Постановка реакции нейтрализации и цветной пробы

РН: основана на нейтрализации инфекционной активности вирусов при связывании со специфическими противовирусными антителами. РН используется для идентификации выделенных вирусов, т.е. для определения видовой и типовой принадлежности вируса.

Постановка: РН воспроизводится в чувствительных к вирусу живых системах.

Из вируссодержащего материала готовят серийные разведения, добавляют к ним специфическую сыворотку в разведении в соответствии с титром, указанным на этикетке ампулы. Смеси вирус-сыворотка инкубируют 30-60 мин. при 37 гр. Для обеспечения связывания АГ с АТ. Затем, смесью заражают культуру ткани, куриные эмбрионы, лабораторных животных. Контролем служит чувствительная система зараженных вирусом без сыворотки.

Учет. Положительный результат: нейтрализация ЦПД (отсутствие дегенеративных изменений) в культуре клеток, патологических изменений в куриных эмбрионах или организме животных. Отрицательный результат: наличие ЦПД, следовательно вирус не был нейтрализован.

Индекс нейтрализации-отношение титра вируса в контроле к титру вируса в опыте. Если ИН менее 10- реакция отрицательна, от 11-49- сомнительная, выше 50- положительная.

Вариант РН- подавление вирусного бляшкообразования под действием вирусспецифической антисыворотки. Постановка. К вируссодержащему материалу добавляют антисыворотку. Инкубация 30-60 мин. Затем смесь наносят на монослой чувствительных культур клеток. Затем покрывают тонким слоем агара. После инкубирования посевов в течение суток на поверхности агара появляются просветленные участки определенной формы (бляшки), представляющие собой участки погибших клеток в сплошном монослое культуры клеток. Титр вируса, установленный этим методом, выражают числом бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1 мл.

Цветная проба- вариант РН. В результате жизнедеятельности клеток в питательной среде накапливаются кислые продукты. В результате цвет входящего в состав среды индикатора (фенолового красного) становится оранжевым. При заражении культуры клеток цитопатогенными вирусами метаболизм клеток подавляется, рН среды и ее цвет не изменяются, она остается красной.

Постановка. В пробирки вносят по 0.25 мл рабочего разведения вируса и соответствующего разведения сыворотки. Смесь выдерживают при комнатной температуре 30-60 мин., добавляют в пробирки по 0.25 мл клеточной суспензии, закрывают пробирки пробками. Термостат 6-8 дней при 37 гр. Учет рН 7.4 и выше- репродукция вируса, 7.2 и ниже- нейтрализация антителами.