Определение основных групп биологически активных веществ

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

___________________________________________

Корневища лапчатки прямостоячей ФС 42 -

Rhizomata potentillae erectae Взамен ФС 42-0294-07

____________________________________________________________________

Собранные в фазу цветения и высушенные корневища дикорастущего и культивируемого многолетнего травянистого растения лапчатки прямостоячей – Potentilla erecta L. Raeusch. – (sin Potentilla tormentilla Neck.), сем. розоцветные – Rosaceae.

Подлинность

Внешние признаки. Цельное сырье. Цельные или разрезанные на куски корневища, длиной от 2 до 9 см, толщиной не менее 0,5 см, прямые или изогнутые, часто неопределенной формы (цилиндрические или почти шаровидные, комковатые); твердые, тяжелые, с ямчатыми следами от отрезанных корней и бугристыми рубцами от стеблей. Излом зернистый.

Цвет снаружи от красновато-коричневого до темно-коричневого (почти черного), на изломе – желтовато-, розовато- или коричневого цвета. На поперечном разрезе под лупой виден слой пробки темно-коричневого цвета, светло-желтая кора и древесина, и сердцевина розоватого цвета. Запах слабый, ароматный. Вкус водного извлечения вяжущий.

Измельченное сырье. Кусочки корневищ неопределенной формы с бугристой наружной поверхностью и мелкозернистым изломом, проходящие сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм. Цвет от желтоватого, розоватого, желтого до темно-коричневого. Встречаются кусочки с остатками мелких корней и следами их прикрепления; редко - кусочки тонких корней. Наружная поверхность от красновато-коричневого до темно-коричневого (почти черного) цвета; излом желтовато-, розовато- или коричневого цвета. Запах слабый, ароматный. Вкус водного извлечения вяжущий.

Порошок. Кусочки корневищ неопределенной формы с зернистой поверхностью, проходящие сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Цвет от красновато-коричневого до темно-коричневого цвета с вкраплениями желтого, желтовато-коричневого или почти черного цвета. Изредка встречаются тонкие удлиненные кусочки желтого цвета (фрагменты волокнистых пучков) или кусочки темного цвета (наружная поверхность корневищ). Запах слабый, ароматный. Вкус водного извлечения вяжущий.

Микроскопические признаки. Цельное сырье. При рассмотрении поперечного среза корневища видно, что оно имеет непучковое строение. Покровная ткань – пробка, состоит из прямостенных таблитчато расположенных тонкостенных клеток темно- коричневого цвета. Под пробкой залегает коровая паренхима, клетки которой округлые или слегка сдавлены в тангенальном направлении. Паренхима флоэмы представлена мелкими тонкостенными клетками. Механические ткани в коре отсутствуют. Линия камбия не всегда четко выражена. Древесина рассеяно сосудистого типа. Сосуды немногочисленные, широкие, в поперечном сечении округлые или радиально овальные, одиночные или в небольших радиальных группах по 2-3 (до 8). Сосуды прилегают к довольно крупным участкам либриформа, образующих радиальные ряды и придающих специфический характер анатомической структуре корневища. Волокна расположены прерывистыми радиальными полосками концентрическими кругами. Между радиальными рядами проводящей и механической ткани проходят широкие сердцевинные лучи из тонкостенной паренхимы. Сердцевина занимает больший объем и состоит из крупноклеточной тонкостенной паренхимы.

В коровой паренхиме, во флоэме, сердцевинных лучах и сердцевине содержатся включения в виде крахмальных зерен и друз оксалата кальция. Количество этих включений варьирует. Иногда клетки буквально набиты крахмальными зернами. Крахмальные зерна мелкие.

Измельченное сырье. При рассмотрении давленых препаратов видны: обрывки пробки темно-коричневого цвета, состоящей из прямостенных таблитчаторасположенных тонкостенных клеток; обрывки паренхимы, состоящие из округлых или слегка удлиненных тонкостенных клеток с друзами оксалата кальция и крахмальными зернами; обрывки сосудов ксилемы различной толщины с лестничным и сетчатым типом вторичного утолщения клеточных стенок; группы толстостенных узкополосных пористых волокон или их обрывки.

Порошок. При рассмотрении порошка видны: обрывки пробки темно-коричневого цвета; обрывки паренхимы, клетки которой содержат друзы оксалата кальция или отдельные друзы оксалата кальция; обрывки паренхимы, клетки которой содержат крахмальные зерна; обрывки сосудов ксилемы с лестничными и сетчатыми утолщениями клеточных стенок; обрывки толстостенных узкополосных пористых волокон.

Определение основных групп биологически активных веществ

1.Тонкослойная хроматография.

На линию старта хроматографической пластинки размером 10×15 см в виде полосы 5×1 мм наносят 20 мкл (0,02 мл) испытуемого раствора в соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания дубильных веществ в лекарственном растительном сырье». Рядом наносят по 5 мкл (0,005 мл) 0,05% стандартных образцов танина и кислоты галловой.

Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение
5 мин, помещают в камеру со смесью этилацетат-кислота муравьиная-вода (70:15:15) и хроматографируют восходящим способом. Смесь растворителей заливают в камеру за 1 ч до хроматографирования.

Когда фронт подвижной фазы пройдет 12 см от линии старта, пластинку вынимают из камеры, высушивают на воздухе в течение 30 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 360 нм. На хроматограмме должны быть видны 5 зон адсорбции: одна – на уровне зоны адсорбции стандартного образца кислоты галловой (Rf 0,94); другая – на уровне зоны адсорбции стандартного образца танина (Rf 0,81), 3 дополнительные зоны адсорбции с Rf около 0,66; 0,18; 0,08, имеющие коричневую флюоресценцию (флавоноидов).

Примечание

Раствор стандартного образца кислоты галловой. Около 0,05 г (точная навеска) стандартного образца кислоты галловой помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл спирта 70 % и перемешивают до полного растворения. Доводят объем раствора до метки тем же растворителем.

Раствор стандартного образца танина. Около 0,05 г (точная навеска) стандартного образца танина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл спирта 70 % и перемешивают до полного растворения. Доводят объем раствора до метки тем же растворителем.

Тест на пригодность хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме растворов сравнения, используемых для проверки чувствительности хроматографической системы, четко видны пятна стандартных образцов кислоты галловой (Rf 0,94) и стандартного образца танина (Rf 0,81).

1.К 2-3 мл отвара корневищ лапчатки (1:10) прибавляют 4-5 капель железоаммонийных квасцов раствора 1 %, должно наблюдаться зеленовато-черное окрашивание, постепенно переходящее в черно-синее (дубильные вещества).

2. На поперечный срез корневищ, соскоб частиц измельченных корней или порошок наносят 2-3 капли железоаммонийных квасцов раствора 1 %, должно наблюдаться черно-синее окрашивание (дубильные вещества).

Числовые показатели. Цельное сырье. Дубильных веществ не менее 20 %; экстрактивных веществ, извлекаемых водой, не менее 35 %; влажность не более
14 %; золы общей не более 5 %; золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоты, не более 3 %; корневищ, почерневших в изломе, не более 5 %; кусочков корней, листьев, стеблей не более 1 %; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм не более 10 %; органической примеси не более 0,5 %; минеральной примеси не более 1 %.

Измельченное сырье. Дубильных веществ не менее 20 %; экстрактивных веществ, извлекаемых водой, не менее 35 %; влажность не более 14 %; золы общей не более 5 %; золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоте, не более 3 %; кусочков корневищ, почерневших в изломе, не более 5 %; кусочков корней, листьев, стеблей не более 1 %; частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, не более 10 %; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, не более 10 %; органической примеси не более 0,5 %; минеральной примеси не более 1 %.

Порошок. Дубильных веществ не менее 20 %; экстрактивных веществ, извлекаемых водой, не менее 35%; влажность не более 14 %; золы общей не более 5 %; золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоте, не более 3 %; частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм, не более 10 %; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,25 мм, не более 10 %.

Рисунок 1 – 1 – фрагмент поперечного среза: пробка (а), кора (б), друзы (в), камбий (г), сердцевинный луч (д), ксилема (е), клетки паренхимы сердцевины с крахмальными зернами (ж) (ув. × 35), 2 – клетки пробки (ув. × 600), 3 – клетки флоэмы (луба), камбия, друзы оксалата кальция (ув. × 120), 4 – клетки паренхимы коры, друзы оксалата кальция (ув. × 300), 5 – либриформ, сосуды ксилемы (ув. × 300), 6 – обрывки сосудов ксилемы (ув. × 300), 7 – обрывки волокон (либриформ) (ув. × 300), 8 – клетки паренхимы с крахмальными зернами (ув. × 300).