Главная Случайная страница


Полезное:

Как сделать разговор полезным и приятным Как сделать объемную звезду своими руками Как сделать то, что делать не хочется? Как сделать погремушку Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами Как сделать идею коммерческой Как сделать хорошую растяжку ног? Как сделать наш разум здоровым? Как сделать, чтобы люди обманывали меньше Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили? Как сделать лучше себе и другим людям Как сделать свидание интересным?


Категории:

АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника






Гіппократ 4 page





Розрахунок. Наприклад, на титрування 50 мл фільтрату використано 6 мл розчину амонію роданіду. Тоді на титрування фільтрату, який містить всю кількість взятої на аналіз сечі, потрібно було б 12 мл. Оскільки 1 мл амонію роданіду відповідає 1 мл титрованого розчину срібла нітрату, то із 20 мл доданого до сечі розчину срібла тільки 12 мл вступили в реакцію з амонієм роданідом, а інші 8 мл розчину срібла витрачено на зв’язування натрію хлориду. Таким чином, уміст натрію хлориду буде становити:

.

на відміну від сечі коней, сечу собак обробляють дещо по-іншому. Підкислені 20 мл сечі розводять 60 мл дистильованої води і додають 5–8 г вільного від хлору цинкового пилу, 1,5 мл розведеної сірчаної кислоти (1:5), після чого нагрівають протягом 60 хв на водяній бані. Гарячу рідину фільтрують з повторним промиванням киплячою водою і, підкисливши фільтрат соляною кислотою, визначають у сечі вміст натрію хлориду.

 

2.8.2. Визначення хлоридів у сечі
наборами реактивів

принцип методу. В основі методу лежать наступні реакції: хлоридний іон витісняє роданідний аніон ртуті. Роданідні іони, які вивільнюються, утворюють з іонами заліза кольоровий комплекс, що максимально поглинає світло при довжині хвилі 480–510 нм, інтенсивність забарвлення якого прямо пропорційна концентрації хлоридних іонів у пробі.

обладнання. Фотоелектроколориметр (кфк-2, КФК-3) або спектрофотометр; пробірки; піпетки на 0,1 і 5 мл.

Реактиви: 1) реагент № 1 – 1 флакон; 2) реагент № 2 – 50 мл; 3) 0,1 М (100 ммоль/л) розчин NaCl – 1 мл.

Використовують набір фірми “Simko-Ltd” *.

Приготування робочого розчину хлориду-реагенту. Вміст флакону з реагентом № 1 розчиняють при інтенсивному перемішуванні у 80 мл гарячої дистильованої води (70–90 °С). Одержаний розчин охолоджують до кімнатної температури і до нього додають реагент № 2 (50 мл), перемішують. За необхідності – профільтрувати. Після цього довести дис-тильованою водою до кінцевого об’єму 150 мл. Реактив зберігають при кімнатній температурі (18–25 °С) у посуді з темного скла. Реактив повинен бути блідо-жовтого забарвлення, прозорий. За наявності незначного осаду реактив фільтрують. Реактив не придатний для використання, якщо він мутніє або змінюється його забарвлення на червоно-коричневе.

Хід визначення. Визначення хлоридів у сечі проводять за схемою (табл. 3).

 

Таблиця 3 – Схема визначення хлоридів у сечі

Додати, мл Проба Стандарт Контроль
Хлорид-реагент 3,0 3,0 3,0
Сеча 0,02
0,1 М розчин NaCl 0,02
Дистильована вода 0,02
Перемішати і через 5 хв визначити оптичну щільність проб і стандарту проти контролю при довжині хвилі 480–510 нм у кюветі на 1 см.

примітки: 1. Використовують тільки „негемолізовану” сечу.

2. Реакція в діапазоні 80–120 ммоль/л.

3. проби сечі з концентрацією вище 120 ммоль/л розводять дистильованою водою у 2 рази і знову проводять визначення. Результат множать на 2.

4*. приготування реактивів приведено в: Young D.S., Pestaner L.C., Gibberman V. Clinical Chematologi. – 1975. – V. 21. – P. 277.

 

Кількість хлоридів у сечі розраховують за формулою:

Хлориди (ммоль/л)

де Епр – екстинція проби; Ест – екстинція стандарту; 100 – концентрація NaCl у стандартному розчині (ммоль/л).

Діагностичне значення визначення
хлоридів

У нормі, за Френером, за добу виділяється із сечею натрію хлориду: в коней – 25–35 г, собак – 0,25–5 г, в інших домашніх тварин – 0,6–0,9 %. Із організму велика кількість хлоридів виділяється з сечею у вигляді натрію хлориду. Виділена кількість цієї речовини залежить від різних причин:вмісту її в кормах, воді, видільної здатності нирок, різних захворювань, які супроводжуються лихоманкою, розвитком запальних набряків і накопиченням у порожнинах ексудатів. Кількісне визначення хлоридів у сечі має велике значення при отруєннях тварин кухонною сіллю.

 

2.8.3. Визначення кальцію в сечі

принцип методу. Іони кальцію в лужному середовищі реагують з
о-крезолфталеїн комплексоном з утворенням кольорового комплексу. Інтенсивність фіолетового кольору комплексу пропорційна концентрації кальцію в дослідній пробі.

обладнання: фотоелектроколориметр (кфк-2, КФК-3) або спектрофотометр; пробірки; піпетки на 0,1 і 5 мл.

Реактиви: 1) хромоген (о-крезолфталеїн комплексон – 0,12±0,01 ммоль/л; 8-оксіхінолін – 16,0±0,16 ммоль/л; соляна кислота – 60,0±6,00 ммоль/л) – 1 флакон (120,0±4,0) мл; 2) буфер (моноетаноламін – 0,8±0,08 моль/л) – 1 флакон (120,0±4,0) мл; 3) калібрувальний розчин кальцію (2,5 ± 0,05 ммоль/л) – 1 флакон (5,0 ± 0,5) мл.


Використовують набір реактивів ТОВ НВП “Філісіт-Діагностика”.

Хід визначення. Визначення кальцію в сечі проводиться за схемою (табл. 4).

 

Таблиця 4 – Схема визначення кальцію в сечі

Реактиви Дослідна проба Контроль Стандартна проба
Хромоген 2,5 2,5 2,5
Сеча 0,05
Стандартний розчин 0,05
Буфер 2,5 2,5 2,5
Перемішують, витримують 10 хв при кімнатній температурі. Визначають оптичну щільність (не пізніше 30 хв) дослідної і стандартної проб проти контролю при довжині хвилі 550–590 нм у кюветі товщиною робочого шару 0,5 або 1 см.

Примітки: 1. Об’єми досліджуваних зразків та реагентів можна пропорційно змен-шувати або збільшувати.

2. якщо концентрація кальцію у сечі перевищує 4 ммоль/л, її розводять дистильо- ваною водою у співвідношенні 1:1, а отриманий результат множать на 2.

3. Кювети і посуд, що використовується при аналізі, повинен бути чистим, спеціаль-но підготовленим (поміщають на кілька годин у соляну кислоту, після чого ретельно промивають і сушать).

Уміст кальцію в сечі визначають за формулою:

Кальцій (ммоль/л) ,

де Епр – екстинція дослідної проби; Ест – екстинція стандартної проби; 2,5 – коефіцієнт перерахунку в ммоль/л.

для розрахунку концентрації кальцію у добовій сечі отримане вище значення (ммоль/л) множать на об’єм добової сечі, виражений у літрах, і отримують кількість кальцію (ммоль/добу).

Діагностичне значення визначення
кальцію в сечі

збільшується кількість кальцію в сечі при нирковій гіперкальциурії, уролітіазі, спадкових аномаліях нирок, надлишку кальцію та оксалатів у раціоні, гіперкальціємічних остеопатіях, гіперпаратиреоідизмі.

 

2.9. Визначення ферментів у сечі

Ферментурія – підвищена екскреція з сечею ферментів. У кінцевій сечі міститься до 40 різних ферментів. У фізіологічних умовах із плазми в сечу через клубочковий фільтр екскретуються лише ті ферменти, молекулярна маса яких не перевищує 70 кілодальтон (лізоцим, урокіназа, амілаза, ліпаза), а ферменти з вищою молекулярною масою, наприклад аланінамінопептидаза (ААП), ЛДГ, виявляються в сечі тільки за підвищеної проникності базальної мембрани капілярів клубочків. При незміненій канальцевій реабсорбції такі низькомолекулярні ферменти, як лізоцим і урокіназа повністю реабсорбуються, тому їхня екскреція з сечею є одним із критеріїв тубулярних уражень.

Основне джерело ферментів у сечі – клітини канальцевого епітелію, які під час злущення потрапляють у просвіт канальців, де руйнуються і виділяють ферменти, що містяться в них. Частина ферментів реабсорбуєть-ся, частина руйнується, інші екскретуються з сечею. Тому ступінь фермен-турії може бути зумовлена як ураженням клубочкового фільтру (надход-ження ферментів з крові), так і пошкодженням канальцевого епітелію (дистрофія, некробіоз). На активність ферментів впливають також довготривалість зберігання, величина рН сечі, температура та ін. При бактеріурії слід враховувати можливість потрапляння в сечу мікробних ферментів. Фер-ментативна активність клітин епітелію сечових шляхів є незначною.

Констатація певного виду ферментурії є надзвичайно важливим діагностичним тестом для уточнення характеру і місця ураження нирок, визначення прогнозу захворювання. Слід відмітити, що на відміну від ферментів сечі активність ферментів у крові при захворюваннях нирок практично не змінюється і не є інформативним тестом їх ураження.


Ферментурія слабо корелює з протеїнурією, тому порушення процесу гломерулярної фільтрації не є основною причиною гіперфементурії.

Залежно від глибини ураження в сечу виділяються ферменти, що мають різну внутрішньоклітинну локалізацію. При незначному ураженні клітини зростає активність ензимів, пов’язаних із щітковою каймою (нейтральна α-глюкозидаза, гамма-глутамілтранспептидаза, лужна фосфатаза). При значному пошкодженні зростає активність цитоплазматичних (ЛДГ, малатдегідрогеназа) та лізосомальних (N-ацетил-β-D-глюкозамінідаза, арилсульфатаза, β-глюкуронідаза, холінестераза) ферментів. Значне зростання активності мітохондріальних ензимів відповідає некрозу клітин при морфологічному дослідженні ниркової тканини.

Гамма-глутамілтранспептидаза (ГГТП), або гамма-глутамілтранс-фераза (ГГТ) міститься майже у всіх органах, найбільша активність відмічається в тканині нирок, де фермент розташований переважно в клітинах проксимальних звивистих канальців та в нисхідній частині петлі Генле. Незважаючи на високу активність ензиму в нирках, визначення активності ГГТП у сироватці крові проводять переважно для діагностики захворювань печінки та жовчного міхура. Активність ГГТ в сечі корелює з активністю патологічного процесу в нирках, оскільки цей фермент локалізується в щіткоподібній каймі лише в 67 % випадків, а в інших – пов’язаний з мембраною ендоплазматичного ретикулума.

Лужна фосфатаза (ЛФ) широко розповсюджена у тканинах людини і тварини. Фермент розташований на клітинній мембрані, де бере участь у транспорті фосфату в клітину. Розрізняють 5 тканинно-специфічних ізоферментів лужної фосфатази: плацентарний, кістковий, печінковий, кишковий і нирковий. У нирці ЛФ розміщена в кірковому шарі і досить міцно зафіксована на матриксі мембран щіткоподібної кайми нефротелію. Визначення ЛФ у сечі використовують як тест на пошкодження цитомембран, в першу чергу, кіркових структур нирки.

Найчутливішим тестом є визначення в сечі ізоензимів (4-та і 5-та фракції) лактатдегідрогенази (ЛДГ), яка міститься в цитоплазмі клітин. У нирковій тканині активність ЛДГ практично рівномірно розподіляється між кірковим та мозковим шаром нирок. Як правило, активність ЛДГ у сироватці крові при гострих та хронічних захворюваннях нирок не виходить за межі норми, а зростання активності ферменту в сечі констатовано практично при всіх відомих ураженнях нирок: гострий та хроніч-ний гломерулонефрит, гострий та хронічний пієлонефрит, сечокам’яна хвороба, медикаментозне ураження нирок, діабетична нефропатія, рак сечового міхура, карцинома нирки. Встановлено, що визначення ізоензимів ЛДГ і підрахунок клітинних елементів в сечі є важливими маркерами ураження нирок у доповненні до визначення білка в сечі, який є, в основному, показником клубочкових пошкоджень.


 

2.9.1. Визначення активності
гамма-глутамілтранспептидази в сечі

Принцип методу. Гамма-глутамілтранспептидаза (ГГТП) каталізує реакцію переносу L-γ-глутамінового залишку із хромогенного субстрату на гліцилгліцин. При цьому звільняється п-нітроанілін, оптичну густину якого вимірюють фотометрично. Активність ферменту визначають кінетичним або методом постійного часу.

Обладнання: фотоелектроколориметр (кфк-2, КФК-3) або спектрофотометр; водяна баня; пробірки; піпетки на 0,1 і 10 мл.

Реактиви: 1) субстрат L-γ-глутаміл-п-нітроаніліду – 200 мг; 2) буферна суміш (гліцилгліцин – 1,26 г, ТРІС – 1,21 г) – 2,47 г; 3) стандартний розчин
п-нітроаніліну (5 ммоль/л) – 3,0 мл; 4) 10 %-ний розчин оцтової кислоти.

Використовують набір реактивів НВП “Реагент” (м. Дніпропетровськ).

Приготування робочих розчинів.

1. Буферний розчин, рН 8,1. Вміст флакону 2 розчиняють у 70–80 мл дистильованої води у мірній колбі на 100 мл і доливають водою до мітки. Розчин стабільний при зберіганні в холодильнику.

2. Субстратно-буферний розчин. Із флакону 1 відбирають 40 мг субстрату і розчиняють у 18 мл дистильованої води на киплячій водяній бані, додають 17 мл буферного розчину. Розчин стабільний при 15–25 °С протягом 10 годин.

Похибка методу становить ± 7 %.

Хід визначення. У пробірку вносять 0,5 мл субстратно-буферного розчину, нагрітого до температури +37 °С, і додають 0,05 мл сечі. Вміст перемішують і інкубують у водяній бані точно 15 хв. У пробірку додають 3 мл 10 %-ного розчину оцтової кислоти і перемішують. Контрольну пробу готують аналогічно, але сечу додають після інкубації. Вимірюють екстинцію дослідної проби проти контрольної при 400–420 нм у кюветі товщиною робочого шару 1 см.

Активність гамма-глутамілтранспептидази визначають за калібруваль-ним графіком, для побудови якого зі стандартного розчину п-нітро-аніліну (вміст ампули) готують розведення (табл. 5).

Таблиця 5 – Розведення п-нітроаніліну

№ пробірки Стандартний розчин п-нітроаніліну Дистильована вода, мл Активність ферменту
нмоль/с´л мкмоль/г´мл
1. 0,1 0,9   1,98
2. 0,2 0,8   3,96
3. 0,4 0,6   7,92
4. 0,8 0,2   15,84
5. 1,0   19,80

Примітка. 1. За активності проби вище 5000 нмоль/с´л її розводять ізотонічним розчином NaCl. Результат множать на коефіцієнт розведення.

2. Активність гамма-глутамілтранспептидази не змінюється протягом 7-ми днів при зберіганні консервованої сечі при +4°С і протягом 3-х місяців при –20 °С.

3. У випадку використання кювети з робочим об’ємом більше 1 см кількість робочого розчину необхідно пропорційно збільшити.

У пробірки відмірюють по 0,05 мл одержаних розчинів, додають по 3,5 мл 10 %-ного розчину оцтової кислоти, перемішують і колориметрують проти дистильованої води в умовах, аналогічних дослідній пробі. Будують графік залежності щільності розчину від активності ферменту. Лінійність калібрувального графіка зберігається до активності 5000 нмоль/с´л.

 

Діагностичне значення визначення
активності гамма-глутамілтранспептидази

Гамма-глутамілтранспептидаза (ГГТ) каталізує перенесення глутамілового залишку та гамма-глутамілпептиду на акцепторний пептид чи на альфа-амінокислоту. Фермент має найвищу активність у нирках, печінці, особливо в клітинах, які формують ниркові канальці та жовчні протоки, а також у підшлунковій залозі. Зростання активності ГГТ у сироватці крові свідчить про патологічні процеси в гепатобіліарній системі, а підвищення його активності в сечі – про ураження нирок. Активність ГГТ в сечі корів періоду ранньої лактації коливається в межах від 0,12 до 0,9 мккат/л і в середньому становить 0,32±0,14 мккат/л, що майже не відрізняється від показника у сухостійних глибокотільних корів. У хворих на нефротичний синдром корів активність ензиму в сечі збіль-шується у 2,6 рази, а в дійних корів – удвічі порівняно з клінічно здо-ровими, що свідчить про порушення структури проксимальних ниркових канальців. У сечі одноденних телят активність ГГТ становить 0,12±0,02 (0,08–0,20) мккат/л, у подальшому активність її зростає майже вдвічі, що вказує на підвищення інтенсивності всіх обмінних процесів, які перебігають у нирковій тканині саме у цей період. У 30-денних телят активність ензиму в 2 рази менша порівняно з одноденними (0,06±0,01). У телят, хворих на колібактеріоз, активність ГГТ в сечі на перший день хвороби зростає в 2 рази порівняно з клінічно здоровими, що свідчить про розвиток дистрофічних змін не лише в клубочках, а й у канальцях.

2.9.2. Визначення α-амілази
(за методом Каравея)

Принцип методу. Метод ґрунтується на визначенні залишку нерозщепленого α-амілазою крохмалю. Концентрацію крохмалю визначають за кольоровою реакцією з йодом. Активність α-амілази пропорційна до зменшення інтенсивності забарвлення при 640 нм.

Обладнання: фотоелектроколориметр (кфк-2, КФК-3) або спектрофотометр; водяна баня; піпетки.

Реактиви: 1) концентрований субстратно-буферний розчин – 10 мл (0,5 %-ний розчин крохмалю, розчинений в 0,25 М тріс-НCl буфері, рН 7,1); 2) концентрований розчин йоду – 1 мл (0,1 М); 3) концентрований стоп-розчин – 10 мл (4 Н НСl, ч).

Використовують набір реактивів НВФ “Simko-Ltd”, м. Львів*.

Приготування субстратно-буферного розчину. Один об’єм концент-рованого розчину змішують з чотирма об’ємами дистильованої води (наприклад, до 10 мл концентрованого субстратно-буферного розчину додають 40 мл дистильованої води і перемішують).

Приготування робочого розчину йоду. Концентрований розчин стійкий у темному місці. Робочий розчин одержують у день використання розведенням концентрованого розчину у 50 разів (наприклад, 0,1 мл концентрованого розчину + 4,9 мл дистильованої води і перемішують).

Приготування робочого стоп-розчину. Одержують розведенням концентрованого розчину в 40 разів (10 мл концентрованого розчину + 390 мл дистильованої води і перемішують). Розчин стійкий.

Відбір проб. Використовують профільтровану сечу, яку за активності понад 140 мг/(с´л) необхідно розвести ізотонічним розчином натрію хлориду в 2–100 разів. При розрахунку активності амілази враховують коефіцієнт розведення.

Хід визначення. Визначення α-амілази проводять згідно зі схемою (табл. 6).

Вимірюють поглинання дослідної і контрольної проб при 640 нм проти дистильованої води (можна використовувати довжину хвиль 630–690 нм або червоний світлофільтр; кювета з товщиною робочого шару 1 см).

Таблиця 6 – Схема визначення α-амілази

Розчини, мл Дослідна проба Контрольна проба
Субстратно-буферний розчин 0,5 0,5
Витримують на водяній бані при +37 °С протягом 5 хв
Сеча 0,01
Витримують точно 7,5 хв на водяній бані при 37 °С
Стоп-розчин 4,0 4,0
Розчин йоду 0,5 0,5
Сеча 0,01

 

Активність α-амілази розраховують за формулою:

α-амілаза [мг(с/л)]

де Е1 – поглинання контрольної проби; Е2 поглинання дослідної проби; 44,4 – коефіцієнт перерахунку на 1 с інкубації і 1 л сечі.

Перерахунок. 1 мг/(с´л) = 3,6 мг/(год´мл); 1 мг/(год´мл) = 0,278 мг/(с´л).

Примітка. *приготування реактивів приведено у джерелах: Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: Справочное издание / И.П. Кондрахин, Н.В.Курилов,
А.Г. Малахов и др. – М.: Агропромиздат, 1985. – С. 139–140.

Діагностичне значення визначення
альфа-амілази

Альфа-амілаза (α-амілаза) каталізує ендогідроліз 1,4-глюкозидних зв’язків крохмалю, глікогену та інших споріднених з ними полісахаридів до мальтози, декстринів чи інших полімерів. Альфа-амілаза секретується підшлунковою та слинними залозами; невисока її активність спостерігається в печінці та скелетних м’язах. Низька молекулярна маса амілази (≈48000) сприяє фільтрації ферменту через ниркові клубочки і виділенню із сечею. Ензим складається з двох фракцій – панкреатичної та слинної. У сироватці крові вищою є активність слинного ізоферменту, а в сечі – панкреатичного. Підвищення активності амілази в сироват-ці крові та сечі спостерігається при пошкодженні слинних та підшлункової залоз. Значна та швидка гіперамілаземія і гіперамілазурія розвиваються при гострому паротиті та гострому панкреатиті. Меншою мірою зростання активності альфа-амілази реєструється при виразках шлунка, хімостазі, дистрофії печінки, гепатиті, жовчнокам’яній хворобі. При патології нирок активність ферменту може зростати у крові, а в сечі – знижується. Гіперамілаземію зумовлюють ряд лікарських препаратів (кортикостероїди, саліцилати, тетрациклін, фуросемід, гістамін).

2.9.3. Визначення активності
лужної фосфатази в сечі

Принцип визначення. Метод базується на визначенні кількості фенолу, що вивільняється при гідролізі динатрійфосфату. В лужному середовищі в присутності окисника фенол утворює з 4-аміноантипірином комп-лекс червоного кольору, який інтенсивно поглинає світло з довжиною хвилі 510 нм. Визначення проводиться без попереднього видалення білка з проби.

Обладнання: фотоелектроколориметр (кфк-2, КФК-3) або спектрофотометр; водяна баня; пробірки; піпетки на 0,1; 1,0 і 2,0 мл.

Реактиви: 1) буферний розчин – 100 мл; 2) реагент № 1 – 1 флакон; 3) субстрат – 2 флакони; 4) фенол-стандарт (30 ммоль/л) – 1 флакон.

Використовують набір реактивів НВФ “Simko Ltd”, м. Львів.

Приготування буферного розчину. Вміст флакона з концентрованим буферним розчином розводять дистильованою водою при перемішуванні до кінцевого об’єму 260 мл. розчин зберігають у пластиковому посуді в темному місці при + 4 °С.

Приготування субстратно-буферного розчину. Вміст флакону з субст-ратом розчиняють у 120 мл робочого буферного розчину. Зберігати при + 4 °С.

Приготування розчину окисника. Вміст флакону з реагентом № 1 розчинити при нагріванні до 40–50 °С у 640 мл дистильованої води. Зберігати в темному посуді при кімнатній температурі.

Приготування фенол-стандарту (5 ммоль/л). одержують розведенням концентрованого розчину фенолу (30 ммоль/л) у 6 разів: 3 мл вихід-ного розчину + 15 мл дистильованої води. Зберігати при + 4 °С.

Хід визначення. Дослідження проводять на фотоколориметрі або спектрофотометрі (довжина хвилі 510 нм) у кюветі з товщиною оптичного шару 10 мм згідно зі схемою, поданою в табл. 7.

 

Таблиця 7 – Схема проведення визначення лужної фосфатази

Додати, мл Проба Контроль Стандарт
Субстратно-буферний розчин 0,8 0,8 0,8
Преінкубують 5 хв на водяній бані при 37 °С
Сеча 0,05
Перемішують і інкубують рівно 10 хв на водяній бані при 37 °С
Розчин окисника 2,0 2,0 2,0
Сеча 0,05
Фенол-стандарт 0,05
Перемішують і через 5 хв визначають оптичну щільність проби проти контролю

Активність лужної фосфатази визначають за формулою:

Лужна фосфатаза (нмоль/(с×л) =

де Едп – екстинція дослідної проби; Ест – екстинція стандарту; 600 – коефіцієнт переводу часу інкубації в секунди (10 × 60).

Примітка. Якщо активність лужної фосфатази в досліджуваній сечі перевищує 5000 нмоль/(с×л), її розводять ізотонічним розчином у 2–5 разів і повторно проводять визначення. Одержаний результат множать на коефіцієнт розведення.

Діагностичне значення визначення
лужної фосфатази

Лужна фосфатаза (ЛФ) активує розщеплення фосфорно-органічних сполук. Фермент розміщується в клітинах у зв’язаному з плазматичними мембранами стані. ЛФ складається із різних ізоферментів, які локалізуються переважно в епітелії жовчовивідних шляхів, плазматичних мембранах гепатоцитів і нейронів, кістках, кишечнику, плаценті, нирках.

 

3. Особливості одержання
і дослідження сечі в коней

У тварин сечу одержують, масажуючи шкіру промежини. Для коней цей метод неприйнятий, оскільки масаж у переважної більшості випадків викликає закриття сфінктера сечового міхура. Тому для відбору сечі в них застосовують кілька методів, найчастіше – природне її виділення. На жаль, цей метод непридатний для масового відбору сечі при диспансеризації, тому що потребує дуже багато часу (інколи 5–8 годин для відбору 3–4-х проб сечі) і може бути ефективним при взятті сечі лише у хворих коней. Численні спостереження показують, що акт сечовиділення в коней можна викликати штучно. Для цього тварин після прогулянки заводять у конюшню, особливо в холодну пору року або після інтенсивної роботи та тренінгу; можна перетрушувати в деннику солому в присутності коня або завезти свіжу підстилку.

Слід зазначити, що в частини коней, особливо у жеребців і меринів, присутність людини затримує акт сечовиділення. Тому підходити із посудом для відбору сечі необхідно обережно і тільки після початку акту сечовиділення. Спокійним тваринам можна надіти спеціальні сечозбиральні мішки.

Взяття сечі в кобил краще проводити катетером, ефективність катетеризації становить 70–85 %. Найбільш складно брати сечу в коней до дворічного віку. У підсисних лошат (до 6-місячного віку) сечовидільний отвір дуже малий, і сфінктер сечового міхура за найменшого подразнення інтенсивно скорочується, що ускладнює проходження катетера в сечовий міхур і виділення сечі. У більш старшому віці (після 6 місяців) ця процедура небезпечна для фахівців, тому катетеризацію можна провести лише у флегматичних тварин. У жеребців катетеризацію проводити досить складно і здебільшого небезпечно для здоров’я як людини, так і тварини.

Після одержання сечі визначають її фізичні властивості: колір, прозорість, консистенцію, відносну густину та реакцію. За неможливості відразу провести дослідження, сечу зберігають у холодильнику. Заморожування сечі або зберігання її при кімнатній температурі негативно впливає на результати.

Свіжа сеча в коней буває різного забарвлення. У лошат першого місяця життя вона – від лимонно-жовтого до жовтого кольору. У лошат місяч-ного віку колір змінюється від жовтого до жовто-коричневого. Цей процес триває три–чотири місяці. Надалі колір сечі, незалежно від віку, коливається від молочно-жовтого до жовто-коричневого, інколи – до ко-ричневого кольору. Слід зазначити, що через кілька хвилин після взяття сеча починає розділятися на дві фракції (надосадова рідина і осад), кожна з яких має свій колір. Зокрема, верхня частина (супернатант) є завжди темнішою (вона жовто-коричневого або коричневого кольору), а нижня (осад) – від біло-лимонного до світло-коричневого забарвлення. При тривалому зберіганні (на кінець першої доби) сеча змінює забарвлення внаслідок окиснення фенолів і в нижній частині супернатанту набуває темно-коричневого кольору. Верхня частина надосадової рідини завжди світліша. При кімнатній температурі цей процес відбувається протягом кількох годин, але ці зміни не впливають на показники сечі. У неплідних кобил сеча має колір від блідо- до буро-жовтого, а в жеребних колір її залежить від терміну вагітності. У більшості кобил із малим терміном жеребності (1–3 місяці) колір сечі біло-жовтий і лише у третини – від гірчичного до коричневого (зрідка). В останні місяці жеребності сеча значно темніша – від жовто-коричневого до коричневого кольору (Жила І.А., 2004).

На відміну від інших тварин, у здорових дорослих коней сеча непрозора, оскільки в ній міститься багато солей кальцію. У деяких тварин перші порції сечі можуть бути прозорими, але в кінці сечовиділення вона стає зовсім мутною. Через наявність великої кількості слизу, помутніння може бути у вигляді циліндра, але при перемішуванні або стоянні сеча стає рівномірно мутною. При нефротичному синдромі сеча в коней стає більш прозорою або зовсім прозорою завдяки кислій реакції сечі, що сприяє розчиненню солей. У лошат до місячного віку сеча прозора, надалі вона теж мутніє і в шестимісячному віці не відрізняється від сечі дорослих тварин.

Консистенція сечі в дорослих коней – слизова (від домішування муцину, який утворюється в ниркових мисках та сечовому міхурі). Інколи вона драглеподібна і розтягується у вигляді ниток. У лошат першого місяця життя консистенція її водяниста, надалі вона стає густішою, а після однорічного віку – тягучою. Водянистою сеча в коней буває при поліурії та нефротичному синдромі.







Date: 2015-07-01; view: 413; Нарушение авторских прав



mydocx.ru - 2015-2024 year. (0.03 sec.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав - Пожаловаться на публикацию