Применение фотометрических реакций в фармацевтическом анализе

Спектрофотометрический метод широко используется для идентификации, установления количественного содержания и определения чистоты веществ. Данный метод с успехом применяется также для количественного анализа многокомпонентных смесей.

В ряде случаев для фотометрического определения ЛС используют видимую область спектра. Анализ основан на проведении цветных реакций с последующим измерением оптической плотности на спектрофотометрах и фотоколориметрах [1].

3.1 Реакция диазотирования и азосочетания

Разработаны методики фотоколориметрического определения производных фенола: синэстрола (мезо‑3,4‑ди-(4’,4”‑гидроксифенил)-гексан), диэтилстильбэстрола (транс-3,4-ди-(4’,4”-гидроксифенил)-гексен-3) и других лекарственных веществ, содержание которых в лекарственных формах составляет один или несколько миллиграммов на основе реакции азосочетания с диазотированной сульфаниловой кислотой. Данные ЛС обладают гиполипидемическим действием. Образуется азокраситель за счет наличия в молекулах фенольных гидроксилов, имеющий цвет от ярко-оранжевого до кроваво-красного. В этих случаях применение титриметрии неприемлемо [1].

Синэстрол

Диэтилстильбэстрол

Продукт реакции азосочетания синэстрола с диазотированной сульфаниловой кислотой имеет вид:

Аналогичный продукт реакции дает диэтилстильбэстрол.

3.2 Индофеноловая проба

Разработан метод концентрирования и определения следовых количеств п -аминофенола в парацетамоле. Парацетамол обладает жаропонижающим действием. Разработанный метод основан на реакции п -аминофенола с 2-(2-гидроксифенил)-1Н-бензимидазолом (ГФБИ) при комнатной температуре в присутствии окислителя, которая приводит к образованию окрашенного в голубой цвет индофенола. Данная методика успешно применена для определения п -аминофенола в присутствии парацетамола в различных лекарственных средствах [23]. Общая схема реакции представляется следующим образом:

3.3 Нингидриновая проба

Спектрофотометрия в видимой области использована для определения тиамина бромида по реакции с нингидрином [4]. Продукт реакции имеет сине-фиолетовое окрашивание.

Тиамина бромид

Общая схема нингидриновой пробы:

Нингидрин Восстановленная форма

нингидрина

Продукт конденсации сине-

фиолетового цвета

Разработана методика спектрофотометрического определения калия аспарагината в ЛС «Аспаркам». Аспаркам - это ЛС, которое имеет в своем составе калий и магний, является антиаритмическим ЛС. Установлены оптимальные параметры проведения реакции аспарагинат-иона с нингидрином в присутствии аскорбиновой кислоты при длине волны 568 нм [24].

Калия аспарагинат

Для количественного определения γ-амино-β-фенилмасляной кислоты в субстанции салифена по реакции с нингидрином разработана фотометрическая методика. Салифен обладает антидепрессантным и анальгетическим действием. Найдены оптимальные условия для проведения фотометрической реакции. Установлено, что среднее содержание γ-амино-β-фенилмасляной кислоты в субстанции салифена составляет 72,12 ± 0,73% при относительной погрешности определения ± 1,02%. Валидационная оценка предлагаемой методики показала, что она характеризуется удовлетворительной линейностью, правильностью и сходимостью результатов [3].

γ-амино-β-фенилмасляной кислоты гидрохлорид - химическое название

3.4 Цианидиновая проба

Разработаны методики определения флавоноидов. Флавоноиды обладают антибактериальным, противоотечным действием, а также Р-витаминной активностью. Методики их определения основаны на образовании желтых окрашенных продуктов с хлоридом алюминия в среде уксусной кислоты (406-410 нм), для стандартизации гомеопатических настоек, получаемых из туи [12] и чистотела [17].

Авторами [7] разработан метод количественного фотометрического определения ДКВ. ДКВ является ценным биологически активным веществом: применяется в качестве антиоксиданта. Диквертин - ЛС на основе ДКВ, обладает антиоксидантными свойствами, капилляропротекторной, противоотечной и радиопротекторной активностью, оказывает гепатопротекторное действие. Метод позволяет определять дигидрокверцетин в смеси с другими соединениями без выделения его в чистом виде. Сущность метода состоит в переводе бесцветного ДКВ в окрашенное соединение и измерении интенсивности окраски полученного раствора. Оптическую плотность измеряли на фотоэлектроколориметре КФК-3 при 550 нм [7].

3.5 Реакции комплексообразования

Фотометрические реакции лежат в основе образования окрашенных продуктов желтого цвета реакций анестезина, новокаина, новокаинамида с 4-хлор-5,7-динитробензофуразаном [14]. Общая схема реакции выглядит следующим образом:

Разработан простой, точный и чувствительный спектрофотометрический метод определения прометазингидрохлорида (ПМГХ), прохлорперазинмалеата (ПХПМ), трифторперазингидрохлорида (ТФПГХ), тримеперазинтартрата (ТМПТ), флуфеназиндигидрохлорида (ФФДГХ), трифторпромазингидрохлорида (ТФПГХ): антигистаминных ЛС. Метод основан на окислении лекарственных средств известным избытком хлорамина Т в среде соляной кислоты и последующем определении непрореагировшего окислителя путем непосредственного воздействия на него йодида в той же кислой среде. Выделяющийся при этом йод реагирует с крахмалом, образуя устойчивый йодокрахмальный комплекс. Количество вступившего в реакцию окислителя соответствует содержанию определяемых веществ [25].

Для установления подлинности папаверина гидрохлорида применяется реакция с реактивом Марки (концентрированная серная кислота с добавлением формалина). Папаверина гидрохлорид является спазмолитическим ЛС. Реакция является специфичной для папаверина и используется при его фотоколориметрическом определении. Сущность этой реакции заключается в том, что после обработки папаверина реактивом Марки образуется сульфат метиленбиспапаверина, который легко окисляется, приобретая фиолетовое окрашивание [16].

Папаверина гидрохлорид

С реактивом Марки:

Сульфат метиленбиспапаверин

Спарфлоксацин - ЛВ, обладающее выраженным бактерицидным действием. Для определения спарфлоксацина в ЛС используется 1, 2-нафтохинон-4-сульфонат натрия. Продукт реакции имеет максимум поглощения при 458 нм и устойчив в течении 70 минут [8].

Спарфлоксацин

Описан метод анализа ЛС, а именно солей метформина гидрохлорида и фенилпропаноламина гидрохлорида, относящихся к группе гипогликемических ЛС. В этом способе определения водный раствор ЛС обрабатывают измеренным избытком нитрата серебра в присутствии азотной кислоты, с последующим определением непрореагировавшего нитрата серебра методом Фольгарда с использованием титранта тиоцианата аммония и железоаммонийных квасцов. Точка эквивалентности определяется спектрофотометрически. Образуется комплексное соединение красного цвета из-за присутствия железа [22].

Метморфина гидрохлорид

ГФ РБ предлагает метод фотоколориметрического определения для адреналина и норадреналина для инъекций. В основе определения лежит реакция комплексообразования ЛС с цитратом железа, комплекс поглощает λ=530 нм. Метод очень точный, расчет ведут по стандартному образцу [5].

Адреналин

Норадреналин

Адреналин и норадреналин являются адреномиметическими средствами.

Соединение типа фенолята железа

При исследовании возможности определения ПФЛ в таблетках “Диклопентил” производства РУП «Белмедпрепараты» (состав: диклофенака натрия - 50 мг; ПФЛ - 100 мг) оказалось, что раствор диклофенака натрия при взаимодействии с гипохлорит-ионами приобретает устойчивое желтое окрашивание в присутствии ПФЛ. Это наблюдение послужило основой для разработки способа идентификации диклофенака натрия и ПФЛ в одной пробе без предварительного разделения. ПФЛ применяется при нарушении периферического кровообращения, при диабетических ангиопатиях. Окрашенный продукт имеет характерный спектр поглощения в видимой области с максимумом при 461 нм, что и определяет желто-оранжевую окраску раствора [20]:

В статье [21] рассмотрены количественные методы для определения диклофенака в ЛС в видимой области спектра. Цветная реакция осуществляется непосредственно в измерительной ячейке сразу после смешивания с использованием небольших объемов анализируемого раствора реагента и буферными растворами. Калибровочные кривые были построены (рисунок 3) от 1,0 до 18 мг/мл^-1 диклофенака натрия (калия) диклофенака с типичным коэффициентом корреляции равным 0,999. Предел обнаружения около 0,7 мг/мл^-1. Этот метод был применен для определения диклофенака в твердых и жидких ЛФ [21].

Рисунок 3 - Спектр отражения комплекса меди (II)-диклофенака натрия в водном растворе