Расчет содержания определяемого компонента

Существуют 3 основных метода расчета концентрации анализируемого компонента по хроматографическим данным.

1. Метод нормирования (метод внутренней нормализации, нормировки).

Применение данного метода основано на предположении, что на хроматограмме зарегистрированы все компоненты, входящие в состав анализируемой смеси, и что доля площади (высоты) каждого пика от суммы площадей (высот) всех пиков соответствует содержанию компонента в массовых процентах. Содержание каждого компонента в процентах может быть вычислено по формулам:

(8)

или

(8а)

где: S_i – площадь (высота) i -го пика;

– сумма площадей (высот) всех пиков на хроматограмме;

S – площадь (высота) основного пика.

Если чувствительность детектора различна по отношению к каждому из компонентов, то вводят поправочные коэффициенты k_i. Выражение (8) приобретает вид:

(9)

Поправочные коэффициенты рассчитывают относительно основного компонента анализируемой смеси или другого стандартного вещества по формуле:

(10)

где: С_i и С ₀ – концентрация i -ого компонента и стандартного вещества соответственно;

S_i и S ₀ – площадь (высота) пика i -ого компонента и стандартного вещества соответственно.

2. Метод внешнего стандарта. Готовят раствор стандартного образца определяемого компонента с концентрацией, близкой к предполагаемой концентрации этого компонента в испытуемой пробе. Последовательно хроматографируют стандартный, испытуемый и снова стандартный растворы (каждый не менее 3-х раз). Находят средние значения площадей пиков на хроматограммах и рассчитывают концентрацию определяемого компонента в испытуемом растворе по уравнению:

(11)

где: S и S ₀– средние значения площадей (высот) пиков на хроматограммах испытуемого и стандартного растворов соответственно;

С и С ₀ – концентрации определяемого и стандартного растворов соответственно.

Для проведения анализа методом внешнего стандарта необходимо предварительно убедиться, что в используемом диапазоне концентраций площадь пика определяемого компонента линейно зависит от его концентрации.

3. Метод внутреннего стандарта. Метод внутреннего стандарта основан на том, что в анализируемую смесь вводят определенное количество стандартного вещества (внутренний стандарт). Это вещество должно быть химически инертным, отсутствовать в анализируемом образце и полностью отделяться от других компонентов смеси. время его удерживания должно быть близким к t _i определяемых компонентов, концентрация должна быть близка к концентрациям определяемых компонентов, пик симметричным.

В испытуемый и стандартный растворы вводят равные количества внутреннего стандарта, хроматографируют и определяют отношения площадей (высот) пиков определяемого компонента к площади (высоте) пика внутреннего стандарта в испытуемом и стандартном растворах.

Концентрацию определяемого компонента (Х) рассчитывают по формуле:

(12)

где: B=S / S ₀– отношение площади (высоты) пика определяемого компонента к площади (высоте) пика внутреннего стандарта в испытуемом растворе;

B ₀ =S / S ₀ – отношение площади (высоты) пика определяемого компонента к площади (высоте) пика внутреннего стандарта в стандартном растворе;

С ₀ – концентрация стандартного раствора.

20. НИТРИТОМЕТРИЯ (ОФС 42-0054-07)

Нитритометрия – метод титриметрического анализа, при котором в качестве реактива для титрования используется раствор натрия нитрита (Н74).

Применяется для количественного определения соединений, содержащих первичную или вторичную ароматическую аминогруппу, для определения гидразидов, а также ароматических нитросоединений после предварительного восстановления нитрогруппы до аминогруппы.

Методика. Если не указано иначе, точную навеску образца лекарственного средства, указанную в частной фармакопейной статье, растворяют в смеси
10 мл воды и 10 мл хлористоводородной кислоты разведенной 8,3 % (Х24). Прибавляют воду до общего объема 80 мл, 1 г калия бромида (К16) и при постоянном перемешивании титруют 0,1 М раствором натрия нитрита (Тит51). В начале титрования прибавляют раствор натрия нитрита со скоростью 2 мл/мин, а в конце (за 0,5 мл до эквивалентного количества) – 0,05 мл/мин.

Титрование проводят при температуре раствора 15-20 ºС, однако в некоторых случаях требуется охлаждение до 0-5 ºС.

Точку эквивалентности определяют электрометрическими методами (потенциометрическое титрование, амперометрическое титрование) или с помощью внутренних индикаторов.

При потенциометрическом титровании в качестве индикаторного применяют платиновый электрод, при этом в качестве электродов сравнения используют хлорсеребряный или насыщенный каломельный электрод.

На электроды накладывают разность потенциалов 0,3-0,4 В, если не указано иначе в частной фармакопейной статье.

В качестве внутренних индикаторов используют тропеолин 00 (Т116)
(4 капли раствора), тропеолин 00 в смеси с метиленовым синим (М87) (4 капли раствора тропеолина 00 и 2 капли раствора метиленового синего), нейтральный красный (Н151) (2 капли в начале и 2 капли в конце титрования).

Титрование с тропеолином 00 проводят до перехода окраски от красной к желтой, со смесью тропеолина 00 с метиленовым синим – от красно-фиолетовой к голубой, с нейтральным красным – от красно-фиолетовой к синей. Выдержку в конце титрования с нейтральным красным увеличивают до 2 мин.

Параллельно проводят контрольный опыт.