Полезное:
Как сделать разговор полезным и приятным
Как сделать объемную звезду своими руками
Как сделать то, что делать не хочется?
Как сделать погремушку
Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами
Как сделать идею коммерческой
Как сделать хорошую растяжку ног?
Как сделать наш разум здоровым?
Как сделать, чтобы люди обманывали меньше
Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили?
Как сделать лучше себе и другим людям
Как сделать свидание интересным?
Категории:
АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника
Я стадия
· в оптимальных условиях клетки
B. subtilis размножаются бинарным делением, при котором образуется перегородка в центре материнской клетки.
· при исчерпании питательного субстрата и высокой плотности популяции появляется первый признак споруляции – ассиметрично расположенная перегородка (спорулирующая септа)
Стадия
· клетка делится септой на 2 части:
· 1 – большой клеточный компартмент - развивается материнская клетка
· 2-й - меньший компартмент – будущая спора (предспора).
· Мембраны материнской клетки окружают меньший компартмент, формируя двойную мембрану вокруг предспоры.
3 стадия -образуется протопласт предспоры, покрытый 2-мембранной структурой (зародышевой клеточной стенкой).
4 стадия - между двумя мембранами откладывается пептидогликан – образование кортекса споры.
5 стадия – сборка белковых покровов споры.
6-я стадия - созревание - спора становится устойчивой к действию ф-х факторов и приобретает свойства покоящейся формы
На последней 7-й стадии происходит лизис материнской клетки с освобождением споры – обезвоженной покоящейся формы клетки, сильно преломляющей свет.
Функции эндоспор:
Способны выдерживать стресс, сохраняя жизнеспособность
Практически лишены воды, находясь в состоянии покоя, устойчивы к различным ф-х воздействиям:
· химические вещества,
· пониженная Т°
· повышенная Т°
· частично УФ-излучение.
Прорастание эндоспор
· Необходимо снять внутренний и внешний покой
· (напр. нагреванием - чтобы рецепторы споры восприняли сигнал).
· Для Bacillussubtilis сигналом служит аминокислота –аланин, при ее добавлении в среду споры начинают прорастать.
· Для других бактерий сигналы: глюкоза, фруктоза, ионы К+
Механическая стимуляция прорастания спор вызывает
· нарушение структуры оболочек,
· инициацию репарации ДНК,
· репликацию ДНК.
· В результате из споры может образоваться новая бактерия.
32. Бактериальные фимбрии (пили, ворсинки), классификация фимбрий
· Специализированные белковые структуры (пилин) на поверхности бактериальных КС.
· Цилиндрические образования, как правило, цельные внутри, реже полые (конъюгативные).
· Средняя длина 4-10 нм - до нескольких мкм.
· Ширина от 2 до 20 нм.
· Наряду с адгезией выполняют ряд других функций: реже перемещение (Pseudomonas aeruginosa) и передачу генетической информации.
· У клеток может быть одновременно несколько типов пилей.
Классификация фимбрий
1. Общего типа - к любым субстратам, контроль генами в составе хромосомы
2. Только к клеткам эпителия кишечника, контроль плазмидами - внехромосомная ДНК (E.coli)
3. Определяют повышенную способность к колонизации (Neisseria gonorrhoeae и N. meningitidis)
4. Для прикрепления и перемещения по субстрату с целью его колонизации (Pseudomonas aeruginosa)
5. Половые пили (sex-pili) - передача генетического материала в процессе конъюгации
33. Типы жгутикования, строение и работа жгутиков бактерий
Типы жгутикования
1. Монотрихиальный - единственный жгутик на полюсе – монотрих (Vibrio cholerae
2. Лофотрихиальный - пучок на одном полюсе клетки –– лофотрих (р. Pseudomonas)
3. Амфитрихиальный - пучки жгутиков на двух полюсах – амфитрих (р. Spirillum).
4. Перитрихиальный - жгутики по всей поверхности клетки – перитрих (р. Salmonella).
Типы движения
· 1. Подтягивающий тип движения – за счет фимбрий (Pseudomonas aeruginosa).
· 2. Движение плавающего типа. Осуществляется в жидких средах за счет наружных жгутиков – V.cholerae.
· 3. Движение по типу роения – по поверхности плотных питательных сред - Proteus vulgaris за счет наружных жгутиков по слизи.
· 4. Движение в вязких средах за счет периплазматических жгутиков. Спирохеты Treponema pallidum.
Строение бактериального жгутика
·Бактериальный жгутик – полая белковая структура спиралевидной формы (флагеллин).
·Жгутики можно опосредованно видеть в световой микроскоп (темнопольная микроскопия).
· Детали строения жгутика – видны только в электронном микроскопе.
Жгутики бактерий состоят из трёх субструктур:
• Нить филамента (фибрилла, пропеллер за пределами клетки) — полая белковая нить толщиной 10—20 нм и длиной 3—15 мкм, состоящая из флагеллина, 11 овальных субъединиц несократимых белков которого уложены под углом 45 по спирали и выполняют механическую функцию. Полость внутри используется при синтезе жгутика — он происходит в направлении от плазматической мембраны. По полости к собираемому в настоящий момент участку переносятся субъединицы флагеллина.
• Крюк — более толстое, чем филамент (20—45 нм), Крюк находится за пределами клетки; Состоит из 22 молекул белка.; Крюк поддерживает нить; Крюк, присоединяясь к БТ, определяет работу нити жгутика.
• Базальное тело (трансмембранный мотор)
БТ–основной генератор движения жгутика.
БТ встроено в клеточную стенку бактерии.
БТ состоит из нескольких дисков.
У Гр(-) бактерий – 4 диска.
Гр(+) - 3 диска.
Диски - белковые структуры.
Работа жгутиков
· Жгутик вращается за счет движения крюка.
· Вращение крюка происходит за счет ПДС.
· Н+ с внешней мембраны по системе дисков проходят до нижнего СМ-диска.
· отрицательно заряженные АК и белки за счет Н+ заряжаются положительно.
· При перескакивании Н+ происходит поворот жгутика.
· После поворота с карбоксильных групп АК Н+ уходят в цитоплазму.
· У бактерий могут быть разные типы жгутиков, работающие за счет Н+, или ионов Na+.
· Жгутик - мотор, работающий на Н+, или ионах Na+, а не на электронах.
Работа
· Жгутик работает как винт или пропеллер.
· Скорость вращения крюка – 300 об/сек
· Ср. скорость движения – 100 мкм/сек
· Самый быстрый пловец в мире МО –
· Vibrio cholerae
- 72 cм/час
· В сравнении с человеком - 100 км/час
34. Включения в цитоплазме бактерий
· В цитоплазме бактерий могут находиться включения - нерастворимые продукты клеточного метаболизма.
· Основная функция: запасание питательных веществ,
· хранение метаболитов при их избыточном образовании.
· Клеточные включения не имеют существенного значения для метаболизма, но обеспечивают преимущество на отдельных стадиях роста и в особых условиях обитания.
· Часто включения составляют значительную долю бактериальных клеток.
Включения могут иметь различную химическую природу:
· Полисахариды
· Полифосфатные гранулы – волютин
· Глобулы серы
· Глобулы жирных полигидроксикислот
· Белки
35. Особенности размножения бактерий
· У всех живых организмов рост клеток – это увеличение массы с последующим делением и образованием двух идентичных клеток.
Вегетативный клеточный цикл (ВКЦ)
· Период от деления до деления называется – вегетативным клеточным циклом (ВКЦ)
· ВКЦ включает несколько этапов:
· Репликация ДНК – удвоение генетического материала
· Расхождение двух наборов хромосом
· Деление клетки
Особенности клеточного цикла прокариот
· ВКЦ прокариот и эукариот во многом сходен.
· Однако есть отличие:
· Во время быстрого роста в одной бактериальной клетке может происходить 2 - 3 цикла репликации хромосом одновременно.
Этапы клеточного цикла E.coli
· До начала деления клетка накапливает массу и объем.
· Затем наступает период деления:
· репликация ДНК – 42 мин.
· расхождение дочерних хромосом - 64-67 мин.
· Главное условие деления клетки - удвоение ДНК!!!
Начальные стадии репликации ДНК
· Наиболее изучен первый этап клеточного цикла – репликация ДНК
· репликация ДНК включает 3 этапа:
1. инициация
2. элонгация
3. терминация
Инициация репликации
Включает 3 стадии:
1.Узнавание точки начала
репликации - oriC
2.Синтез РНК-затравки
3.Связывание ДНК-геликазы с матрицей
4. Связывание SSB-белков с матрицей
Элонгация
· рост реплицирующегося фрагмента (репликона).
· 1-я цепь (ведущая) – синтезируется непрерывным способом.
· 2-я цепь (отстающая) – синтезируется прерывисто путем образования фрагментов Оказаки (сшиваются лигазой).
· За синтез отвечают холоферменты (от англ. – объединяющие):
· ДНК-полимераза I
· ДНК-полимераза III
Териминация
· окончание процесса синтеза, т.е. завершение репликации - в точке terC.
· после завершения репликации бактерия переходит к следующему - 2-му этапу клеточного цикла -
Расхождению хромосом
· в процессе репликации и разделения цепей ДНК происходит их конденсация и суперспирализация
· непосредственно после завершения репликации 2 дочерние хромосомы спутаны и сцеплены
· чтобы разделиться они должны быть расцеплены
· затем хромосомы расходятся в стороны – в центры будущих дочерних клеток
Расхождение хромосом бактерий - соответствие митозу эукариот
· у бактерий нет микротрубочек как у эукариот в митозе
· аналогов центромер у бактерий пока не обнаружено
Бинарное мономорфное деление клеток
· бинарное деление материнской клетки и расхождение 2-х дочерних клеток происходит послерасхождения дочерних хромосом
· сначала в середине клетки образуется инвагинация ЦПМ и клеточной стенки
· процесс активируется пенициллинсвязывающим белком Pbp3 (принимает участие в синтезе пептидогликана клеточных перегородок)
· в центре клетки образуется специфическая белковая структура – перисептальное кольцо
Мономорфное деление
· после разделения материнской бактериальной клетки образуются две одинаковые дочерние клетки.
· нет материнской и дочерней клеток – это мономорфное деление – т.е. деление, при котором образуются две равноценные клетки.
· пример бессмертия!!!
Дифференцировка клеток (диморфный тип деления)
у почкующихся бактерий:
· p. Hyphomicrobium
Материнская клетка дает начало почке – дочерней клетке
Хромосома проходит через гифу
· p. Caulobacter
· водные стебельковые бактерии
· бактерия – мать может дать начало 4 дочерним клеткам
· Деление происходит с образованием двух разных клеток:
1. свободноживущая клетка (дочь или швермерная клетка)
2. стебельковая клетка (прикрепляется к поверхности.
36. Покоящиеся формы бактерий
VBNC –некультивируемые формы (покоящиеся) МО – нанобактерии. Методом ПЦР определили 15 тыс. фантомных генотипов некультивируемых форм (нанобактерий)
37. Методы микроскопии м/о
Виды микроскопии:
• Светлопольная (в проходящем свете)
• Темнопольная (прижизненное изучение в нативных неокрашенных препаратах) Явление дифракции света при сильном боковом освещении взвешенных в жидкости мельчайших частиц (эффект Тиндаля)
• Фазово-контрастная (нативные прозрачные объекты)На светло-сером фоне наблюдается темно-серый рельефный объект с ярко выраженным контуром. Применяется для исследования неокрашенных прозрачных объектов, в частности, живых клеток.
• Люминесцентная (флюоресцентная) –люминесценция объекта под влиянием света (живые и неживые объекты в небольшом количестве)
• Электронная микроскопия (сканирующая, просвечивающая)
38. Основные методы окраски м/о, применяемые в медицинской микробиологии
Окраска микроорганизмов - комплекс методов изучения структуры и морфологии микроорганизмов при микроскопии препаратов, приготовленных из чистых культур или исследуемого материала.
Методы окраски нативных препаратов
• Для витальной окраски микроорганизмов (окраски живых микроорганизмов) красители применяют в больших разведениях (1:10 000— 1:100 000), чтобы избежать артефактов, появляющихся в результате токсического действия красителя на живые микроорганизмы. Чаще всего для витальной окраски используют: метиленовый синий, нейтральный красный и др.
Методы окраски фиксированных препаратов
• Простые: окраска метиленовым синим, фуксином Пфейфера, Генциан-виолетом
• Сложные: окраска по методу Грама, окраска по Цилю — Нельсену, окраска по Романовскому — Гимзе
Метод окраски по Граму
· Краситель -генциановый фиолетовый
· Образуется комплекс
· После обработки спиртом одни бактерии обесцвечиваются, другие нет
· После специальной докраски сафранином, часть бактерий – розовые
· Часть – темно-синие или фиолетовые
39. Исследование м/о в окрашенном и неокрашенном состоянии
Методы выявления капсулы. Метод окраски по Бурри-Гинсу
• Смешать каплю взвеси бактерий с каплей туши, сделать мазок, высушить и зафиксировать.
• На мазок нанести водный раствор фуксина (на 1-2 минуты) промыть водой, высушить и микроскопировать.
Бактерии окрашиваются в розовый цвет, а неокрашенные капсулы контрастно выделяются на черно- розовом фоне.
Метод окраски по Цилю-Ни(е)льсену
• Нанести на мазок карболовый раствор фуксина и подогреть до появления паров в течение 3 - 5 минут,
• промыть водой нанести 5% раствор H2SO4 на 1-2 минуты
• промыть водой докрасить мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5 минут
• промыть водой, высушить и микроскопировать.
Раствор карболовой кислоты разрыхляет поверхностные структуры бактерий и тем самым повышает их тинкториальные свойства,
при этом вегетативные формы окрашиваются в красный цвет.
Метод окраски по Ожешко (и)
• На нефиксированный мазок нанести 0,5% раствор HCl и подогреть на пламени 2-3 минуты кислоту слить, препарат промыть водой, просушить, зафиксировать
• затем окрасить по Цилю-Нильсену
Раствор карболовой кислоты разрыхляет оболочку спор и тем самым повышает её тинкториальные свойства, при этом споры и вегетативные формы окрашиваются в красный цвет. При обработке препарата серной кислотой вегетативные формы обесцвечиваются и окрашиваются метиленовым синим в голубой цвет, а споры остаются красными.
Метод окраски зерен волютина по Нейссеру
• На фиксированный мазок нанести ацетат синьки Нейссера на 2 - 3 минуты
• добавить раствор Люголя на 10 - 30 секунд промыть водой
• мазок докрасить водным раствором везувина или хризоидина в течение 30 - 60 секунд
• промыть водой, высушить, микроскопировать желтый цвет.
Зерна волютина имеют щелочную реакцию, поэтому воспринимают ацетат синьки, окрашиваясь в темно-синий цвет. Цитоплазма, имея кислую реакцию, воспринимает везувин и окрашивается в желтый цвет.
Окраска жгутиков по методу Лёффлера
• Для окраски жгутиков используют клетки 12—16-часовой культуры.
• Клетки легко теряют жгутики в момент приготовления мазка, поэтому необходимо обращать внимание на чистоту стекла и способ нанесения на него суспензии.
• Высушенный мазок заливают протравой (смесь равных объемов гипертонического раствора хлорида натрия и танина) на 15 мин, промыть дистиллированной водой
• Препарат окрасить в течение 5 мин разбавленным фуксином Циля, промыть водой, высушить на воздухе.
Обращают внимание на расположение жгутиков, их количество и длину.
40. Понятие об идентификации бактерий
Комплексная система идентификации бактерий
• Микробиологический анализатор Multiskan FC
• Позволяет идентифицировать более 500 видов микроорганизмов и патогенных грибов.
• Система микробиологической диагностики включает оценку данных, полученных в результате проведения исследований по идентификации микроорганизмов и определении их антибиотикочувствительности in vitro, и коррекцию их на основании сведений о природной устойчивости или чувствительности отдельных микроорганизмов или их групп, о распространении среди них приобретенной резистентности, а также сведений о корреляции данных по чувствительности, полученных in vitro, клинической эффективности антибактериальных препаратов.
41. Способы культивирования
Методы культивирования анаэробных микроорганизмов
· Посев уколом анаэробных бактерий в столбик сахарного агара
· Изолированные по методу Вейнберга колонии анаэробов в сахарном агаре
Метод Виньял-Вейона
• в расплавленный и остуженный до 50°С агар вносят исследуемую анаэробную культуру, перемешивают и засасывают в пастеровскую пипетку, конец которой запаивают. Через 24 — 48 часов столбике агара вырастают ясно видимые колонии микроорганизмов — анаэробов
• Анаэростат предназначен для культивирования в чашках Петри микроорганизмов группы облигатных анаэробов и микроаэрофилов.
• Анаэростат представляет собой цилиндрическую емкость, герметично закрываемую с помощью ленточного замка. В крышку вмонтирован вакууметр и вентиль для присоединения вакуумного насоса и внешней системы источника газа.
• Создание анаэробной или микрофильной атмосферы для культивирования микроорганизмов в анаэростате может производиться двумя способами:
• • с помощью газогенерирующих пакетов типа Газпак;
• • вакуумзаместительным заполнением бескислородными газами (газовыми смесями).
Аппарат Киппа
• Для выращивания анаэробов в бескислородной среде можно использовать водородную атмосферу, образующуюся в аппарате Киппа действием серной кислоты на металлический цинк. Водород перед поступлением в сосуд с культурами проходит для удаления остатков кислотыты и О, через промывные склянки с 10 % раствором азотнокислого свинца и с щелочным раствором пирогаллола.
СРЕДА КИТТА-ТАРОЦЦИ
Среда Китт-Тароцци — содержит кусочки печени, обладающие высокой адсорбционной способностью, 0.5% глюкозы. Перед посевом среду кипятят на водяной бане не менее 15 минут, сверху заливают слоем вазелиного масла, чтобы предохранить посев от проникновения кислорода.
Среда Вильсона — Блера
Содержит глюкозу, сернисто-кислый натрий, хлорид железа. Анаэробы образуют черные колонии за счет восстановления сернисто-кислого натрия в сернистый натрий, который, соединяясь с хлоридом железа, образуют осадок черного цвета -сернистое железо.
СОВМЕСТНОЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЕ АЭРОБОВ И АНАЭРОБОВ
(МЕТОД ФОРТНЕРА)
В чашке с сахарным агаром вырезается «полоска» для невозможности смешивания разных культур бактерий.
С одной стороны выполняется посев культуры аэробных бактерий, с другой – умеренно строгих анаэробов.
Чашка закрывается, ее края запаиваются парафином (с целью не допустить попадания воздуха, кислорода внутрь чашки). Сначала вырастают в присутствии кислорода аэробы, а затем – анаэробы.
ФАГОИДЕНТИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ ПО МЕТОДУ ОТТО (МЕТОД СТЕКАЮЩЕЙ КАПЛИ)
На чашку с МПА шпателем выполняется посев суточной бульонной выделенной культуры бактерий. Затем наносят каплю известного бактериофага и, наклонив чашку, дают капле несколько растечься по поверхности питательной среды. Через сутки наблюдают полную задержку роста в месте внесения диагностического фага.
ФАГОИДЕНТИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ ПО МЕТОДУ ФЮРТА
• В расплавленный и остуженный МПА (45-500С) добавляют определенный бактериофаг и выливают в чашку Петри. Чашка с полученным агаром делится на несколько секторов, в каждый из которых засеваются неизвестные культуры, выделенные от больных. Там, где культура соответствует бактериофагу, наблюдается отсутствие роста (лизис) бактерий.
ФАГОТИПИРОВАНИЕ БАКТЕРИЙ ПО МЕТОДУ ФИШЕРА
• Испытуемую суточную бульонную культуру засевают на МПА, затем условно делят чашку на квадраты. В каждый квадрат наносят по одной капле различных фагов. После суточной инкубации в термостате отмечают квадраты, в которых отмечается лизис бактерий. Фаготип бактериальной культуры определяется типом лизирующего ее фага.
ТИТРОВАНИЕ БАКТЕРИОФАГА ПО МЕТОДУ ГРАЦИА
Ряд последовательных разведений фага по 1,0 мл смешивают в пробирке с 0,5 мл бактериальной культуры и добавляют в эту же пробирку расплавленный МПА. Все содержимое выливают в чашку с МПА. Дают застыть верхнему тонкому слою и ставят в термостат. При встрече фага с бактерией, происходит лизис последней и образуется негативная колония фага. Такие негативные колонии затем подсчитывают для определения титра. Титром фага называют количество фаговых частиц в 1 мл препарата фага.
42. Классификация и назначение питательных сред
Классификация питательных сред:
• Натуральные – состоят из продуктов животного или растительного происхождения и имеют неопределенный химический состав. Например: овощные и фруктовые соки, животные ткани, кровь, молоко, яйца и т.д. (МПА, МПБ).
• Полусинтетические – в состав входят соединения известной химической природы и вещества неопределенного состава. Например: МПБ с глюкозой, среда Эндо, среда Сабуро.
• Синтетические – содержат только химически чистые соединения в точных концентрациях. Применяют в лабораторных экспериментах. Например: среда Чапека, Омелянского, Ушинского и т.д.
Назначение питательных сред
• Универсальные (общего назначения)- пригодны для выращивания многих видов микроорганизмов и применяются как основа для специальных питательных сред. Примеры: МПБ, МПА, среда Хоттингера, ГРМ, тиогликолевая среда.
• Специальные применяют в тех случаях, когда микроорганизмы не растут на простых средах. К ним принадлежит кровяной, сывороточный агар, сывороточный бульон, асцитический бульон, асцит-агар и другие.
1. Элективные среды - на них одни микроорганизмы растут быстрее и более интенсивно, чем другие виды бактерий. Например, 1 % щелочная пептонная вода является элективной средой для холерных вибрионов, среды Ру и Леффлера – для возбудителей дифтерии.
2. Селективные -благодаря селективным добавкам (желчь, краски, антибиотики и др.) способны подавлять развитие одних видов микроорганизмов, но не влияют на другие виды. Примеры: среда Мюллера является селективной для тифо-паратифозных бактерий, фуразолидоно-твиновий агар – для коринебактерий и микрококков. Добавление антибиотиков в состав сред делает их селективными для грибов (напр. среда Сабуро и др.).
3. Дифференциально-диагностические - группа сред, которые позволяют определить биохимические свойства микроорганизмов и провести их дифференциацию. Они разделяются на среды для определения протеолитических, пептолитических, сахаролитических, гемолитических, липолитических, редуцирующих свойств (среды Эндо, Левина, Плоскирева, Гисса).
Date: 2015-09-26; view: 610; Нарушение авторских прав; Помощь в написании работы --> СЮДА... |