/хв, 15 – 20 хв) (див. Лаб. робота №3):

1.1. В чисту пробірку №1 наливають 1 мл гепаринізованої крові і додають 3 мл фізіологічного розчину.

1.2. В пробірку №2 наливають 5 мл розчину фікол-верографіну (ρ = 1,077 г/мл). Обережно, по внутрішній стороні пробірки пастеркою з грушею додають 2,5 – 3 мл розведеної крові з пробірки №1.

1.3. Кров центрифугують упродовж 20 хв за кімнатної температури при 1500 об/хв.

1.4. Після центрифугування в пробірці спостерігають чотири фракції (Рис.3.1): І – уламки клітин і еритроцити; ІІ – градієнт густини фікол-верографіну; ІІІ – лімфоцити; ІV – плазма крові.

2. Обережно підвести кінчик пастерки до шару лімфоїдних клітин і за допомогою гумової груші відібрати ці клітини і перенести їх в стерильну пробірку.

3. Клітини відмити в середовищі 199 за допомогою центрифугування (центрифугування 1500 об/хв, 5 – 7 хв).

4. Після центрифугування надосадову рідину злити, до осаду додати 0,5 – 1 мл середовища 199, осад ресуспендувати.

5. У пробірці №2 змішати 4,5 мл (мг) імуномодулятора (Імунал, настойка ехінацеї тощо) та 5 мл середовища 199 – Ім.-система.

6. До 0,1 мл виділених лімфоцитів додати 0,1 мл Ім.-системи. Добре струсити та поставити на 1 год в термостат за 37°С.

7. Проби дістати з термостату та відмити 2 рази фіз. розчином (центрифугуванням 1500 об/хв, 5 – 7 хв).

8. Надосадову рідину злити, до осаду додати 0,1 мл Т-системи, струсити і поставити на 1 год в холодильник за температури 6 – 8°С.

9. Дістати проби з холодильника та за допомогою камери Горяєва нативно під мікроскопом (´40) підрахувати кількість лімфоцитів, що зв’язали 2 і більше еритроцитів.

10. Оформити протокол заняття, зробити висновки.

Контрольні запитання:

1. Дайте визначення поняттю "імунотропні засоби".

2. Наведіть класифікцію імунотропних засобів.

3. Перерахуйте основні принципи призначення імунотропних засобів.

4. Наведіть приклади імунотропних препаратів природного походження.

5. Наведіть приклади імунотропних препаратів синтетичного походження.

6. Наведіть приклади імунотропних препаратів, які діють переважно на рівні факторів природженої резистентності.

7. Наведіть приклади імунотропних препаратів, які діють переважно на клітинну ланку імунітету.

8. Наведіть приклади імунотропних препаратів, які діють переважно на гуморальну ланку імунітету.

9. В чому полягають особливості застосування вакцинних препаратів?

10. Перерахуйте основні переваги та недоліки застосування вакцин.

Література:

1. Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. – М.: Медицина, 2000. – 432 с.

2. Маянский А.Н. Лекции по иммунологии. – Нижний Новгород: изд-во Нижегородской государственной медицинской академии, 2003. – 272 с.

3. Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и алергология. – Одесса: Астропринт, 1999. – 603 с.

4. Дранник Г.Н. Иммунотропные препараты. – К.: Здоров’я, 1994. – 287 с.

5. Медуницин Н.В. Вакцинология. – М.: Триада-Х, 1999. – 327 с.

6. Иммунология: Практикум / Пастер Е.У., Овод В.В., Позур В.К., Вихоть Н.Е. – К.: Выща шк. Изд-во при Киев. ун-те, 1989. – 304 с.