Испытание ИП на гистамин

Предварительное испытание

После достижения постоянной величины ответа отрезка кишки на введение стандартного образца в разведении 3, проводят испытание ИП на гистамин. Для этого с интервалом не менее 4 мин однократно, в случайном порядке вводят стандартный образец в разведении 1, разведении 3 и ИП. Циклы «введение–экспозиция–два отмывания» такие же, как и при проведении адаптации органа к субмаксимальной дозе.

В случае если пик, полученный в ответ на введение ИП, по высоте не меньше, чем пик стандартного образца в разведении 1, проводят количественное определение содержания гистамина в ИП (2.1). Если пик, полученный в ответ на введение ИП, меньше пика стандартного образца в разведении 1 или вообще отсутствует, проводят контрольное испытание (2.2).

2.1. Количественное испытание ИП на гистамин

В случайном порядке поочередно вводят стандартный образец в разведении 1, разведении 3 и ИП до получения не менее чем четырех пиков в ответ на введение каждого раствора. Находят среднее значение ответа отрезка кишки на каждый раствор. С помощью регрессионного анализа вычисляют параметры линейной зависимости среднего ответа кишки на стандартный образец от логарифма его концентрации. Затем, подставляя полученные значения этих параметров в уравнение регрессии, вычисляют, какой концентрации гистамина в разведении ИП соответствует средняя высота его пика и, исходя из этого, рассчитывают содержание гистамина в неразведенном ИП (см. подраздел «Статистическая обработка результатов испытания на гистамин» общей фармакопейной статьи «Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний»).

ИП считают прошедшим испытание, если найденное содержание гистамина не превышает максимально допустимое нормативной документацией (коэффициент пересчета с гистамина дигидрохлорида на гистамин-основание равен 0,6038).

2.2. Контрольное испытание

Схема его проведения такая же, как и при количественном определении содержания гистамина в ИП, за исключением того, что вместо ИП используют стандартный образец в разведении 2. Если средняя высота его пика соответствует вводимой концентрации гистамина дигидрохлорида в данном разведении (2,50 × 10–6 г/мл), то результаты опыта следует признать достоверными.

Результаты опыта следует признать недостоверными в каждом из следующих случаев:

1) Средняя высота пика стандартного образца в разведении 2 не соответствует вводимой концентрации гистамина дигидрохлорида в данном разведении (2,50 × 10–6 г/мл).

2) При количественном определении содержания гистамина в ИП отсутствует воспроизводимость ответов отрезка кишки на введение ИП.

3) В процессе эксперимента наблюдается статистически значимое снижение высоты пиков в ответ на серию введений одного и того же раствора (примечание 4). В каждом из этих трех случаев следует провести испытание ИП на вещества депрессорного действия (см. «Испытание на депрессорные вещества»).

Примечания

1. Состав и приготовление гипокальциевого раствора Тироде

Состав:

NaCl (Н125) 80,00 г

NaHCO₃ (Н23) 10,00 г

D-глюкоза (Г48) 11,00 г

KCl (К102) 2,00 г

CaCl2 · 2H2O 1,30 г

MgCl2 · 6H2O (М11) 2,10 г

NaH2PO4 · H2O (Н47) 0,58 г

Воды дистиллированной до 10 л

Приготовление

В мерном цилиндре объемом 1 л растворяют в дистиллированной воде навески NaCl, NaHCO3 и D-глюкозы в любом порядке. Доводят объем раствора водой до 1 л и переливают содержимое цилиндра в 10-литровый стеклянный или полиэтиленовый сосуд с притертой пробкой или завинчивающейся крышкой.

Таким же образом, но по отдельности, каждую из оставшихся навесок растворяют в 1 л воды дистиллированной и по очереди переносят в тот же 10-литровый сосуд, строго придерживаясь следующего порядка:

1) KCl

2) CaCl2· 2H2O

3) MgCl2· 6H2O

4) NaH2PO4· H2O

Затем доливают воду дистиллированную до отметки 10 л и вновь тщательно перемешивают.

Полученный раствор может храниться при температуре от +3 до +5 ºС не более 24 ч. Помутнение недопустимо.

Помутневший раствор следует вылить, тщательно промыть сосуд в проточной воде и прополоскать дистиллированной водой. Поверхностно активные моющие средства применять нельзя.

2. Сосуд, в котором находятся отрезки подвздошной кишки при хранении, плотно не закрывают, а затягивают двойным слоем марли, чтобы обеспечить доступ воздуха. Перед тем как отрезки использовать в опыте, их следует подготовить. Для этого сосуд в течение 10 мин выдерживают при комнатной температуре и в течение 20 мин в термостате (35 ºС). После нагревания из отрезка следует удалить слизь. Это достигается легкими поглаживающими движениями в продольном направлении.

3. Струя вводимого раствора должна быть направлена не прямо на изолированный отрезок кишки, а в сторону стенки ванночки, причем направление струи не должно меняться. Скорость введения должна быть максимально высокой и постоянной.

Регистрацию сокращений проводят непрерывно (скорость ленты – 2 мм/мин). В случае использования механического рычага и кимографа, писчик во время отмывания можно отводить и прекращать запись.

4. Каждую серию, состоящую не менее чем из четырех пиков, полученных в результате введения одного и того же раствора, следует проверять на дрейф с помощью теста Нойманна:

где: x – высота пика на введение одного и того же раствора;

n – число пиков, полученных в результате введения одного и того же раствора.

Значение D должно быть (p <0,05):

при n = 4 – меньше 0,78;

при n = 5 – меньше 0,82;

при n = 6 – меньше 0,89.

29. ИСПЫТАНИЕ НА ДЕПРЕССОРНЫЕ ВЕЩЕСТВА (ОФС 42-0064-07)

Настоящая статья распространяется на определение веществ депрессорного действия in vivo в лекарственных средствах для парентерального применения.