Лабораторная диагностика ротавирусной диареи свиней

Ротавирусы - важнейшие энтеропатогены неонатального периода животных многих ви­дов, включая свиней. Энтеропатогенность ротавирусов свиней (РВС) подтверждается ш способностью вызывать тяжелые гастроэнтериты и атрофию ворсинок в экспериментальных условиях у поросят-гнотобиотов и поросят, не получавших молозива, в отсутствие других возбудителей, Ротавирусная инфекция свиней (РВИС) наблюдается во всех странах с развитым свиноводством.

Для диагностических исследований отбирают образцы кала или содержимого кишечни­ка при остром заболевании. Наибольшая концентрация РВС отмечается в течение 12-24 ч после начала диареи.

Для выявления РВС используют ряд методов, включая ЭМ, ИЭМ, ИФА, изоляцию, ре­акцию латекс-агглютинации, дот-блот-гибридизации, РНК-электрофоретипирование.

Индикация вируса. ЭМ и ИЭМ. Это основной метод выявления вируса. Он позволяет обнаруживать раз­личные группы РВ. Морфология и тип вирусных частиц, обнаруживаемые в негативно контрастированных препаратах, изменяются при окрашивании и зависят от серогрупп РВС. Не­гативное окрашивание фосфорно-вольфрамовой кислотой (ФВК) при нейтральном рН выяв­ляет предпочтительно 1-слойные капсиды, тогда как ФВК при рН 4,5 или уранилацетат вы­являют 2-слойные частицы. Ядро частиц выявляется у РВС группы В. ИЭМ позволяет дифференцировать различные серогруппы РВС.

ИФА. Часто используется для выявления вирусспецифического АГ в фекалиях или со­держимом кишечника и более чувствителен, чем латекс-агглютинация, но менее чувст­вителен чем ЭМ. Электрофоретипирование вирусной РНК часто используется для обнаружения и дифференциации серогрупп РВС, но эти результаты должны быть подтвер­ждены серологически. Дот-блот-гибридизация используется как альтернатива для индика­ции и идентификации групп РВ и их серотипов.

Выделение вируса. У 90-100% поросят до 5-6-нед возраста можно обнаружить РВ в фекалиях. Продолжительность экскреции вируса, как правило, не превышает 1 нед. Изоляты получены из фекалий в клеточных культурах (клетки МА-104). На различном числе пасса­жей наблюдался типичный ЦПЭ, вирусный АГ обнаруживали в цитоплазме инфицирован-ных клеток в ИФ. Адаптация РВ к клеточным культурам подтверждена также с помощью I методов ЭМ и ИФА.

Серологическая диагностика. Разработан метод гемагглютинации и РТГА с РВС I (шт. S-80). ГА вируса получают при репродукции его в клетках МА-104, предварительно обработанных трипсином. Вирус агглютинирует эритроциты человека типа А, В и О, морской свинки и свиней. Титр РГА с эритроцитами морской свинки равен 1:8 - 1:128. Максималь- ный титр ГА отмечен при инкубации вируса с эритроцитами в течение ночи при 4°С. Титр I АТ к РВ со шт. S-80 в РТГА достигает 1:320 и коррелирует с РН (r~0,66). Серологическая (ретроспективная) диагностика имеет небольшое значение в диагностике РВИС, поскольку АТ широко распространены в стаде. Однако титр АТ и серотип отражают иммунный статус животных. Помимо вышеописанной реакции АТ к РВС могут выявляться в непрямой ИФ. Для этого линию клеток МА-104 заражают одной из групп РВС (А, В или С). После куль­тивирования клетки фиксируют в смеси ацетон-метанол и используют в качестве АГ в не­прямой ИФ. С этой же целью можно использовать криосрезы слизистой оболочки кишечни­ка больных поросят. В непрямой ИФА и РТГА обычно выявляют АТ к групповому АГ. ИФА, комбинированный с типоспецифическими монАТ, используют для определения клас­сов АТ к РВС. ВНА выявляются в реакциях подавления бляшкообразования или по­давления фокусов ИФ.