Главная Случайная страница


Полезное:

Как сделать разговор полезным и приятным Как сделать объемную звезду своими руками Как сделать то, что делать не хочется? Как сделать погремушку Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами Как сделать идею коммерческой Как сделать хорошую растяжку ног? Как сделать наш разум здоровым? Как сделать, чтобы люди обманывали меньше Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили? Как сделать лучше себе и другим людям Как сделать свидание интересным?


Категории:

АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника






Лабораторная работа. Определение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ) Оборудование: 1. Штатив с пробирками





Определение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ)

Оборудование: 1. Штатив с пробирками.  
  2. Пипетки на 0,1 мл, 1 мл и 5 мл.  
  3. КФК.  
  4. Кюветы на 5 мм.  
  5. Термостат.  
       
Реактивы: 1. Буферно-субстратная смесь для АлАТ.
  2. Буферно-субстратная смесь для АсАТ.
  3. Раствор динитрофенилгидразина.
  4. 0,4 Н NaOH.
  5. Дистиллированная вода.
  6. Сыворотка крови.

Принцип метода. Метод основан на фотометрическом определении динитрофенилгидразонов пирувата, образующегося в результате ферментативной реакции под действием АлАТ. При действии АсАТ образуется оксалоацетат, переходящий в пируват самопроизвольно. Концентрация динитрофенилгидразонов пирувата служит мерой активности обоих ферментов.

 

Ход работы.

1. Определение активности АсАТ. Пробирку с 0,25 мл буферно-субстратной смеси для АсАТ помещают в термостат при 37ОС на 5 мин. Затем добавляют 0,05 мл сыворотки и оставляют в термостате на 30 мин. Когда время инкубации подходит к концу, начинают готовить контроль, в котором 0,05 мл сыворотки смешивают с 0,25 мл буферно-субстратной смеси. Сразу же в опытную и контрольную пробы добавляют 0,25 мл раствора динитрофенилгидразина и оставляют пробы на 10 мин при комнатной температуре. Затем в каждую пробирку добавляют по 2,5 мл 0,4Н раствора едкого натра и через 10 мин колориметрируют пробы при сине-зеленом светофильтре в кювете толщиной 0,5 см против воды.

2. Определение активности АлАТ. Проводят точно так же, как и определение активности АсАТ, только берут субстратно-буферную смесь для АлАТ.

Расчет активности АсАТ и АлАТ. Разность между оптическими плотностями контрольной и опытной проб указывает изменение оптической плотности в результате прошедшей ферментативной реакции. По этой разности определяют активность АсАТ и АлАТ по калибровочному графику. Активность ферментов выражают в мкмолях пирувата, образовавшегося за час инкубации на 1 мл сыворотки.

Норма активности АлАТ – 0,1-0,7 мкмоль/мл за 1 час, АсАТ – 0,1-0,5 мкмоль/мл за 1 час.

 

Диагностическое значение определения активности аминотрансфераз

Повышение активности аминотрансфераз в сыворотке отмечается при поражении органов и тканей, богатых данными ферментами. При инфаркте миокарда наблюдается повышение активности АсАТ (в 2-20 раз). Увеличение активности начинается через 6-12 часов и возвращается к исходному уровню через 4-5 дней. При стенокардии активность АсАТ, как правило, остается в норме. При заболеваниях печени в первую очередь и наиболее значительно по сравнению с АсАТ изменяется активность АлАТ. При инфекционном гепатите максимум повышения отмечается на 6-10 день заболевания и постепенно возвращается к норме к 15-20 дню. Повышение активности АлАТ отмечается и при безжелтушной форме болезни Боткина. Механические желтухи, холангиты и ряд других заболеваний печени обычно не сопровождаются значительным повышением активности АсАТ и АлАТ и их соотношения (коэффициент де Ритиса). В норме этот коэффициент = 1,33±0,42. При паренхиматозных заболеваниях печени происходит снижение коэффициента, а при остром инфаркте миокарда он резко возрастает.

 

Проверка качества усвоения знаний (конечный уровень)

 

а) вопросы для защиты лабораторной работы

1. К каким ферментам (внутри- или внеклеточным) относятся аминотрансферазы?

2. Принцип определения активности аминотрансфераз.

3. При каких заболеваниях увеличивается активность аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови? Активность каких еще ферментов сыворотки крови увеличивается при этих заболеваниях?

4. Что такое коэффициент де Ритиса?

5. При каких патологиях и как изменяется коэффициент де Ритиса?

Date: 2015-05-22; view: 590; Нарушение авторских прав; Помощь в написании работы --> СЮДА...



mydocx.ru - 2015-2024 year. (0.007 sec.) Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав - Пожаловаться на публикацию