![]() Полезное:
Как сделать разговор полезным и приятным
Как сделать объемную звезду своими руками
Как сделать то, что делать не хочется?
Как сделать погремушку
Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами
Как сделать идею коммерческой
Как сделать хорошую растяжку ног?
Как сделать наш разум здоровым?
Как сделать, чтобы люди обманывали меньше
Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили?
Как сделать лучше себе и другим людям
Как сделать свидание интересным?
![]() Категории:
АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника
![]() |
Разработка новых методов получения поликетидных антибиотиков
Термин «поликетидные» относится к классу антибиотиков, которые образуются в результате последовательной ферментативной конденсации карбоновых кислот типа ацетата, пропионата и бутирата. Некоторые поликетидные антибиотики синтезируются растениями и грибами, но большая их часть образуется актиномицетами в виде вторичных метаболитов. Прежде чем проводить манипуляции с генами, кодирующими ферменты биосинтеза полике-тидных антибиотиков, необходимо выяснить механизм действия этих ферментов. Поликетидные антибиотики синтезируются по тому же пути, что и длинноцепочечные жирные кислоты. В результате каждого цикла конденсации к растущей углеродной цепи добавляется β-кетогруппа. Процесс состоит из ряда повторяющихся стадий, включающих восстановление кетогруппы, дегидратацию и восстановление β-еноильных групп в растущей поликетидной цепи. В зависимости от строения существуют два класса поликетидсинтетаз — ферментных комплексов, ответственных за синтез поликетидных антибиотиков (рис.8). Синтетазы первого класса представляют собой один полипептид с одним активным центром, который последовательно катализирует биосинтетические реакции (рис. 8, А ). Второй класс включает синтетазы, образованные несколькими полипептидами (А- Е на рис. 8, Б ); каждый из них имеет свой активный центр и обладает специфической ферментативной активностью, катализирующей определенную реакцию биосинтеза. Если каждый домен многофункциональной поликетидсинтазы, обладающий ферментативной активностью, катализирует определенную реакцию, то утрата любой из активностей затронет только одну реакцию биосинтеза, а изменение домена с известной функцией приведет к предсказуемым изменениям структуры синтезируемого антибиотика. Так, детально изучив генетические и биохимические составляющие биосинтеза эритромицина в клетках Saccharopolyspom erythraea, удалось внести специфические изменения в гены, ассоциированные с биосинтезом этого антибиотика, и синтезировать производные эритромицина с другими свойствами. Для этого вначале была определена первичная структура фрагмента ДНК S. erythraea длиной 56 т. п. н., содержащего кластер генов ery, затем двумя разными способами проведена модификация эритромицинполи-кетидсинтетазы. Для этого; 1) вносили изменение в участок ДНК, кодирующий еноилредуктазу, либо 2) удаляли участок ДНК, кодирующий β-кеторедуктазу. Делеция (удаление) β-кеторедуктазного гена приводила к накоплению промежуточного продукта, у которого к С-5-атому кольца была присоединена карбонильная группа, а не гидроксильная (рис.9Б), а мутация в гене еноил-редуктазы - к образованию двойной связи между атомами С-6 и С-7 (рис. 9А). Из этих экспериментов следует, что если идентифицировать и охарактеризовать кластер генов, кодирующих ферменты биосинтеза определенного поликетидного антибиотика, то, внося в них специфические изменения, можно будет направленно изменять структуру антибиотика. Кроме того, вырезая и соединяя по иному те или иные участки ДНК, можно перемещать домены поликетидсинтазы и получать принципиально - новые поликетидные антибиотики. Date: 2016-02-19; view: 503; Нарушение авторских прав |