ГБОУ ВПО «Кемеровская ГМА» МЗ РФ

БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

УДК 616.89-008.1:613.81-575.174.015.3

ББК Р53-57

Изучение полиморфизма rs1611115 (-1021C/T) гена

Дофамин-β-гидроксилазы (DBH) у лиц с алкогольными психозами и здоровых доноров Кемеровской

Области

Волков А. Н.¹, Селедцов А. М.*²,

Сомова Н. В.³

ЦНИЛ ГБОУ ВПО «Кемеровская ГМА» МЗ РФ

650066, Кемерово, пр. Октябрьский, 16а

ГБОУ ВПО «Кемеровская ГМА» МЗ РФ

650029, Кемерово, ул. Ворошилова, 22а

³ ГКУЗ КО «Кемеровская ОКПБ»

650060, Кемерово, ул. Волгоградская, 41

Цель исследования: выявление связи между -1021C/T с полиморфизмом гена DBH и предрасположенностью к развитию алкогольных психозов. Проанализированы образцы ДНК 316 субъектов славянской этнической принадлежности (116 больных, перенесших алкогольные психозы, 200 здоровых – контроль). Для выявления -1021C/T полиморфизма использовали метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Установлено отсутствие отличия частот обсуждаемого генетического маркёра между здоровыми донорами и лицами с алкогольными психозами, проживающими на территории Кемеровской области. Ключевые слова: генный полиморфизм, дофамин-бета-гидроксилаза (DBH), алкогольный психоз.

The study of polymorphism rs1611115 (-1021C/T) gene dopamine-β-hydroxylase (DBH) in patients with alcohol psychosis and healthy controls of the Kemerovo region. Volkov А. N.¹, Seledtsov A. M.², Somova N. V.^{3 1} Central Research Laboratory « Kemerovo State Medical Academy », 650066, Kemerovo, Oktyabrsky Avenue, 16а. ² «Kemerovo State Medical Academy». 650029, Kemerovo, Voroshilov’s Street., 22а. ³ «Kemerovo Regional Clinical Psychiatric Hospital». 650060, Kemerovo, Volgogradskaya Street, 41. The aim of this study was to determine the association of -1021C/T polymorphism of the dopamine beta-hydroxylase (DBG) gene and predisposition to development of alcohol psychosis. The authors genotyped DNA samples from 316 Russian males (116 patients with alcohol psychosis and 200 healthy controls). Polymorphisms were identified using PCR. Absence of differences frequencies of genetic markers under discussion between healthy donors and those with alcohol psychosis living in the Kemerovo region has been shown. Key words: gene polymorphism, dopamine beta-hydroxylase, alcohol psychosis.

Введение. Современные представления об этиологии алкоголизма позволяют причислить данное заболевание к мультифакториальным патологиям. При их реализации участвуют как генетические, так и негенетические, средовые факторы [1—10]. Наследование предрасположенности к наркологическим заболеваниям относят к полигенному типу, предрасполагающему вовлечённость и, вероятно, взаимодействие нескольких генов. Выявление информативных кандидатных генов и их полиморфных элементов позволило бы формировать группы повышенного риска еще на донозологическом этапе и, возможно, в ряде случаев предотвращать развитие патологического процесса.

Значение наследственной предрасположенности для формирования алкогольных психозов остается изученным недостаточно. К числу перспективных генетических маркеров повышенного риска патологии относят, в частности, гены нейромедиаторов ЦНС, ферментов-участников синтеза нейромедиаторов и соответствующих рецепторов [1, 2, 7, 10, 11]. Так, неоднократно предпринимались попытки установить ассоциацию между полиморфизмом гена дофамин-β-гидроксилазы (DBH), продуцирующего одноименный фермент (D β H), и характером течения и осложнений алкоголизма [1, 10, 11].

В качестве полиморфного маркера DBH в ряде исследований выступал сайт rs1611115, характеризующийся в популяциях человека нуклеотидным полиморфизмом -1021C/T [1, 10]. К настоящему времени однозначно удалось установить наличие выраженного эффекта данной нуклеотидной замены на экспрессию гена, что проявляется в заметном изменении активности D β H в плазме крови [10, 12, 13]. В то же время исследования ассоциации указанного полиморфизма и рассматриваемой патологии немногочисленны, а их результаты подчас противоречивы.

Целью данной работы стало выявление связи между полиморфизмом -1021C/T маркера rs1611115 гена DBH и предрасположенностью к развитию алкогольных психозов.

Материал и методы. Контрольная выборка (n=200) была сформирована из жителей Кемеровской области обоих полов европеоидной принадлежности, не имеющих установленного диагноза «алкогольный психоз». По нашему мнению, это достаточно репрезентативная выборка для оценки популяционной частоты генетических вариантов маркера rs1611115 среди жителей данного региона. Средний возраст обследованных составил 21,0±0,18 года при варьировании показателя от 17 до 30 лет.

Группа обследованных с диагностированным алкогольным психозом (n=116) включала мужчин и женщин, средний возраст которых составил 26,6±0,27 года и находился в пределах 19–31 года. Все представители данной группы находились на учете и проходили лечение в Кемеровской областной клинической психиатрической больнице.

Молекулярно-генетическое исследование проведено в центральной научно-исследова-тельской лаборатории ГБОУ ВПО КемГМА Минздрава России. Источником ДНК послужили образцы цельной венозной крови или буккальные соскобы, взятые у обследованных. Выделение ДНК осуществляли сорбентным методом (в случае соскобов) либо термокоагуляционным методом (в случае использования крови) с использованием реагентов производства НПФ «Литех». Для идентификации полиморфизма -1021C/T маркера rs1611115, локализованного в гене DBH, применяли амплификацию соответствующих участков генома методом аллель-специфической полимеразной цепной реакции с последующей детекцией ампликонов в 3 % агарозном геле. В работе использованы тест-системы, разработанные в НПФ «Литех» (Москва).

Для верификации результатов молекулярно-генетического анализа 15 % образцов ДНК здоровых доноров подвергали повторной ПЦР. После вторичного генотипирования все ранее определенные генотипы подтвердились.

Для статистической обработки данных использовался пакет программ «Statistica 6.0». Рассчитывались частоты генотипов и аллелей по изучаемому маркеру для двух групп обследованных. Соотношения генотипов и аллелей в сравниваемых группах сопоставлялись с помощью метода χ² для таблиц 2х2 с использованием поправки Йетса в случаях наличия в таблице малых численностей. Достоверным считали отличия, соответствующие уровню p<0,05.

Результаты и обсуждение. На начальном этапе исследования проведена оценка популяционно-генетических характеристик полиморфного маркера rs1611115 (-1021C>T) гена DBH среди жителей Кемеровской области европеоидной этнической принадлежности (главным образом русских). Такое исследование позволит сделать заключение о степени полиморфности маркера в одной из популяций жителей юга Западной Сибири и определить целесообразность его использования в исследованиях генетических факторов предрасположенности к мультифакториальным заболеваниям.

Частота наиболее распространенного генотипа СС в изученной нами выборке составила 55,5 %, гетерозиготы СТ встречались с частотой 40,5 %, наконец, носители сочетания ТТ составили лишь 4,0 % выборки (табл. 1). Такое распределение генотипов соответствовало частотам аллелей С – 75,7 %, T – 24,3 %. Соотношение генотипов изучаемого маркера достоверно не отличалось от ожидаемого в соответствии с уравнением Харди-Вайнберга.

Таблица 1