Выделяемых от крупного рогатого скота

Таблица 10 - Дифференциация основных видов стрептококков,

Выделяемых от свиней

Таблица 11 - Дифференциация стрептококков, выделяемых

От лошадей

Таблица 12 - Дифференциация энтерококков

При идентификации S. pneumoniae, помимо критериев, изложенных в таблице 8, определяют чувствительность к лизису клеток стрептококка желчью (желчными кислотами) и чувствительность к оптохину.

Для проверки на желчеустойчивость 2-3 мл исследуемой культуры, вы­ращенной на сывороточном бульоне, засевают в 5 мл 10%-ного желчного бульона. Среда становится мутной и ее помещают на час в термостат.

Клетки S. pneumoniae растворяются, среда становится прозрачной, зе­ленящие стрептококки, сходные по типу колоний и гемолиза, не растворя­ются в желчи. При получении нечетких результатов пробирки оставляют при комнатной температуре на 18-20 часов и затем производят оконча­тельный учет. Можно просто положить крупинку сухой желчи на исследуе­мую колонию. Колонии S. pneumoniae растворяются и исчезают. При нали­чии натрия таурохолата смешивают равные объемы 10%-ного раствора соли и бульонной культуры, клетки пневмококков растворяются, и смесь стано­вится прозрачной через 10-15 минут.

Чувствителыюсть S. pneumoniae к оптохину (этилгидрокупреин НС1) используют для дифферегщиации от других зеленящих стрептококков. Для этого применяют коммерческие бумажные диски с оптохипом. Испытуе­мую культуру засевают на кровяной агар, помещают на поверхность среды диски с оптохипом и культивируют 24 часа при 37° С. Как положительный результат расценивают задержку роста от 14 мм и более (при диске 6 мм), что характерно для S. pneumoniae. При отсутствии таких дисков может быть использован следующий метод: исследуемую культуру засевают на глюкозо-кровяной агар с оптохином (1:50 000), инкубируют при 37-38° С в течение 20-24 часов. S. pneumoniae на этой среде не растет.

Для видовой дифференциации энтерококков используют тесты, пред­ставленные в таблице 12, а также тест-систему ЕН-coccus test.

Серологическая идентификация стрептококков и энтерококков. В клеточной стенке многих стрептококков присутствует термостабильный полисахаридный антиген «С». В соответствии с его антигенными вариантами по системе Лансфилд стрептококки в РП подразделяют на серологические группы, которые обозначают заглавными буквами латинского алфавита.

Известно более 20 серологических групп стрептококков. Серологичес­кая принадлежность патогенных для животных стрептококков представлена в таблице 6. Некоторые виды стрептококков (S. pneumoniae и др.) не содер­жат С-полисахарид и не могут быть классифицированы по системе Ланс­филд. Иммунные серогрупповые стрептококковые сыворотки производит и высылает по заявкам ВГНКИ ветпрепаратов. За рубежом для этих целей имеются коммерческие препараты, позволяющие устанавливать серогруп-повую принадлежность в пределах серогрупп А, В, С, D, F и G в тесте латекс-агглютинации или серогрупп А, В, С, F и G в реакции коагглютинации на стекле, ИФА, а также выявлять антигены непосредственно в материале.

Определение серогрупповой принадлежности испьггуемой культуры стреп­тококка в реакции преципитации проводят следующим образом. Стрепто­кокки выращивают в бульоне Хоттингера с 1% глюкозы при 37° С в течение 20 часов. В стеклянные центрифужные пробирки переносят
9 мл выращен­ной культуры, центрифугируют при 4000 об/мин. 25 минут. Над осадочную жидкость удаляют, к осадку добавляют 0,3-0,4 мм 0,2 N НС1, суспендиру­ют и вьщерживают смесь в кипящей водяной бане
10 минут.

Затем пробирки охлаждают водой, добавляют в каждую пробирку кап­лю 0,04%-ного спиртового раствора фенолфталеина и затем по каплям до­бавляют 0,2 N раствор NaOH до приобретения раствором бледно-розовой окраски (кислота нейтрализована). Далее смесь вновь центрифугируют (4000 об/мин., 25 минут), над осадочную жидкость используют как растворимый антиген в РП.

Техника постановки реакции преципитации. Берут от пастеровских пи­петок капилляры диаметром 0,5-1,0 мм, опускают капилляр концом в фла­кон с сывороткой и набирают в него сыворотку на длину капилляра 1-1,5 см. Удаляют избыток сыворотки с кончика капилляра, погружают его в пробирку с антигеном и набирают равное количество антигена. Капилляр переворачивают таким образом, чтобы смесь оказалась в середине капил­ляра, и закрепляют его вертикально в куске пластилина. Через 5 минут учитывают результат. Положительная реакция: образование хлопьев или резкое помутнение в середине столбика.

Биопроба. Используют для определепия патогенных свойств культур стрептококков, а также для их выделения из контаминированного материала.

Определение патогенности стрептококков проводят на трех белых мы­шах массой 14-16 г. Для заражения используют только свежевьщеленные 18-20-часовые культуры стрептококков, выращенные на глюкозо-сывороточном бульоне. Культуру в объеме 0,5 мл вводят внутрибрюшиино. На­блюдение ведут в течение 5 суток, при заражении патогенной культурой мьшш погибают в течение 1-2 суток. Из органов павших животных готовят маз­ки, окрашивают по Граму, на капсулы, микроскопируют. Параллельно про­изводят посевы па глюкозо-кровяной агар и глюкозо-сывороточный бульон.

В соответствии с «Методическими указаниями по лабораторной диаг­ностике стрептококкозов» при диагностике мыта (S. equisubsp. equi) рекомендуется исследуемым материалом (гной, истечение из носовой полости, суспензия из лимфатических узлов и орга­нов) заражать подкожно в область спины двух белых мышей массой 12-15 граммов в дозе 0,1 мл (гной) или 0,5 мл (суспензия тканей). Для выясне­ния патогенных свойств выделенную бульонную культуру вводят анало­гичным способом в объеме 0,1 мл. Наблюдение за животными ведут в тече­ние 10 дней, гибель в положительных случаях наблюдают на 2-7 сутки. Органы и ткани от погибших животных подвергают микроскопическому исследованию и делают высевы на питательные среды. Как положитель­ный результат оценивают гибель хотя бы одной мышки. Для ускоренного выделения
S. pneumoniae из контаминированного материала можно зара­жать двух белых мышей исходным материалом — 0,5 мл взвеси в бульоне. Далее через 6-8 часов из брюшной полости берут стерильным шприцом 1-2 капли жидкости и делают дробный высев на глюкозо-кровяной агар в чашках либо животное убивают в эти же сроки. Посев делают из крови сердца. Из селезенки готовят и микроскопируют мазки-отпечатки.

Идентификация стрептококков и энтерокок­ков на базе планшетных фотометров фирмы «TERMO-Labsystems», «iEMS-Reader» и «Multican-Ascent»

Для идентификации каталазоотрицательных грамположительных кокков фирма «ПЛИВА-Лахема» выпускает две тест-системы: СТРЕПТОтест 16 - для идентификации стрептококков и ЭН-КОККУСтест - для идентификации энтерококков. Для диффе­ренциации этих микроорганизмов используют ПИРАтест - положи­тельный практически у всех клинически значимых энтерококков (из стрептококков этот тест положителен только у S. руоgепеs).