Полезное:
Как сделать разговор полезным и приятным
Как сделать объемную звезду своими руками
Как сделать то, что делать не хочется?
Как сделать погремушку
Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами
Как сделать идею коммерческой
Как сделать хорошую растяжку ног?
Как сделать наш разум здоровым?
Как сделать, чтобы люди обманывали меньше
Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили?
Как сделать лучше себе и другим людям
Как сделать свидание интересным?
Категории:
АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника
|
Лабораторная работа. 1. Определение активности a-амилазы в крови Оборудование: 1. Штатив с пробирками. 2. Мерная коническая пробирка
1. Определение активности a-амилазы в крови
Принцип метода. Метод основан на колориметрическом определении уменьшения концентрации крахмала в пробах после ферментативного гидролиза по сравнению с исходным уровнем, что служит мерой активности амилазы.
Ход работы. В 2 пробирки (опытная и контрольная пробы) наливают по 0,5 мл крахмального субстрата. Опытную пробу прогревают при 37ОС 5 мин, после чего добавляют в нее 0,01мл сыворотки и инкубируют 8 мин при 37ОС в термостате. Сразу же после инкубации опытной пробы в обе пробирки добавляют по 0,5 мл раствора йода и доводят объем проб до 5 мл дистиллированной водой. Сразу же колориметрируют их при красном светофильтре в кюветах толщиной 1 см против воды. Активность a-амилазы рассчитывают по формуле: (ЕК – ЕОП)/ЕК х 150 = г крахмала, гидролизованного 1л сыворотки за 1 час инкубации (г/л), где ЕК – оптическая плотность контрольной пробы, ЕОП – оптическая плотность опытной пробы, 150 – коэффициент пересчета на количество крахмала в г, гидролизованного 1 л сыворотки за 1 час инкубации. Норма активности амилазы в сыворотке – 16-30 г/л в час
2. Определение активности a- амилазы в моче
Работу проводят так же, как с сывороткой крови, только в опытную пробу вместо сыворотки добавляют 0,01 мл мочи, разведенной в 100 раз. При расчете активности фермента в формулу добавляют коэффициент, учитывающий разведение мочи. Норма активности амилазы в моче – 28-160 г/л в час 3. Определение активности a-амилазы в слюне
Работа проводится так же, как с сывороткой и мочой. В опытную пробу добавляют 0,01 мл разведенной в 10 раз слюны. При расчете учитывают коэффициент разведения. Норма активности амилазы в слюне – 320-640 г/л в час.
Диагностическое значение определения амилазы
Гиперамилаземия. При остром панкреатите активность амилазы крови возрастает в первые 12 – 24 часа в 10-40 раз, затем быстро снижается и приходит к норме на 2-6 сутки. При остром аппендиците, перитоните, перфоративной язве желудка и двенадцатиперстной кишки активность амилазы повышается в 3-5 раз. Гиперамилаземия наблюдается также при паротите. Гиперамилаземию вызывают: адреналин, гистамин, секретин, фуросемид, салицилаты, антикоагулянты, морфин, пантопон, опий, кодеин, тетрациклин, алкоголь. Гипоамилаземия. Чаще всего снижение активности амилазы свидетельствует о недостаточности экзокринной функции поджелудочной железы. Также встречается у больных гепатитами, циррозами, злокачественными опухолями с метастазами в печень, обширными ожогами кожи, сахарным диабетом, гипотиреозом, при интоксикациях. Гиперамилазурия. При остром панкреатите в суточной моче активность амилазы возрастает в 10-40 раз. При этом активность амилазы остается высокой до 7 суток. Отношение активности амилазы в крови к активности амилазы в моче служит показателем функциональной полноценности почечного фильтра. Проверка качества усвоения знаний (конечный уровень) А) Вопросы для защиты лабораторной работы 1. К какому классу ферментов относится амилаза? 2. Назовите субстраты для амилазы. 3. Где образуется амилаза и где действует? 4. Назовите продукты амилазной реакции. 5. Какой принцип лежит в основе метода определения активности амилазы? 6. С какой целью пробы помещают в термостат? 7. Для диагностики каких заболеваний используется определение активности амилазы в крови? моче? слюне? 8. Каковы причины снижения активности амилазы в крови? 9. Каковы причины увеличения активности амилазы в крови? 10. Каковы причины повышения активности амилазы в моче? 11. Чему равна норма активности амилазы в крови? В слюне? В моче?
б) Ситуационные задачи (УИРС) 1. Животному внутривенно ввели стерильный раствор сахарозы. Появится ли сахароза в моче? 2. Употребление в пищу кондитерских изделий, конфет вызывает у ребенка рвоту, понос. Он плохо переносит и сладкий чай, тогда как молоко не вызывает отрицательных реакций. Какой молекулярный дефект является причиной данных нарушений? 3. Больной страдает от судорог в мышцах при напряженной физической работе, но в остальном чувствует себя здоровым. Биопсия мышечной ткани выявила, что концентрация гликогена в мышцах этого больного гораздо выше нормы. Почему накапливается гликоген? Ваши рекомендации такому человеку. 4. Клинические симптомы двух форм галактоземии, одна из которых обусловлена недостаточностью галактокиназы, а другая - галактозо-1-фосфат-уридилтрансферазы, резко различаются по своей тяжести. И в том, и в другом случае молоко вызывает у больных кишечные расстройства, но при недостаточности галактозо-1-фосфат-уридилтрансферазы нарушаются функции печени, почек, селезенки и мозга, а затем наступает смерть. Какие продукты накапливаются в крови и тканях при недостаточности каждого из двух ферментов? Оцените сравнительную токсичность этих продуктов на основе приведенных выше данных. 5. Сделайте предположение о возможных причинах заболевания, если известно, что у больного, длительно страдающего хроническим заболева-нием кишечника – энтероколитом, после молочной пищи стали появляться метеоризм, диарея, колики. 6. Введение животным адреналина вызывает гипергликемию. Почему это не наблюдается у животных с удаленной печенью? 7. Какие реакции характерны для мобилизации гликогена в печени и мышцах? 1) гликоген → глюкозо-1-фосфат→ глюкозо-6-фосфат→ глюкоза 2) гликоген→ глюкозо-1-фосфат→ глюкозо-6-фосфат 3) гликоген → глюкозо-6-фосфат → лактат 4) гликоген → мальтоза А. Характерно для печени. Б. Характерно для мышц. С. Протекает и в печени, и в мышцах. Д. Не протекает ни в печени, ни в мышцах.
Date: 2015-05-22; view: 1587; Нарушение авторских прав |