Выделение и идентификация М. bovis

Культивирование. Для большинства видов рода, и в том числе для М. bovis, характерны сложные пищевые потребности. Моракселлы растут на средах, обогащен­ных кровью или сывороткой крови, температурный оптимум 33-35° С, рН 7,2-7,6, аэробы. Материал засевают на кровяной или «шоколадный» агар и посевы культивируют в условиях обычной атмосферы в течение 2-3 су­ток. На простом агаре возбудитель не растет.

Через 48-72 часа на кровяном агаре с кровью крупного рогатого скота или лошади образуются округлые, выпуклые или плоские серо-бе­лые колонии диаметром до 1 мм, с зоной бета-гемолиза или без него. Счи­тается, что гемолитичность — признак вирулентности штаммов. На «шо­коладном» агаре зона гемолиза имеет темный цвет. Штаммы, выделен­ные от лошадей, проявляют гемолитические свойства только на «шоко­ладном» агаре. Колонии обычно врастают в агар. Консистенция бакте­риальной массы крошковидная, и взвесь бактерий в физиологическом ра­створе нестабильна. В последующих пассажах колонии имеют мягкую консистенцию, и бактериальная суспензия из них в физиологическом ра­створе не вьгладает в осадок.

Морфология клеток моракселл в культуре. Морфология клеток в культуре и исходном материале однотипная, но на питательных средах часто появляются признаки полиморфизма: клетки варьируют по размеру, форме, могут присутствовать нити. Особенно силь­но полиморфизм проявляется при недостатке кислорода, превышении тем­пературы. Клетки жгутиков не имеют, может быть капсула.

Идентификация М. bovis на уровне рода. Группа сходных с моракселлами грамотрицательных палочковидных бак­терий и кокков весьма обширна. Общим свойством моракселл и ряда сходных бактерий является отсутствие способности расщеплять углеводы с образовани см кислоты. Внутри этой группы неффментирующих углеводы грамотрицатель­ных бактерий моракселлы даффереицируют по признакам, изложенным в табли­це 79.

Идентификация моракселл на уровне подрода и вида. Род Moraxella подразделяется на подроды Moraxella и Branhamella. К первому относятся виды, имеющие палочковидную форму с тенденцией к образованию кокков, ко второму — виды, представленные исключительно кокковыми клетками.

Таблица 79 - Некоторые дифференцирующие признаки моракселл и других неферментирующих углеводы бактерий

Как видно, моракселлы в этой группе представляют единственный род, бактерии которого не растут на простом агаре.

М. bovis внутри подрода Moraxella от других видов дифференцируют по гемолитической, желатиназной, оксидазной, каталазной, фенилаланиндезаминазной, уреазной активности, способности к росту на агаре Мак-Конки.

Для М. bovis характерно нали­чие гемолитической активности, оксидазы, желатиназы (инкубация 7-14 суток), пептонизация лакмусового молока, чувствительность к пеницилли­ну, образование каталазы и редукция нитратов приблизительно у 14% штам­мов, отсутствие образования кислоты из Д-глюкозы, Д-ксилозы, Д-маннита, лактозы, сахарозы, мальтозы, фенилаланиндезаминазы, уреазы на сре­де Кристенсена, утилизации цитрата на среде Симмонса, образования ин­дола. Возбудитель образует H₂S, что выявляется в тесте с бумагой, пропи­танной ацетатом свинца, но отсутствует выделение H₂S при посеве в стол­бик TSI. M. bovis не растет на среде Мак-Конки.

Таким образом, к виду М. bovis относят культуры бактерий, не обра­зующие пигмент, фенилаланиндезаминазу,уреазу, чувствительные к пени­циллину, не растущие на простом МПА, агаре Мак-Копки. Достаточно характерен рост М. bovis в лакмусовом молоке, при этом верхняя щелочная часть среды приобретает синий цвет, казеин пептонизируется. Для биохи­мической идентификации подходит тест-система Enterotest 24 (PLIVA-Lachema) и ее аналоги.

Таблица 80 - Критерии дифференциации моракселл внутри рода Moraxella

(+) — большинство штаммов положительные или отрицательные.

Биопроба. С целью подтверждения патогенных свойств выделенной культуры можно заражать внутрибрюшинно белых мышей. Вирулентные штаммы вызыва­ют летальный исход. Косвенным признаком вирулентности является четко выраженная гемолитическая активность.