Выделение чистой культуры анаэробов

Первичные посевы анаэробов делают в анаэробных условиях на среду обогащения (СКС или тиогликолевая среда, Китта-Тароцци), после определенной экспозиции делают высев на плотные питательные среды: сахарный кровяной агар, сахарный агар и др. При появлении роста делают пересев микробов на СКС или Китта-Тароцци для получения чистой культуры.

1. Метод Цейсслера. Исследуемый материал рассевают штрихами по поверхности плотной среды, помещают в анаэробные условия при 37⁰ С на 24-72 ч. Колонии пересевают на среду для контроля стерильности или Китта-Тароцци для выделения чистой культуры.

2. Метод Вейнберга. Несколько капель исследуемого материала вносят в пробирку с 4-5 мл 0,85 % раствора хлорида натрия, перемешивают запаянным капилляром и переносят в пробирку с охлажденным до 45-50⁰ С сахарным агаром, разлитым высоким столбиком После перемешивания этим же капилляром последовательно, без промежуточной стерилизации капилляра, засевают еще 2 пробирки с сахарным агаром и быстро охлаждают. Выросшие через 24-72 ч в глубине агара изолированные колонии засевают на СКС или Китта-Тароцци.

3. Метод Перетца. Готовят разведения исследуемого материала в пробирках с сахарным агаром, для чего разливают его по высоким столбиком. В первую пробирку вносят 3-4 капли исследуемого материала, перемешивают запаянным капилляром и не стерилизуя переносят его в другие пробирки. Содержимое пробирок выливают в соответствующие чашки Петри, на дне которых лежит стеклянная пластинка 6х6 см. Среду заливают так, чтобы она попала между пластинкой и дном чашки. При появлении роста бактерий пластинку удаляют, а колонии пересевают на указанные выше среды.

4. Метод Вайона-Виньяла. Готовят разведения исследуемого материала как указано выше в пробирках с сахарным агаром. Пастеровской пипеткой насасывают из каждой пробирки материал, после чего концы пипеток запаивают. После получения роста бактерий пипетку разламывают и переносят в СКС или в Китта-Тароцци.

Разновидность метода Перетца. Материал засевают вместе с сахарным агаром на крышку чашки Петри и закрывают до

нышком чашки. Щель между их краями заливают парафином.

Рост и размножение микроорганизмов.

Бактериальные клетки размножаются в результате деления. Основные стадии размножения микробов в жидкой среде в стационарных условиях:

- лаг- фаза (начальная стадия адаптации с медленным темпом прирости биомассы бактерий);

- экспоненциальная (геометрического роста) фаза с резким ростом численности популяции микроорганизмов (2 в степеии n);

- стационарная фаза (фаза равновесия размножения и гибели микробных клеток);

- стадия гибели - уменьшение численности популяции в связи с уменьшением и отсутствием условий для размножения микроорганизмов (дефицит питательных веществ, изменение рH, rH₂, концентрации ионов и других условий культивирования).

Данная динамика характерна для периодических культур с постепенным истощением запаса питательных веществ и накоплением метаболитов.

Если в питательной среде создают условия для поддержания микробной популяции в экспоненциальной фазе- это хемостатные (непрерывные) культуры.

Характер роста бактерий на плотных и жидких питательных средах: сплошной рост, образование колоний, осадок, пленка, помутнение.