П.5 выполняют вместе!

1. Определить концентрацию биомассы Х по значениям показателя оптической плотности D, измеренным по истечении 24 часов культивирования, а также по истечении 7 суток (168 часов). Для этого следует пользоваться калибровочным графиком D=f(X). Измерение оптической плотности производить трижды, рассчитать среднее по измеренным значениям. Усреднить значения оптической плотности для образцов суспензий из трех колб.

2. Измерить значения рН дрожжевой суспензии. Сделать вывод о накоплении продуктов метаболизма дрожжей.

3. Проанализировать чистоту культуры дрожжей, пользуясь препаратом «раздавленная капля» для микроскопирования образцов суспензии. Предварительно следует окрасить суспензию метиленовым синим. Зафиксировать изображение, полученное в окуляре микроскопа, в рабочей тетради. Проанализировать его путем сравнения с изображением, полученным в начале культивирования. Сделать выводы о морфологии дрожжей, наличии почкующихся и мертвых клеток (последние окрашиваются полностью).

4. Провести качественный анализ остаточного субстрата по результатам реакции Фелинга.

Реакция заключается в восстановлении моносахаридами окиси меди в закись меди (окисной формы меди в закисную). При проведении реакции используется реактив Фелинга, представляющий собой смесь медного купороса с сегнетовой солью в щелочной среде. При смешении медного купороса со щелочью происходит реакция:

CuSO₄ + 2NaOH → Cu(OH)₂ + Na₂SO₄

Для проведения реакции Фелинга необходимо:

к 2 мл исследуемого раствора добавить 1 мл раствора Фелинга F₁ и 1 мл раствора Фелинга F₂, нагреть на кипящей водяной бане. С восстанавливающими сахарами выпадает осадок оксида меди (I) (Сu₂O) оранжево-красного цвета.

5. Провести центрифугирование дрожжевой суспензии при 8000 об/мин в течение 20-30 минут (предварительно стаканчики для центрифугирования следует взвесить с точностью до 0,001 г). Фугат отбросить в канализацию. Взвесить стаканчики и определить массу влажного осадка.

6. Высушить осадок и определить массу сухого осадка. Для этого стаканчики с осадками помещают в сушильный шкаф при температуре 105 ^оС и сушат до постоянного веса. Затем стаканчики с высушенным осадком остужают в эксикаторе до температуры 20 ^оС и взвешивают.

7. Заполнить таблицу 9 на учебной доске и в рабочей тетради по образцу ниже и подготовить отчет по выполненной лабораторной работе.

Таблица 9 – Анализ процесса периодического культивирования дрожжей Saccharomyces cerevisiae

* -показатели, отмечаемые знаком «+ +», «+», «+ -», «-» или «- -».

3.3. Вопросы к коллоквиуму

по теме «Аэробные ферментационные процессы и биоснтез микробной массы»

1. Определение основных понятий: культивирование микроорганизмов, ферментация, биосинтез, биотрансформация, биоконверсия и др.

2. Характеристика глубинной ферментации.

3. Условия культивирования дрожжей в аэробных процессах. Периодическое культивирование биомассы.

4. Анализ процесса культивирования по результатам микроскопирования дрожжей.

5. Пекарские дрожжи и их питательная ценность

6. Получение биомассы других дрожжей

7. Промышленное получение БОО (кормовых дрожжей).

8. Методы контроля биосинтеза микробной массы и остаточного субстрата.

9. Построение калибровочных графиков для аналитических исследований роста микробных культур.

10. Сравнительная кинетика и динамика накопления дрожжевой биомассы в аэробном и анаэробном биосинтезе.