Полезное:
Как сделать разговор полезным и приятным
Как сделать объемную звезду своими руками
Как сделать то, что делать не хочется?
Как сделать погремушку
Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами
Как сделать идею коммерческой
Как сделать хорошую растяжку ног?
Как сделать наш разум здоровым?
Как сделать, чтобы люди обманывали меньше
Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили?
Как сделать лучше себе и другим людям
Как сделать свидание интересным?
Категории:
АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника
Визначення глюкози у плазмі крові глюкозо-оксидазним методом
|
|
Принцип методу. Глюкоза в присутності глюкозо-оксидази окиснюється киснем повітря до глюконової кислоти та перекису водню. Останній у присутності пероксидази вступає в реакцію з фенолом і 4-амінофеназоном з утворенням хіноніміну червоно-фіолетового кольору, інтенсивність якого визначається фотометрично.
Обладнання та реактиви: фотоелектроколориметр (кфк-2, КФК-3) або спектрофотометр; розчин ферментів (пероксидаза); фосфатний буферний розчин (рН 7,4), антикоагулянт (суха суміш 0,536 г натрію щавлевокислого і 3,4 г натрію хлориду); калібрувальний розчин (вміст глюкози – 10,0 ммоль/л).
Приготування робочого розчину. У колбу ємністю 200 мл перенести вміст флакона з буферним розчином, додати 100–120 мл дистильованої води, розчин ферментів і довести до мітки дистильованою водою.
Приготування розчину антикоагулянту. У колбу ємністю 500 мл внести суміш антикоагулянта і додати 400 мл дистильованої води, перемішати до повного розчинення кристалів солей. За необхідності розчин фільтрують.
Хід визначення. Для отримання плазми 0,1 мл крові змішують з 0,9 мл розчину антикоагулянта і центрифугують 10 хв при 2000 об/хв.
Визначення глюкози проводять на фотоелектроколориметрі (довжина хвилі 500–546 нм) або на спектрофотометрі (500 нм) у кюветі з товщиною оптичного шару 10 або 5 мм згідно схеми, поданої у таблиці 18. Якщо вміст глюкози у плазмі крові більше 27,7 ммоль/л, її
потрібно розвести ізотонічним розчином у 5 разів і повторити визначення.
Таблиця 18 – Схема визначення глюкози у плазмі крові
| Речовина | Калібрувальна проба | Дослідна проба | Контрольна проба |
| Калібрувальний розчин | 0,04 | – | – |
| Плазма крові | – | 0,4 | – |
| 0,85 %-ний розчин NaCl | 0,4 | – | 0,4 |
| Робочий розчин | 4,0 | 4,0 | 4,0 |
| Усе змішати, витримати 20 хв при кімнатній температурі (18–25°С) або 12 хв у термостаті (37°С). Виміряти поглинання дослідної проби (А), калібрувального розчину (В) проти контрольної проби. |
Розрахунок вмісту глюкози у плазмі крові проводять за формулою:
де: С – концентрація глюкози, ммоль/л; 10 – стабільна величина; А – поглинання дослідної проби; В – поглинання калібрувального розчину; К – коефіцієнт розведення плазми крові.
Підвищення вмісту глюкози (табл. 19) у крові – гіперглікемія – виникає після прийому великої кількості цукрів з кормами, при стресових станах, недостатній секреції інсуліну (цукровий діабет), гіперфункції надниркових залоз.
Таблиця 19 – Вміст глюкози у крові тварин
| Вид тварин | мг/100 мл | ммоль/л | Вид тварин | мг/100 мл | ммоль/л |
| Телята до 3-місячного віку Доросла велика рогата худоба Вівці Свині | 40–75 40–60 35–60 45–75 | 2,22–4,16 2,22–3,33 1,94–3,33 2,5–4,16 | Коні Собаки Кролі Кури | 55–95 60–80 75–95 80–140 | 3,05–5,27 3,33–4,44 4,16–5,27 4,44–7,77 |
Зменшення рівня глюкози у крові – гіпоглікемія – спостерігається при кетозі, гепатиті, гепатодистрофії, шлунково-кишкових та респіраторних захворюваннях молодняку, гіпоглікемії поросят, гіперінсулінемії.
Date: 2015-07-01; view: 436; Нарушение авторских прав