Антагонистическая активность в отношении фактора активации тромбоцитов

Фактор активации тромбоцитов является эндогенным фосфолипидным медиатором воспаления, продуцируемым воспалительными клетками, такими как альвеолярные макрофаги, эозинофилы, тучные клетки, базофилы, тромбоциты и нейтрофилы в ответ на аллергические/воспалительные раздражители (49). Было показано, что он участвует в различных биологических реакций и патологических состояний. Наиболее значимой для данного обзора является его связь с увеличением сосудистой проницаемости, хемотаксисом эозинофилов, бронхоспазмом, гиперчувствительностью дыхательных путей и их участием в патофизиологии ринита и бронхиальной астмы. Кроме того, фактор активации тромбоцитов был обнаружен в воспалительных элементах кожи, наблюдаемых при крапивнице и псориазе, но он отсутствует в нормальной коже, а внутрикожная инъекция этого фосфолипида вызывает волдыри и кожную реакцию, типичную для крапивницы (50).

Исследования связывания. В исследованиях связывания радиоактивно меченого лиганда с рецептором рупатадин вытеснял сильный и селективный антагонист фактора активации тромбоцитов, WEB-2086, из центра его связывания на мембранах тромбоцитов кролика со значением Ki 550 нМ. В этой модели он был в 25 раз менее активным, чем SCH-37370 (двойной антагонист рецепторов фактора активации тромбоцитов и гистаминовых рецепторов) и в 2,5 раза менее активным, чем специфический антагонист рецепторов фактора активации тромбоцитов гинкголид-B (37).

Эксперименты in vitro и исследования с участием животных и людей. Рупатадин проявлял конкурентную активность антагониста фактора активации тромбоцитов в субмикромолярном диапазоне in vitro со значениями IC_50, равными 0,2 и 0,68 мкМ, в моделях оценки агрегации тромбоцитов в отмытых тромбоцитах кролика и обогащенной тромбоцитами плазме человека, соответственно (37). В этих моделях активность рупатадина как антагониста фактора активации тромбоцитов была ниже активности специфических антагонистов фактора активации тромбоцитов WEB-2086 и гинкголида-B, но значимо больше активности антигистаминных препаратов, таких как лоратадин, кетотифен, мепирамин и терфенадин (Таблица 3). Аналогичным образом, рупатадин (IC₅₀ 4,6 мкМ) был значимо активнее лоратадина (IC₅₀ 142 мкМ), цетиризина (IC₅₀ > 200 мкМ) и фексофенадина (IC₅₀ > 200 мкМ) в отношении индуцированной фактором активации тромбоцитов агрегации в обогащенной тромбоцитами кроличьей плазме. Рупатадин был специфическим ингибитором фактора активации тромбоцитов и не подавлял агрегацию тромбоцитов, вызванную АДФ или арахидоновой кислотой в концентрациях до 100 мкМ (37).

Антагонистическая активность рупатадина в отношении фактора активации тромбоцитов была оценена на различных животных моделях, при этом получены следующие результаты:

1 Рупатадин был более чем в 30 раз активнее лоратадина (IC₅₀ 0,0096 мг/кг vs > 0,3 мг/кг) в ингибировании индуцированного фактором активации тромбоцитов бронхоспазма у морских свинок (37), и более чем в 10 раз активнее лоратадина в снижении индуцированной фактором активации тромбоцитов гипотензии у нормотензивных крыс (IC₅₀ 0,44 мг/кг vs > 5 мг/кг) (37).

2 Рупатадин проявлял дозозависимую активность в отношении индуцированного фактором активации тромбоцитов образования волдырей у собак, и эти эффекты были значимо большими, чем эффекты других антигистаминных препаратов, таких как цетиризин, левокабастин и лоратадин (40). В этой модели пик действия рупатадина отмечали через 4 часа, его действие продолжалось 12-48 час в зависимости от введенной дозы.

3 Рупатадин был эффективен в отношении индуцированного фактором активации тромбоцитов конъюнктивита у морских свинок. В этой модели ни лоратадин, ни левокабастин не продемонстрировали никакой значимой активности антагониста фактора активации тромбоцитов (39, 41).

4 Рупатадин оказывал протективный эффект в отношении индуцированной фактором активации тромбоцитов смертности у мышей. В этой модели его активность составляла, примерно, одну треть от активности WEB-2086, а лоратадин был не эффективен (35).

Активность рупатадина в уменьшении кожных реакций, индуцированных фактором активации тромбоцитов, была подтверждена в исследовании по подбору оптимальной дозы на здоровых добровольцах (28). В этом перекрестном клиническом исследовании наблюдали следующие дозозависимые эффекты:

1 Рупатадин 10 мг значимо снижал площадь поражения кожи максимально на 41% через 24 часа.

2 Рупатадин 20 мг снижал площадь поражения кожи на 42% через 6 часов с возрастанием до максимального значения 56% через 24 часа, и это действие сохранялось до 48 часов;

3 Рупатадин 40 мг снижал площадь поражения кожи на 68% через 4 часа с возрастанием до максимального значения 87% через 6 часов, и это действие оставалось выше 60% до 72 часов после применения.

4 Рупатадин 80 мг снижал площадь поражения кожи на 91% через 4 часа с возрастанием до максимального значения 93% через 48 часов, и это действие сохранялось до 96 часов после приема препарата.

Таблица 3. Концентрация различных антигистаминных препаратов/антагонистов фактора активации тромбоцитов, вызывающая 50% ингибирование (IC₅₀) ФАТ-индуцированного антагонизма агрегации тромбоцитов в отмытых тромбоцитах кролика и обогащенной тромбоцитами плазме человека (37)

*Концентрация, оказывающая действие, эквивалентное рупатадину.

Та же группа показала, что однократный пероральный прием рупатадина 40 и 80 мг значимо ингибировал ex vivo ФАТ-индуцированную агрегацию тромбоцитов у здоровых добровольцев. Ингибирование агрегации тромбоцитов начиналось не позднее 2 часов, достигало максимума через 4 часа, не наблюдалось значимого действия антагониста фактора активации тромбоцитов через 24 час после применения (28).

Другие противовоспалительные/противоаллергические эффекты рупатадина

Разработка “противоаллергических” антигистаминных препаратов, которые не только блокируют действие гистамина, но также изменяют дегрануляцию тучных клеток, ингибируют миграцию воспалительных клеток и/или блокируют образование ЛТ, должна способствовать лучшему облегчению симптомов заболевания (31). Описанные выше исследования подтверждают действие рупатадина на гистаминовые H₁-рецепторы и показывают, что в отличие от многих других антигистаминных препаратов первого и второго поколений, он вызывает специфическое и конкурентное ингибирование рецепторов фактора активации тромбоцитов. Кроме того, его противоаллергическая /противовоспалительная активность распространяется за пределы этих классических путей, о чем свидетельствует его активность в моделях in vitro, таких как ингибирование дегрануляции тучных клеток и хемотаксиса эозинофилов, а также его активность in vivo в моделях гиперчувствительности 1 типа. Более широкий спектр противоаллергической активности рупатадина на воспалительные клетки и медиаторы будет рассмотрен в этом разделе.

Действие на тучные клетки. Как отмечено ранее, дегрануляция тучных клеток играет важнейшую роль в ранней фазе аллергической реакции; также считается, что это приводит к поздней фазе аллергической реакции, в которой тучные клетки и другие воспалительные клетки являются ключевыми участниками. Было показано, что рупатадин ингибирует вызванную иммунологическими и неиммунологическими стимулами дегрануляцию тучных клеток, изолированных из кожи сенсибилизированных собак (28, 42-44). В этой модели эффект рупатадина был сравним с действием лоратадина (Рис. 3). Оба препарата ингибировали высвобождение гистамина концентрационно-зависимым образом без статистически значимых различий между ними, хотя имелась тенденция к большему общему эффекту рупатадина. Другие исследования показали, что рупатадин не только ингибировал высвобождение депонированных медиаторов, таких как гистамин, но также снижал высвобождение LTC₄ из тучных клеток брюшины крыс и высвобождение ФНО-α из тучных клеток кожи собак, а также из линии тучных клеток человека. Считается, что эти свойства могут оказывать положительное действие на позднюю фазу аллергической реакции (40, 44, 51).

Ингибирование высвобождения гистамина (%)

Лоратадин Рупатадин SR-27417A

Рисунок 3. Средний процент ингибирования вызванного антигеном (Ascaris suum) высвобождения гистамина из тучных клеток кожи собаки рупатадином, лоратадином и антагонистом фактора активации тромбоцитов SR-27417A. (Из Queralt и др. 1998 (43). Перепечатано с разрешения John Wiley & Sons, Inc.).

Действие на эозинофилы и нейтрофилы. При рините привлечение эозинофилов, нейтрофилов и других эффекторных клеток, как часть поздней фазы аллергической реакции, лежит в основе клинических проявлений заболевания. В ряде исследований изучали влияние рупатадина на функции воспалительных клеток в различных моделях воспалительного процесса.

Barron и др. (52) показали, что рупатадин в концентрациях 10-100 нМ ингибировал хемотаксис эозинофилов человека, вызванный эотаксином, и это действие не зависело от источника эозинофилов: здоровые добровольцы или доноры с эозинофилией.

% эозинофилов в лейкоформуле

Рисунок 4. Процент эозинофилов лейкоформулы в мазке бронхоальвеолярного лаважа (BAL), полученного от морских свинок, сенсибилизированных овальбумином, после повторной стимуляции аллергеном и предобработки только наполнителем (C), рупатадином (Rup), лоратадином (Lor) или цетиризином (Cet).*P < 0,05 vs контроль. (Из Merlos и др. 1998; 53).